孙月
- 作品数：16 被引量：66H指数：6
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- Ac-SDKP对AngⅡ诱导的人胚肺MRC-5细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用
- 2014年
- 目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）对血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导的人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用.方法 实验分为2部分：（1）采用不同浓度AngⅡ诱导48 h,采用100 nmol/L AngⅡ诱导不同时间点,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;（2）实验分组为对照组、AngⅡ诱导组、Ac-SDKP干预组、cAMP直接激活的交换蛋白（Epac）蛋白特异性激活剂（8-Me-cAMP）干预组,免疫细胞化学染色法观察α-SMA的表达,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、血清反应因子（SRF）及其转录辅因子肌相关转录因子（MRTF）-A、Epac 1、2的表达.结果 AngⅡ能够明显诱导MRC-5细胞Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,并具有一定的剂量和时间依赖效应.免疫细胞化学染色可见AngⅡ诱导组细胞质内出现明显的α-SMA阳性显色,同时诱导组SRF、MRTF-A、α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调,分别是对照组的3.4、3.5、3.3、6.8倍,Epac1蛋白表达下调,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与AngⅡ诱导组比较,8-Me-cAMP干预组和Ac-SDKP干预组胞质内α-SMA阳性显色减弱,同时SRF、MRTF-A、α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达下调,Epac1蛋白表达上调,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ac-SDKP能够通过上调Epac1蛋白抑制AngⅡ诱导人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化.
- 李世峰杜世璞薛新新徐丁洁徐洪孙月邓海静杨奕魏中秋田景瑞杨方
- 关键词：肺纤维化
- Ac-SDKP在抑制人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化中的作用被引量：4
- 2015年
- [目的]探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过抑制热休克蛋白27(HSP27)的表达,而抑制转化生长因子1(TGF-β1)诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的分化以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。[方法]用5 ng/m L的TGF-β1诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549 72 h,并分为对照组、TGF-β1诱导组和10-8 mol/L Ac-SDKP干预组。采用倒置相差显微镜观察A549细胞上皮-间质转化中细胞形态变化;免疫细胞化学法检测角蛋白(CK8)、波形蛋白的定位;Western blot法检测E-钙黏蛋白(E-cad)、CK8、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及HSP27以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达。[结果]在TGF-β1的诱导下,A549细胞向肌成纤维细胞的形态转变,伴随着上皮标志物CK8、E-cad降低,分别是对照组的40%和50%,而间质细胞标志物波形蛋白、α-SMA表达增强,同时伴随HSP27及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达增强,分别是对照组的1.9倍、1.8倍、1.9倍以及2.2倍、2.5倍(P<0.05)。给予Ac-SDKP干预后,CK8、E-cad表达上调,分别是TGF-β1的诱导组的2.6倍、2.0倍;而波形蛋白、α-SMA、HSP27及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低,分别是TGF-β1的诱导组的68%、66%、74%以及66%、44%(P<0.05)。[结论]Ac-SDKP能够通过对HSP27表达的调节,而抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原蛋白的合成。
- 邓海静李世峰孙月张丽娟薛新新杜世璞徐洪杨方
- 关键词：上皮-间质转化肌成纤维细胞热休克蛋白27
- 新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立被引量：10
- 2014年
- 目的肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外肌FB分化模型的建立。方法分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB,倒置相差显微镜观察原代培养,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导FB向肌FB分化。结果采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB,2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异,但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞,且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA,需经TGF-β1诱导分化为肌FB。随TGF-β1诱导时间的延长,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调。结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB,4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型。
- 孙月徐洪徐丁洁魏中秋于婉莹邓海静薛新新杜世璞杨方
- 关键词：成纤维细胞原代培养肌成纤维细胞
- TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用被引量：21
- 2013年
- 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。
- 马文东袁媛杨奕徐洪邓海静于婉莹孙月魏中秋杨方
- 关键词：转化生长因子Β肌成纤维细胞肺纤维化
- AcSDKP对矽肺大鼠TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导途径调节与作用被引量：5
- 2014年
- 目的 观察转化生长因子-β （TGF-β）Ⅰ型、Ⅱ型受体、P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在矽肺大鼠和肺成纤维细胞的分布与表达,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导通路调节与其抗矽肺纤维化作用的关系.方法 非暴露式支气管内灌注法制作大鼠矽肺模型,分为对照组,矽肺模型组和AcSDKP治疗组（每组10只）.培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、受体阻断剂组、P38MAPK特异性抑制剂干预组和AcSDKP干预组.免疫组化法、免疫印迹法（Western-blot）检测TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体、P38 MAPK蛋白以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.用实时定量荧光聚合酶链式反应（real-time PCR）法检测TGF-β Ⅰ型和Ⅱ型受体mRNA的表达.用激光扫描共聚焦显微镜法检测磷酸化P38在肺成纤维细胞内分布与核转位的情况.结果 在动物模型中,AcSDKP治疗组大鼠肺组织内TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是矽肺模型组的86.12％、41.01％和42.63％;AcSDKP治疗组Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,分别是矽肺模型组的89.05％和52.71％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.在培养的肺成纤维细胞实验中,AcSDKP干预组TGF-β1诱导刺激的TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体mRNA的表达分别是TGF-β1刺激组的42.26％和54.33％;TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的58.14％、51.40％和45.6％;AcSDKP干预组磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位,核浆比值减少,为TGF-[β1刺激组的68.60％;Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达降低,分别是TGF-β刺激组的58.04％和44.74％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 AcSDKP能够抑制TGF-β受体介导的P38 MAPK信号转导途径,从而抑制胶原蛋白的表达,进而发挥其抗矽肺纤维化的作用.
- 魏中秋孙月程华马文东徐洪李倩张丽娟王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺受体
- Ac-SDKP对ROCK通路介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用被引量：6
- 2013年
- 目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）是否能够通过对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的ROCK通路的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化.方法 胰酶消化法原代培养肺成纤维细胞,取4代肺成纤维细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组、Y-27632干预组和Ac-SDKP干预组.激光共聚焦扫描显微镜观察ROCK、SRF以及d-SMA在细胞内的定位与分布情况;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测ROCK、SFR、α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在肺成纤维细胞的表达;实时定量荧光聚合酶链反应法（Real time PCR）检测ROCK、SFR、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组相比较,给予TGF-β1诱导刺激后,激光共聚焦扫描显微镜显示胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝,诱导刺激6、12、24 h后,ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增强,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与TGF-β1诱导分化组比较,给予Y-27632干预后,在相应时间点ROCK、SRF、d-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.给予Ac-SDKP干预后,在相应时间点ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达也较TGF-β1诱导分化组明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化和抑制胶原蛋白的合成,可能是Ac-SDKP发挥其抗（矽）肺纤维化的作用机制之一.
- 袁媛杨方徐洪于婉莹孙月邓海静马文东魏中秋王瑞敏
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸
- Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用。方法无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO21 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只)。采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P<0.05),并具有一定时间依赖性。与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化。
- 李淑钰徐洪孙月袁媛邓海静马文东魏中秋杨奕王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺
- 氨氯地平与厄贝沙坦联合治疗糖尿病肾病合并高血压的效果
- 2024年
- 目的:探讨氨氯地平与厄贝沙坦联合治疗糖尿病肾病合并高血压的临床效果。方法:选取本院2021年09月-2022年09月收治的80例高血压合并糖尿病肾病患者,运用随机数表法将其均分为对照组(厄贝沙坦)和观察组(氨氯地平与厄贝沙坦联合)。结果:观察组治疗后收缩压、舒张压均低于对照组(P<0.05);.观察组治疗后FBG、2hPBG均明显低于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:氨氯地平与厄贝沙坦联合治疗糖尿病肾病合并高血压的临床效果显著,可有效降低患者血压及血糖水平,为该疾病的综合治疗提供了一种有效的药物组合方案。
- 孙月
- 关键词：氨氯地平厄贝沙坦
- Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的比较蛋白组学研究被引量：9
- 2014年
- 目的 通过蛋白质组学的研究技术手段,筛选Ac-SDKP抗矽肺纤维化疗效和矽肺肺组织中与病变相关的特异蛋白质.方法 非暴露式支气管一次性灌注二氧化硅（SiO2）构建大鼠矽肺模型（4、8周）,并予以Ac-SDKP抗纤维化治疗和预防治疗,对照组（4、8周）支气管灌注等量氯化钠溶液.提取肺组织蛋白样品经双向电泳分离,胶体考马斯亮蓝染色显示蛋白点.扫描输入计算机,用ImageMaster 6.0图像分析软件对凝胶进行分析,差异蛋白判定标准为该蛋白点在两组间（对照组4、8周组分别与矽肺4、8周组比较,Ac-SDKP抗纤维化治疗组与矽肺8周组比较,Ac-SDKP预防治疗组与矽肺8周组比较）差异有统计学意义（P＜0.05）,且volume％值上下变化超过30％.将凝胶中的差异蛋白点切出,经胶内胰蛋白酶解,并行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得肽质量指纹谱并对蛋白质进行分析.结果 共筛选到33个差异蛋白,其中与对照4周组比较,矽肺4周组有17个差异蛋白表达上调,11个差异蛋白表达下调;与对照8周组比较,矽肺8周组有16个差异蛋白表达上调,12差异个蛋白表达下调;与矽肺8周组比较,Ac-SDKP抗纤维化治疗组有5个蛋白表达上调,6个差异蛋白表达下调;与矽肺8周组比较,Ac-SDKP预防治疗组有8个差异蛋白表达上调,10个差异蛋白表达下调.结论 筛选到与矽肺纤维化形成和Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用相关的差异蛋白,多涉及调控细胞增殖、凋亡、炎症反应和上皮-间质转化,以及信号转导通路等多方面的功能.
- 徐洪薛新新杜世璞李世峰孙月袁媛邓海静魏中秋王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺蛋白组学
- Ac-SDKP经由Epac信号抑制矽肺肌成纤维细胞分化的作用及机制被引量：6
- 2015年
- [目的]观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartly-lysyl-proline,AcSDKP)能否通过对环腺苷酸活化的交换蛋白(exchange protein activated by c AMP,Epac)信号的活化,抑制矽肺大鼠及促血管生成素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的肌成纤维细胞分化。[方法]构建矽肺大鼠模型,分为对照组(4、8周组),矽肺模型组(4、8周组),Ac-SDKP抗纤维化治疗组及Ac-SDKP预防治疗组;采用Ang Ⅱ诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5向肌成纤维细胞分化,并予以Ac-SDKP和Epac特异性活化剂8-Me-c AMP(8-p CPT-2′-O-Me-c AMP)预处理。HE及Masson染色观察肺组织病理形态。免疫组织(细胞)化学染色法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth mucle actin,α-SMA)的定位,Western blot法检测I型胶原、α-SMA和Epac蛋白的表达。[结果]在矽肺模型组中,出现明显矽结节,结节内可见α-SMA标记的肌成纤维细胞阳性表达;Western blot法检测矽肺组织中I型胶原、α-SMA表达上调,而Epac1表达下调;给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗能够抑制该变化。给予Ang Ⅱ诱导,可见MRC-5细胞胞浆内出现明显的α-SMA阳性显色;Western blot法中可见α-SMA和I型胶原蛋白表达上调;而予以8-Me-c AMP或Ac-SDKP预处理,能够上调Epac1,抑制Ang Ⅱ诱导的α-SMA和I型胶原蛋白表达的上调。[结论]Ac-SDKP能够通过对Epac信号的活化,在体内外抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞分化和胶原沉积,从而发挥抗矽肺纤维化的作用。
- 杜世璞薛新新李世峰孙月王小君刘燕邓海静徐丁洁徐洪杨方
- 关键词：血管紧张素矽肺肌成纤维细胞
