- AFP启动子对绿色荧光蛋白在人肝癌细胞中表达的影响被引量：3
- 2001年
- 目的研究AFP5′端3.1kb启动子序列对GFP在人肝癌细胞中表达的影响。方法首先采用重组DNA技术,构建了由AFP5′端前导序列AFP启动子+AFPEI增强子,3.1kb调控的绿色荧光蛋白GFP报告基因哺乳动物表达载体pcDNA3-GFP-AFP-w,然后将pcDNA3-GFP-AFP-w、pcDNA3-GFP及空载(pcDNA3-neo)经lipofectin分别转染Bel7402、Hela二种肿瘤细胞,G418抗性筛选得到含各不同质粒的稳定阳性细胞克隆,Westernblotting和密度积分扫描检测GFP基因的表达。结果转染pcDNA3-GFP-AFP-w细胞的GFP表达量在Bel7402中明显高于Hela细胞,在Hela细胞中GFP几乎不表达,但均低于相应转染pcDNA3-GFP的细胞,呈现一定的专一性。结论AFP5′端3.1kb启动子序列调控的GFP报告基因载体pcDNA3-GFP-AFP-w对Bel7402肝癌细胞呈现一定的细胞专一性。
- 茆灿泉黄常志杨树德赵玫范云霞徐枫杜菲
- 关键词：报告基因GFPAFP启动子转染绿色荧光蛋白肝癌
- HBV启动子调控的GFP在肿瘤细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 :研究HBV启动子调控下的GFP报告基因在肿瘤细胞中的表达。方法 :采用DNA重组技术 ,将GFPs65T和HBV的EⅡmCMV启动子 (增强子 )亚克隆到哺乳动物表达载体pcDNA3 中 ,构建了pcDNA3 GFP ,pcDNA3 GFP EⅡ ,pcDNA3 GFP EⅡ w3种含GFP的重组质粒 ,在Lipofectin介导下分别转染Hela和Bel740 2肿瘤细胞 ,经G418抗性筛选 ,挑选阳性克隆并扩大培养用于荧光和Westernblotting检测 ,利用GELDoc2 0 0 0数字成像系统对GFP蛋白表达进行定量分析。结果 :酶切和电泳表明重组质粒构建正确 ;获得了稳定转染各质粒的阳性细胞克隆 ;经Westernblotting检测 ,亲本和空载细胞的GFP值在本底范围 ,GFP转染的各细胞 ,均可检测到 2 7kD的GFP目的蛋白 ;EⅡmCMV启动子调控的Hela GFP EⅡ ,Hela GFP EⅡ w表达的GFP量均低于Hela GFP ;pcDNA3 GFP EⅡ w在Bel740 2细胞中的表达量明显高于其在Hela细胞中的表达量。结论 :HBV启动子调控下的GFP报告基因能够在肝癌Bel740 2细胞中表达并具有一定的专一性。
- 茆灿泉黄常志赵玫范云霞徐枫杜菲杨树德
- 关键词：基因转染GFPHBV启动子基因调控
