李少璃
- 作品数：18 被引量：44H指数：4
- 供职机构：惠州学院生命科学系更多>>
- 发文基金：广东省重大科技专项广东省科技计划工业攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 一种可溶性大肠杆菌表达质粒及其用途
- 本发明提供了一种在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达蛋白质/多肽的重组质粒及其应用。通过本发明提供的重组质粒在大肠杆菌中融合表达拟表达的蛋白质/多肽，融合蛋白/多肽的可溶性产物可以达到表达产物的90％以上。本发明还提供了该重...
- 曹永长谢青梅李少璃陈丽覃健萍马静云毕英佐
- 文献传递
- 间接ELISA及RT-LAMP技术应用于流感诊断的研究
- 李少璃
- H1N1亚型猪流感病毒HA基因的表达及单克隆抗体的制备被引量：7
- 2008年
- 采用RT-PCR方法扩增了H1N1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的血凝素(HA)基因,测序后对HA基因进行了生物信息学分析。将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上,成功构建重组表达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达。诱导表达的HA融合蛋白分子质量约为94.0 ku,表达产物占菌体总蛋白的29.5%。经Western-blot分析证实可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单克隆抗体的筛选,成功筛选到2株针对HA蛋白抗原表位的单克隆抗体;ELISA结果表明,制备的SIV单克隆抗体ⅢF6A4C10与H1N1亚型SIV抗原具有特异的免疫反应性,为H1N1 SIV的鉴别诊断奠定了基础。
- 张祥斌谢青梅马静云曹永长冀君李少璃毕英佐
- 关键词：H1N1亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体
- H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测技术被引量：8
- 2010年
- 根据GenBank中H5N1亚型流感病毒HA基因保守区的序列，设计1组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增，建立RT～LAMP反应体系，优化LAMP反应条件，最佳等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物加入核酸染色剂SYBRI和4mmol／L Mg^2＋，结果可视。扩增产物可用特异性内切酶KpnI进行酶切鉴定。用已建立的RT—LAMP技术检测临床样品，检测结果与RT—PCR方法一致。RT—LAMP技术整个检测过程只需1～2h，不需要PCR仪和成像系统，仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验，验证了建立的RT-LAMP技术可以作为一种操作简单，灵敏性、特异性高的检测H5亚型禽流感病毒的方法。
- 谢青梅曹永长张祥斌李少璃冀君马静云毕英佐
- 关键词：H5亚型禽流感病毒HA
- H_5、H_9亚型禽流感病毒和新城疫病毒的多重RT-PCR检测
- 2006年
- 根据Genbank注册发表的H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的HA基因序列,设计多对引物,每种病毒各筛选出一对特异性好、灵敏度高的引物,其中FP1/FP2扩增H5亚型AIVHA基因片断长为545bp;P3/P4扩增H9亚型AIVHA基因片断长为321bp;P11/P22扩增NDVHA基因片断长为672bp。用RT-PCR方法,通过特异性试验、灵敏度试验,H5、H9亚型AIV和NDV引物的灵敏度分别达到了1:104、1:108、1:104稀释度,与传染性支气管炎(IB)、传染性法氏囊病(IBD)、传染性喉气管炎(ILTV)、传染性鼻炎(IC)、霉形体(MS)、H1N1猪流感等抗原无交叉反应。实验结果表明,本研究建立了检测H5、H9亚型AIV和NDV的多重RT-PCR方法,混合引物的最佳退火温度为50℃,鉴定检测仅需4小时。
- 谢青梅王敬师李少璃陈丽马静云曹永长毕英佐
- 关键词：新城疫病毒
- 鸡传染性支气管炎病毒CQ/01/2004株的分离与鉴定被引量：9
- 2006年
- 2004年从重庆某肉用鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集病料,按常规处理后接种9～10日龄鸡胚,通过鸡胚连续传代培养3代,并对该分离毒株的鸡胚致病性、血凝性和NDV的干扰特性进行检测,同时进行了动物回归试验。结果表明,该分离株具有IBV感染特征,可使鸡胚胚体出血、蜷缩、矮化;该分离毒株无直接血凝性,对NDV有明显的干扰作用;动物回归试验中有75%的感染鸡在10d内发病或死亡。剖检病死鸡可见肾苍白、肿胀,肾小管内充塞大量尿酸盐,支气管有出血点、有大量粘液。采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对CQ/01/2004的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定,结果表明该基因具有IBVS1基因的共有分子特征,将测序结果提交GenBank进行同源性检索,发现分离株CQ/01/2004和J株S1的同源性最高,核苷酸同源性为94%,氨基酸同源性为89.4%,与M41的核苷酸同源性为80.6%,氨基酸同源性为78.0%。试验结果表明,分离的病毒株CQ/01/2004为鸡传染性支气管炎病毒。
- 陈峰周庆丰王敬师李少璃张齐吴孔兴曹永长
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒
- H9N2亚型禽流感病毒ns1基因的融合表达
- 2006年
- 禽流感病毒(AIV)非结构蛋白NS1在病毒粒子中不存在,因此,可以通过检测NS1抗体来鉴别禽流感病毒感染鸡群和免疫鸡群.将ns1基因和T4噬菌体soc基因在大肠埃希氏菌中融合表达,融合蛋白可以作为鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群的检测抗原.采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的ns1基因(654 bp);将该片段克隆至pSOC质粒soc基因3′端,成功构建了重组质粒pSOC-NS1,用该重组质粒转化E.coliB l21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/mL的IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果表明pSOC-NS1融合蛋白相对分子质量约39 000.W estern-b lot证实,表达产物与AIV H9N2病毒感染的小鼠血清具有良好的反应性.
- 陈丽谢青梅李少璃王敬师马静云毕英佐曹永长
- 关键词：禽流感病毒NS1基因
- 用逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术快速检测H5亚型禽流感病毒
- 【前言】禽流感的暴发和流行给畜牧业造成了巨大的经济损失,对人类健康造成了严重威胁。快速诊断和及时监测是控制流感的首要步骤。本研究建立一种简便、灵敏而又特异的环介导等温扩增技术(Loop—mediated Isotherm...
- 李少璃谢青梅曹永长张祥斌冀君马静云毕英佐
- 文献传递
- 逆转录环介导等温扩增技术检测H3亚型猪流感病毒被引量：8
- 2009年
- 基于环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种用于快速检测H3亚型猪流感病毒的方法。根据GenBank中收录的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列,设计一组对应HA序列6个区域的4条特异性引物,建立RT-LAMP反应体系;经优化,确定了最佳的LAMP反应条件。扩增后产物形成的焦磷酸离子和溶液中的镁离子结合而形成焦磷酸镁沉淀,结果可视。同时用特异性内切酶HhaⅠ对所获得的产物进行酶切鉴定,所得的酶切产物大小与理论值完全符合。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品,检测结果与RT-PCR方法符合率均达到100%。结果表明,本研究建立的RT-LAMP检测猪流感病毒方法,操作简单,灵敏度高,特异性强,是一种适用于现场诊断的检测技术。
- 刘中勇朱道中李少璃冀君毕英佐谢青梅曹永长
- 关键词：H3亚型猪流感病毒血凝素
- 禽流感病毒H5N1亚型HA基因的高效可溶表达及抗原性分析
- 本研究根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA基因.将该片段定向插入到笔者所在实验室设计的原核表达载体pBCX中,构建重组表...
- 李少璃谢青梅陈丽周庆丰马静云曹永长
- 关键词：H5N1亚型HA基因禽流感病毒抗原性分析
- 文献传递
