李旭刚
- 作品数：29 被引量：301H指数：10
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- Impact of Copy Number on Transgene Expression In Tobacco被引量：6
- 2002年
- 对农杆菌介导法获得的转 β_葡糖醛酸酶 (β_glucuronidase ,GUS)基因 (uidA)烟草 (NicotianatabacumL .)进行GUS表达分析 ,发现部分转基因植株无GUS活性。进一步Southern杂交结果发现 ,GUS基因失活植株的基因组中整合了多个uidA拷贝 ,而GUS活性高的转基因植株多为uidA单拷贝整合 ,表明uidA基因失活与基因多拷贝整合有关。Northern杂交结果显示 ,失活植株无特异uidARNA杂交带 ,而GUS活性高的植株可检测到明显的杂交信号 ,说明多拷贝引起的基因失活发生在RNA水平。
- 李旭刚陈松彪路子显常团结曾千春朱祯
- 核基质结合区在转基因烟草中对转基因表达的影响被引量：15
- 2001年
- 为研究核基质结合区 (matrixattachmentregions,MARs)在转基因植物中对外源转基因 (transgene)表达的影响 ,将来源豌豆 (PisumsativumL .)的MARs序列构建在报告基因 β_葡糖醛酸酶 (β_glucuronidase ,GUS)基因 (uidA)的两侧形成植物表达载体。将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体经根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导转化烟草 (NicotianatabacumL .)。GUS活性检测表明 ,MARs可以提高外源uidA基因的表达水平。和不包含MARs的转化植株相比 ,MARs序列的存在可以使uidA基因的平均表达水平提高 2倍 ,最高的可达
- 李旭刚路子显陈蕾肖桂芳朱祯
- 关键词：转基因基因表达烟草
- Ⅰ植物转基因失活及MAR功能研究Ⅱ无选择标记转基因植物研究
- 该研究将作为报导基因的β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(uidA)导入植物,然而在一些思索基因植株中检测不到GUS活性.通过Southern杂交分析,发现外源嵌合基因启动子部分发生了DNA甲基...
- 李旭刚
- 关键词：转基因GUS基因失活多拷贝整合
- 利用PCR对PVX外壳蛋白基因进行同义密码子修饰
- 2003年
- 利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)与限制性内切酶相结合的方法 ,设计 4条含有限制性酶切位点和相应突变的引物。以马铃薯X病毒 (PotatoVirusX ,PVX)外壳蛋白cp基因为模板 ,扩增出相应的片段 ,相应酶切后通过三片段连接构建到克隆载体pBlueKS(+/ - )上。随机挑选重组子测序表明 ,利用三片段拼接成功地在PVX外壳蛋白基因的不同部位产生了突变。实验结果说明利用三片段接可以大大提高筛选得到突变子的效率 ,从而节省人力、物力和时间。
- 冯德江徐军望路子显陈蕾徐鸿林李旭刚朱祯
- 关键词：PCRPVX外壳蛋白基因马铃薯X病毒
- 转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析被引量：2
- 2001年
- 利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示 :外源基因在植物已获表达 ,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。
- 李慧芬李旭刚吴茜陈蕾徐鸿林朱祯
- 关键词：玉米自交系基因枪转基因植株
- 有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量：19
- 2003年
- 为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。
- 曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯
- 关键词：籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
- 核基质结合区的研究进展
- 李旭刚徐军望朱祯
- 核基质结合区(Matrix attachment region， MAR)是真核生物染色质中可以与核基质结合的一段DNA序列。它能使染色质形成环状结构，还可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录。在基因工程研究中发现，...
- 关键词：
- 关键词：核基质结合区MAR调控基因表达
- 水稻EPSP合酶第一内含子增强外源基因的表达被引量：14
- 2003年
- 分离并克隆了水稻5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的第一内含子(EPI)。序列分析表明,EPI长704bp,GC含量为36.2％。为进一步研究EPI序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响,将EPI序列插入CaMV35S启动子和报导基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(gus)之间。采用基因枪法转化烟草叶片,gus基因瞬时表达表明,EPI序列的存在可以使GUS的表达水平提高。利用农杆菌法转化烟草,获得了gus基因稳定表达的植株。GUS活性检测表明EPI内含子的存在可以显著提高GUS基因的表达(P<0.01)。Northern blot分析表明,在转录水平上gus基因在含EPI内含子的转基因植株中的表达高于不含EPIgus基因的表达,并且成熟的gus mRNA中EPI被正确剪取掉了,表明是一种非转译的内含子。GUS定量检测表明,EPI存在可以使GUS的平均表达水平提高3倍,最高单株可提高6倍。
- 徐军望冯德江宋贵生魏晓丽陈蕾伍晓丽李旭刚朱祯
- 关键词：水稻EPSP合酶第一内含子
- 豌豆核基质结合区的功能研究被引量：5
- 2000年
- 将豌豆基因组中分离的核基质结合区 (Matrixattachmentregions ,MARs)构建在植物表达载体的T DNA结构域中 ,使得报导基因 β 葡糖醛酸酶 (β glucuronidase ,GUS)基因位于两段MARs序列之间。将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体经农杆菌介导转化烟草。GUS活性检测表明 ,MARs可以提高GUS基因的表达水平 ,和不包含MARs的转基因植株相比 ,MARs序列使GUS基因的平均表达水平提高 2倍。但在瞬时表达中 ,MARs对GUS基因的表达没有影响。
- 李旭刚吴茜朱祯肖桂芳
- 关键词：核基质结合区外源基因表达豌豆
- 烟草tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响被引量：1
- 2002年
- 烟草DNA结合蛋白TGA1a可特异地作用于CaMV35S增强子的激活序列as-1（-83～-63）,并表现为转录激活功能.为了研究tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响,将它置于维管束特异性启动子rolC下游,并与CaMV35S启动子控制的报道基因串联成一种反式调控系统,构建了植物表达载体,同时,以CaMV35S和rolC分别控制的报道基因构建植物表达载体为阳性对照.通过农杆菌介导方法转化烟草和分子鉴定,证明报道基因存在于转化烟草基因组中,分别测定了不同转基因单株的GUS活性,结果表明:rolC控制下的tga1a的表达显著增强了CaMV35S控制下的报道基因表达,其GUS活性明显高于CaMV35S或rolC单独调控报道基因的转化植株,单株的最高GUS活性达到两个阳性对照的10倍以上.组织化学定位证实该串联系统使GUS蛋白主要集中在维管束组织.这一研究结果为提高外源基因在转基因植株中的表达水平和外源基因的组织特异性表达创立了一个新模式.
- 路子显常团结李旭刚徐军望李慧芬陈宛新冯德江肖桂芳朱祯
- 关键词：外源基因DNA结合蛋白植物转化报道基因植物基因工程
