李桂莲
- 作品数：41 被引量：188H指数：10
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点实验室开放基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教更多>>
- 肺结核患儿胃液样本结核分枝杆菌培养阳性率提高方法的探讨
- 2023年
- 目的:建立提高肺结核患儿胃液样本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)培养阳性率的方法,同时,探讨培养液的pH值对MTB抗原-胶体金检测试剂正确判读结果的影响和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)对结核样本前处理液pH值的调节作用。方法:将70份疑似肺结核患儿胃液样本同时用两步培养法、传统培养法和Xpert Ultra进行检测。两步培养法为先将胃液样本直接接种到罗氏培养基上,约20~30 d后收集可疑MTB菌落再行常规的碱处理-中和离心法处理进行分离培养(传统培养法)。比较传统培养法和两步法阳性检出率的差异;以样本的Xpert Ultra检测结果作为菌载量标准,分析两步法在不同菌载量样本中的阳性检出率差异。同时,配制系列pH值梯度的溶液,确定MTB抗原-胶体金检测试剂获得最佳显示结果的最适pH值范围;用系列体积的PBS缓冲液(pH=6.8)中和3%或4%NaOH与等体积样本的混合液,确定pH值至7~9时所需的体积稀释倍数。结果:传统培养法阳性检出率为26.5%(18/68),两步法阳性检出率为23.1%(15/65),未发现两种方法的阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=0.125,P>0.05)。两步法在传统培养法的基础上将阳性检出率从26.5%(18/68)提高到32.4%(22/68)。两步法在菌载量低级及以上分级样本中的阳性检出比例(44.0%,11/25)明显高于菌载量极低级及以下标本的阳性检出比例(11.8%,4/34),差异有统计学意义(χ^(2)=7.896,P=0.005)。本研究所选用的MTB抗原-胶体金检测试剂最适pH值范围为6~9。胃液模拟样本经3%或4%的NaOH处理后,调节pH值至7~9时需用PBS缓冲液(pH=6.8)稀释至少10或14倍,而痰液模拟样本经3%或4%的NaOH处理后,调节pH值至7~9时需用PBS缓冲液(pH=6.8)稀释至少12或16倍。结论:分离培养两步法的阳性检出率未优于传统培养法,可作为传统培养法的补充,推荐对难以确诊的高度可疑肺结核患儿使用该方法进行检测�
- 李桂莲方敏姜靖伟王瑞欢钱程宇于晋杰曹滨许达赵秀芹李马超刘海灿孙琳朱渝万康林
- 关键词：儿童胃液
- 结核分枝杆菌及结核疫苗新作用方式的研究
- 2023年
- 结核病主要是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病,是严重威胁人类健康的重大公共卫生问题。目前,卡介苗仍是唯一被批准应用于人体的预防性疫苗,其对婴幼儿具有较好的保护效果,但对成年人的保护作用存在巨大争议。巨噬细胞和树突状细胞吞噬结核分枝杆菌之后,启动适应性免疫应答,活化的效应性CD4(+)和CD8(+)T细胞通过释放细胞因子和细胞毒作用发挥免疫效应。然而,结核分枝杆菌可通过抑制吞噬溶酶体形成、改变代谢途径、抑制抗原提呈等作用发生免疫逃逸,使其在宿主体内长期存在。近年来,随着多组学的发展,针对结核分枝杆菌感染免疫机制的研究有了一定的进展,但通过接种疫苗对结核病进行防控的结果依然不尽人意。本文重点探讨了结核分枝杆菌和宿主之间的免疫反应以及逃逸机制,并概述了结核疫苗的研发情况,有助于我们利用结核菌感染的免疫学知识对结核病疫苗进行快速高效的研发。
- 王瑞欢李马超李桂莲刘海灿万康林
- 关键词：结核分枝杆菌免疫机制免疫逃逸疫苗
- 微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的研究被引量：1
- 2015年
- 目的评价微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar blue显色法对78株结核分枝杆菌检测氧氟沙星的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定氧氟沙星的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏培养基比例法进行比较。结果微孔板Alamar blue显色法获得结果平均时间为8d,氧氟沙星的最佳耐药阈值为2μg/mL,以罗氏培养基比例法为金标准,氧氟沙星的灵敏度和特异度分别为88.6%和94.1%。结论微孔板Alamar blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的快速检测。
- 郑玉红郭倩李超魏剑浩赵丽丽蒋毅赵秀芹万康林李桂莲
- 关键词：结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性
- 异烟肼诱导致单耐异烟肼结核分枝杆菌假定药物外排泵基因表达量变化的初步研究被引量：3
- 2013年
- 目的检测单耐异烟肼结核分枝杆菌经异烟肼诱导培养前后假定药物外排泵基因表达量的变化，探讨可能导致结核分枝杆菌对异烟肼耐药的外排泵基因及导致基因高表达的原因。方法选取35株单耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株、10株全敏结核分枝杆菌临床分离株和H37Rv（标准对照），对各菌株进行无异烟肼和亚抑菌异烟肼浓度（1／4MIC）的7H9液体培养基诱导培养，提取RNA后反转录并采用real—timePCR技术分别检测27个假定外排泵基因表达量的变化，用公式2^-△△CT计算每个假定基因相对表达量的差异倍数。结果耐药株中27个假定外排泵基因有13个基因高表达，高表达RV1258c基因的菌株数最多为6株，其次是高表达RV2265和RV0849的菌株各有5株。35株菌中14株菌（40．00％）有高表达的外排泵基因，6株（17．14％）菌株均只有1个假定外排泵基因高表达；8株（22．86％）菌株有两种及以上基因高表达，其中4、2、1、1株菌株分别有2、4、5、7个基因高表达；10株全敏菌株和H37Rv 27个假定外排泵基因均无高表达。结论Rv1258c、Rv2265和Rv0849等基因可能是导致结核分枝杆菌对异烟肼耐药的外排泵基因，异烟肼可能为结核分枝杆菌部分假定外排泵基因的诱导物而导致其激活并高表达。
- 张敬蕊李桂莲赵秀芹万康林吕建新
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼
- 结核分枝杆菌耐药基因的研究进展被引量：19
- 2006年
- 随着分子生物学的发展,对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐药基因的了解正在逐步加深,已经发现的耐药基因包括与耐利福平有关的rpoB,与耐异烟肼有关的katG、inhA、ahpC、oxyR-ahpC间隔区、kasA,与耐链霉素有关的rpsL和rrs,与耐吡嗪酰胺有关的pncA及与耐乙胺丁醇有关的em bC、em bA和em bB等。当上述基因的某些位点发生突变时,M TB就有可能对相应的药物产生耐药性。本文将对M TB耐药性与耐药基因的关系以及耐药严重程度与耐药基因的关系等做一综述。
- 李桂莲王撷秀赵德福
- 关键词：结核耐药基因
- 马西利亚分枝杆菌临床分离株的多位点序列鉴定和药物敏感性试验分析被引量：1
- 2015年
- 目的对单基因比对不能区分的马西利亚分枝杆菌（M．massiliense）临床分离株进行菌种鉴定，补充其药物敏感谱，为临床诊治提供依据。方法2013年中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病室共收集了47例疑似非结核分枝杆菌（NTM）感染的临床样本，用对硝基苯甲酸、噻吩-2-羧酸肼培养基和多位点PCR方法区分鉴别得到的分枝杆菌，采用基因序列比对进行NTM菌种鉴定，其中未能准确鉴定菌种的6株临床分离株进一步通过多位点序列分析（ML-SA）方法进行定种鉴定。采用微孔板阿尔玛蓝测定法（MABA）对马西利亚分枝杆菌菌株开展36种药物的药物敏感性试验（简称“药敏试验“）。结果47例临床样本中鉴定出34株NTM，其中6株临床分离株综合5个管家基因（16SrRNA、hsp65、rpoB、sodA和recA）的单基因比对结果仍不能鉴定菌种，因此本研究采用MLSA方法构建邻位相加法进化树确认6株均为马西利亚分枝杆菌。药敏试验结果显示M．massiliense对阿米卡星为敏感（16μg／ml）或中度敏感（32μg／ml），对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、环丙沙星、乙硫异烟胺、卷曲霉素、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、美罗培南、米诺环素12种药物耐药。结论MLSA方法能有效鉴定马西利亚分枝杆菌；马西利亚分枝杆菌耐药程度较高。
- 魏剑浩郭倩李桂莲刘海灿李马超吴移谋楼永良吕建新万康林
- 关键词：分枝杆菌属微生物敏感性试验
- ELOVL2和SLC11A1基因多态性与新疆地区人群结核病易感性的相关性
- 2023年
- 目的研究超长链脂肪酸延伸酶2基因(ELOVL2)和溶质载体蛋白家族11A成员1基因(SLC11A1)单核苷酸多态性(SNP)与新疆维吾尔族人群结核病(TB)易感性的相关性。方法选择维吾尔族TB患者178例为TB组,142例健康人为对照组。采用高通量测序检测各组ELOVL2基因rs1570069、rs2236212、rs3798719位点和SLC11A1基因rs17235409、rs17235416位点的多态性,分析不同遗传模型下基因多态性与TB易感性的相关性。结果两组间各位点基因型、等位基因分布的差异ELOVL2无显著性(P>0.05),而SLC11A1有显著性(P<0.05)。隐性遗传模型下,rs17235409的GA+AA基因型、rs17235416的AT+TT基因型是TB的危险因素;超显性遗传模型下,rs17235409的GG+AA基因型、rs17235416的AA+TT基因型是TB的保护因素(P<0.05)。结论ELOVL2基因多态性与新疆维吾尔族人群TB易感性可能不相关;SLC11A1基因多态性与新疆维吾尔族人群TB易感性可能相关。
- 于晋杰王泉刘海灿刘梦文袁秀琴李桂莲肖开提·米吉提万康林
- 关键词：基因多态性结核病易感性
- 药物外排泵基因表达与结核分枝杆菌耐药关系的探讨被引量：12
- 2011年
- 目的 探讨MTB药物外排泵基因的表达与耐药表型、耐药相关基因突变型的关系.方法 从2007年天津市结核病控制中心参比室库存菌株中选择对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇联合或单一耐药的全部耐药MTB菌株45株及对以上4种药物全敏感的MTB菌株26株（全敏组）.采用直接测序法检测异烟肼耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC、ndh,利福平耐药相关基因rpoB,链霉素耐药相关基因rpsL、rrs和乙胺丁醇耐药相关基因embB、embC、embA的突变情况.提取菌株RNA后逆转录并采用real-time PCR方法检测药物外排泵基因Rv1410c、Rv2136c、Rv0783c和Rv1819c的表达量,并用方差分析和t检验的方法分析药物外排泵基因表达量在不同菌株耐药表型、耐药相关基因突变型菌株中的差异.结果 Rv1410c表达量在耐链霉素组[（8.48±6.33）×10-5],耐异烟肼组[（8.43±6.38）×10-5],耐利福平组[（9.59±7.27）×10-5],耐多药组[（10.37±7.86）×10-5],耐异烟肼＋链霉素组[（9.39±6.81）×10-5],均高于全敏组表达量[（5.67±3.29）×10-5],差异有统计学意义（t′值分别为2.18、2.20、2.29、2.34、2.43,P均〈0.05）.Rv2136c表达量在耐异烟肼组[（3.51±2.43）×10-5],耐多药组[（4.21±2.94）×10-5],耐异烟肼＋链霉素组[（3.81±2.46）×10-5]均高于全敏组表达量[（2.50±1.44）×10-5],差异有统计学意义（t′值分别为2.03、2.22、2.28,P均〈0.05）.rpoB 531突变型菌株Rv0783c的表达量[（5.41±3.03）×10-6]高于野生型耐利福平菌株[（2.29±1.62）×10-6],差异有统计学意义（t′=2.81,P〈0.05）.结论 Rv1410c和Rv2136c表达量高低与MTB对多种药物耐药有关,Rv0783c的高表达与利福平耐药株rpoB 531位密码子突变可能相关.
- 李桂莲王撷秀谢彤巨韩芳赵慧穆成赵德福
- 关键词：分枝杆菌细菌细菌蛋白质类膜转运蛋白质类ATP结合匣式转运子
- 5种中国罕见慢速生长非结核分枝杆菌标准株及临床分离株的药物敏感性分析被引量：2
- 2020年
- 目的分别对熊本、慢生黄、施氏、苏尔加、三重分枝杆菌5种中国罕见分离的慢速生长非结核分枝杆菌标准株和临床分离株的药物敏感性进行分析。方法用微孔板Alamar blue显色法分别检测1株熊本分枝杆菌、3株慢生黄分枝杆菌、2株施氏分枝杆菌、2株苏尔加分枝杆菌、2株三重分枝杆菌等临床分离株及相应标准株对利福平、克拉霉素和阿米卡星等36种药物的最小抑菌浓度,判断分析其敏感性,并比较标准株及相应临床分离株对36种药物的敏感性差异。结果5种非结核分枝杆菌菌株中,多数对利福霉素类的利福喷丁和利福布丁、氨基糖苷类、多数氟喹诺酮类、卷曲霉素、大环内酯类(克拉霉素、罗红霉素和阿奇霉素)、利奈唑胺和氯法齐明等敏感。三重分枝杆菌还对头孢菌素类药物表现出一定的敏感性。结论熊本、慢生黄、施氏、苏尔加、三重分枝杆菌等对克拉霉素等多种药物敏感,但有的临床分离株表现为耐药,治疗这些菌种感染时最好进行药物敏感性试验并联合用药。
- 肖士林赵秀芹刘志广刘海灿李马超蒋毅赵丽丽李桂莲万康林
- 关键词：药物敏感性
- 单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究被引量：6
- 2012年
- 目的探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。方法从国家结核病参比实验室2007—2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果在23株单耐利福平的菌株中,有16株(69.6%)检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192μg/ml和256μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75μg/ml、4μg/ml、2μg/ml和0.5μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为8μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32μg/ml和16μg/ml。结论不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。
- 逄宇李桂莲王玉峰宋媛媛李强欧喜超董海燕赵雁林
- 关键词：利福平
