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李素霞: 作品数：102 被引量：154H指数：7; 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>; 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>

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对SDS稳定的V8(V125T)蛋白酶突变体的高效表达及性质研究被引量：1: 2017年; 谷氨酰内切酶能特异性切割谷氨酸、天冬氨酸残基羧基端结合的肽键。将含有V8蛋白酶突变体(V125T)基因的表达质粒的重组大肠杆菌BL21(DE3),在50L发酵罐中发酵,融合蛋白为可溶性表达,可得菌湿重50g/L,相对蛋白表达量为33%。融合蛋白采用GST亲和纯化、肠激酶激活、DEAE-FF阴离子交换层析,得到纯的V8(V125T)突变体,经纯化后可获得0.998mg蛋白/g菌(湿重),比活为13.47 U/mg pro.纯化过程的酶活回收率达到了97.9%。对纯酶进行酶学性质分析,以Z-Phe-Leu-Glu-p NA作为底物测得V8(V125T)蛋白酶的Km为0.339mmol/L,Vmax为16.642μmol/min。其最适pH为8.0,在pH4.0~10.0之间较稳定;最适反应温度在45℃,12h内在4~35℃有很好的温度稳定性;25℃条件下1mmol/L的金属离子对酶具有不同程度的影响,其中Fe^(3+)的抑制作用最强;2mol/L尿素及1mmol/L EDTA对酶活性无影响,在0.1%SDS中保存12h、在0.5%SDS中4h和在1%SDS中1h,活性均能维持90%以上,在0.5%,0.1%SDS保存12h,仍能保持80%和64%的活性,与未突变的重组V8蛋白酶相比,该突变体对SDS的耐受性得到极大提高。; 程可利刘晓李素霞; 关键词：突变体酶学性质

钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质被引量：9: 2003年; 从螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg,总活力回收率50%,纯度达电泳纯。SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku,每分子亚基含0.7个Fe原子;在Tris-盐酸缓冲液中的最适pH为8.2、最适温度为25°C;在紫外区279nm有最大光吸收,酶的pH稳定范围为6～11,65°C以上迅速失活,该酶对H2O2敏感,在5mmol/LH2O2中迅速失活,而在φ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。; 夏文超李素霞范立强袁勤生; 关键词：FE-SOD 钝顶螺旋藻纯化稳定性金属酶

二硫键Cys139-Cys206影响人胰蛋白酶的稳定性被引量：2: 2020年; 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,可特异切割精氨酸及赖氨酸C端肽键。重组人源阳离子胰蛋白酶(recombinant human cationic trypsin:rht1)的稳定性明显高于重组人源阴离子胰蛋白酶(recombinant human anionic trypsin:rht2)。比较ht1和ht2的氨基酸序列和三维结构,二者的氨基酸序列同源性为95%,rht1比rht2多1对二硫键Cys139-Cys206。为解释该二硫键对其稳定性的作用,构建rht1的Cys139-Cys206二硫键缺失突变体rht1-dC139S-C206S和rht2的增加该对二硫键的突变体rht2-S139C-S206C。进行了重组表达和纯化,并测定rht1、rht2及两个突变体的酶学性质,对比其稳定性。结果发现,与野生型rht1、rht2相比,突变体的酶学动力学参数km和kcat值与最适pH均未有较大差异。但在pH3~12条件下的稳定性,rht1-dC139S-C206S比rht1低46.6%;rht2-S139C-S206C比rht2高30.3%。对比其热稳定性,40℃保温4 h,rht1残余活性为92.4%,而rht1-dC139S-C206S降为60%。60℃保温4 h,rht2-S139C-S206C残余活性为83.3%,而rht2完全失活。表明了该二硫键Cys139-Cys206对人胰蛋白酶稳定性的重要性。进一步进行结构模拟和分析,解释了该对二硫键对稳定性影响的机制。; 王之可马强李强刘晓李素霞; 关键词：二硫键稳定性突变体

黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶新基因lipB的克隆和表达被引量：2: 2011年; 目的克隆黏质沙雷菌ECU1010脂肪酶基因lipB于大肠杆菌中表达后研究其酶学性质。方法 PCR克隆脂肪酶基因,与质粒pET-28a（＋）连接后转化至大肠杆菌BL21（DE3）。硫酸铵沉淀法纯化表达产物,研究酶的稳定性等酶学性质。结果成功克隆了S.marcescens ECU1010中脂肪酶基因lipB（GenBank：HM440338）,在E.coli中高效表达。LipB最适反应温度40℃,最适pH 8.5。该酶能在pH 5-7条件下保持稳定,Ca2＋有促进酶活性的作用。LipB对不同有机溶剂的耐受性与黏质沙雷菌脂肪酶LipA有明显差异。结论 lipB基因克隆丰富了脂肪酶基因资源,分析LipB的酶学性质表明,此酶在食品工业和手性药物的拆分等领域有广阔的应用前景。; 吴娇娇李素霞赵健范立强许建和; 关键词：黏质沙雷菌脂肪酶克隆

前导肽对于羧肽酶B折叠的作用研究（英文）: ＜正＞羧肽酶B可特异性切割蛋白质或多肽C末端的碱性氨基酸,如精氨酸、赖氨酸和组氨酸,是重组胰岛素、降钙素等的生产过程中的重要的工业用酶。目前,商业的羧肽酶B均为从猪胰腺提取,含有其它蛋白酶杂质,且价格昂贵。所以,对于重组...; 李素霞杨梓安宇宋聿文赵健范立强袁勤生; 关键词：REFOLDING; 文献传递

黄杆菌肝素酶Ⅱ的克隆及表达: 目的获得高表达黄杆菌肝素酶Ⅱ工程菌。方法本文用一对特异性引物通过PCR从黄杆菌（Flavobacterium heparinum）基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶Ⅱ（HpaII）基因,经测序验证后插入到含T7启动子的质粒...; 傅文彬赵健宋聿文范立强李素霞袁勤生; 关键词：克隆表达酶活性包涵体复性; 文献传递

重组活性羧肽酶B的克隆表达及复性研究: 羧肽酶B(carboxypeptidaseB,CPB,EC3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku。本文研究，天...; 李素霞张育坚夏文超龚毅袁勤生; 关键词：羧肽酶B 克隆表达; 文献传递

美白活性原料的筛选及其特性研究被引量：4: 2009年; 对绿茶、葡萄籽和巴西大樱桃等20种植物提取物对酪氨酸酶的抑制作用以及其抗氧化能力(清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力)进行了研究。实验结果表明,20种样品均表现出不同程度的酪氨酸酶抑制作用和抗氧化能力,其中绿茶、巴西大樱桃和葡萄籽提取物表现出极强的酪氨酸酶活性抑制率,且抑制活性远高于熊果苷;同时这3种植物提取物也表现出显著的清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力,具有应用于美白化妆品的潜力。; 王鹏王勇刚李素霞韩福森吴巧玲王素英; 关键词：化妆品添加剂植物提取物酪氨酸酶抗氧化能力

R 122L突变提高重组人阴离子型胰蛋白酶的稳定性的研究被引量：3: 2014年; 目的研究自切位点突变R122L对重组人阴离子型胰蛋白酶稳定性的影响。方法在大肠杆菌中表达重组人阴离子型胰蛋白酶和R122L突变体,并进行纯化,对纯化后酶及其突变体的稳定性进行对比研究。结果 mhT2(R122L)发挥催化活力的最适pH为7~11;低温及酸性环境中稳定性较好,其活力在pH 7.6条件下同样能被典型的金属离子螯合剂(如EDTA)、还原剂(如β-ME)、变性剂、Fe3+及丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制,以N-苯甲酰-L-精氨酸(n-benzoyl-l-arginine ethyl ester,BAEE)作为底物时的米氏常数为0.010mmol/L。结论相比于hT2野生型,R122L突变体蛋白最适pH范围增大,耐热性能也有所提高,与底物BAEE的亲和力增强,同时对于Fe3+、金属离子螯合剂、还原剂以及变性剂等的耐受力也有增强,稳定性大大提高。; 马强吴倩李素霞; 关键词：点突变稳定性

重组猪胰蛋白酶冻干制剂稳定性研究及在细胞培养中的应用被引量：2: 2012年; 目的筛选重组猪胰蛋白酶(rPT)冻干保护剂和保存方法,及配制细胞消化液的稳定性及其应用。方法在rPT酶液中添加不同浓度不同种类的冻干保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率,并从赋型性、色泽度、溶解性方面评价冻干保护剂的作用;rPT酶液经过无菌过滤处理,内毒素含量检测合格后,冻干。然后配制成细胞消化液,优化细胞消化液组成,将细胞消化液应用于细胞培养。结果添加3%甘露醇和3%海藻糖的rPT冻干品的酶活性保留率分别为101%和86.5%;用PBS缓冲液配制细胞消化液(含有0.01%EDTA)消化贴壁细胞的综合效果最好,且保存在-20℃时稳定性较好。结论从冻干后酶活性保留率和冻干品外观评价,3%甘露醇可作为rPT冻干过程中的最佳保护剂;rPT细胞消化液应用在细胞培养中的成功,证明rPT可以替代提取的猪/牛胰蛋白酶使用,消除了动物源性病毒等外源因子的污染。; 周超李素霞; 关键词：稳定性保护剂

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