李莹莹
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人可溶性TRAIL基因的克隆及其在毕赤酵母中的重组表达被引量：1
- 2010年
- TRAIL是肿瘤坏死因子TNF家族成员,对肿瘤细胞具有高效和选择性杀伤活性,可能发展为新型抗肿瘤药物。基因重组表达是生产蛋白药物的重要手段。本文首先通过PCR扩增获得人可溶性TRAIL（114-281氨基酸组成的片段）基因,然后将其插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中进行表达。结果发现,经G418筛选获得的高拷贝转化子,在含有3%甲醇的BMMY培养基中,人可溶性TRAIL获得高效分泌表达。表达产物经Ni-Agarose亲和层析,纯度大约为80%,产量可达1-2 mg/L。细胞毒性实验表明,0.05μg/ml可溶性TRAIL对白血病细胞Jurkat有很强的杀伤活性,细胞存活率只有10%。0.1μg/ml TRAIL可对人肺癌细胞A549显示剂量依赖的杀伤作用;当TRAIL浓度达到1μg/ml时,细胞存活率大约为30%。而在测试的浓度范围内,可溶性TRAIL对人皮肤成纤维细胞HSF均无明显细胞毒作用,表明毕赤酵母表达的人可溶性TRAIL对肿瘤细胞的杀伤有选择性。该表达体系的建立,为进一步利用毕赤酵母大量生产人可溶性TRAIL和基于人TRAIL的新型融合蛋白奠定了基础。
- 李莹莹万琳杨浩刘珊蔡华伟卢晓风
- 关键词：TRAIL细胞凋亡肿瘤治疗毕赤酵母
