王伟华
- 作品数：19 被引量：45H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划西安市卫生局科技计划项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白的表达、纯化及其活性被引量：1
- 2012年
- 目的表表达并纯化重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白,并鉴定其生物学活性。方法将重组质粒pRSET-dsCARE转化大肠杆菌BL21(DE3),分别于37、28℃表达目的蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE、Western blot、HPLC鉴定目的蛋白,MTT法检测dsCARE对转染poly(I∶C)细胞的增殖抑制作用。结果dsCARE重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中呈组成性稳定表达,平均每升培养基可收获湿菌体约10 g;纯化产物的SDS-PAGE纯度达95.8%;纯化的目的蛋白能与抗-His多抗发生特异性反应;HPLC纯度达95.1%;每10 g湿菌体可纯化dsCARE重组蛋白约7.5 mg,浓度约220μg/ml;纯化的dsCARE重组蛋白与转染poly(I∶C)的HeLa细胞共同孵育,可剂量依赖性抑制HeLa细胞的增殖活性。结论成功建立了重组dsCARE蛋白的表达、纯化工艺及活性鉴定方法,为其应用和后续研究奠定了基础。
- 王伟王伟华崔杰杨静华颜真
- 关键词：双链RNACASPASE
- 应用Logistic回归与多因子降维法分析胃癌易感基因多态性被引量：3
- 2014年
- 目的应用Logistic回归与多因子降维法(multifactor dimensionality reduction,MDR)分析胃癌易感基因多态性,为胃癌的早期诊断和预警奠定基础。方法采用病例-对照研究,以中国西北476例汉族胃癌患者为病例组,361名非肿瘤、非消化系统疾病个体为对照组;通过候选基因策略,应用MassARRAY质谱平台分析与代谢、炎症相关的18个基因的37个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点;利用Logistic回归与MDR对基因分型结果进行分析。结果 Logistic回归分析显示,磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCE1)_rs3765524[OR=1.341,95%CI(1.003,1.792)]、还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]_rs1800566[OR=0.615,95%CI(0.418,0.903)]、X线修复交叉互补基因1(X ray repair cross complementing gene 1,XRCC1)_rs25487[OR=0.688,95%CI(0.490,0.967)]3个SNP位点的基因型分布与胃癌易感性显著相关(P<0.05);MDR分析显示,PSCA_rs10216533-XRCC1_rs25487[模型Ⅰ:OR=3.566,95%CI(2.614,4.863)]、MTHFR_rs1801131-PSCA_rs2976392-CYP17A1_rs6163-CYP19A1_rs4646-CYP19A1_rs1902586-MMP2_rs243865[模型Ⅱ:OR=7.257,95%CI(5.337,9.870)]、IL1B_rs16944-PSCA_rs10216533-CYP17A1_rs6163-NQO1_rs1800566-ENOSF1_rs2298581-XRCC1_rs25487[模型Ⅲ:OR=15.837,95%CI(11.252,22.289)]3个模型内部各位点之间具有显著交互作用(P<0.000 1)。结论 PLCE1、NQO1、XRCC1、PSCA、MTHFR、CYP17A1、CYP19A1、MMP2、IL1B、ENOSF1等基因多态性与我国西北地区汉族人群胃癌发病风险相关;在胃癌的早期诊断与预警中应联合Logistic回归和MDR等方法,兼顾单因素与多因素交互的影响进行综合分析。
- 张文涛梁平代鹏王伟华汪钦孙建斌王伟颜真
- 关键词：胃癌单核苷酸多态性LOGISTIC回归多因子降维法
- 重组B7-H1IgV融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的以B7-H1为靶点,研制肿瘤免疫治疗蛋白疫苗。方法将人B7-H1胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达。Ni2+-NTA亲和层析纯化蛋白,Westernblot鉴定。用纯化的rhB7-H1IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术、免疫组化技术和CDC试验测定融合蛋白及其抗血清的生物学活性。结果所构建的pQE-30-TT-B7-H1IgV表达载体,能稳定表达rhB7-H1IgV蛋白,经纯化后免疫昆明小鼠,可获得高滴度抗B7-H1抗血清。经流式细胞术和免疫组化检测显示,其抗血清可与HT-29/B7-H1+及SP2/0肿瘤细胞结合,且在CDC试验中,可依赖补体杀伤HT-29/B7-H1+及SP2/0肿瘤细胞。结论rhB7-H1IgV融合蛋白不仅可引发小鼠体液免疫应答,而且其抗体还能与表达B7-H1的肿瘤细胞相结合,并介导补体依赖的体外杀伤作用。
- 王伟华张英起颜真
- 关键词：肿瘤免疫治疗
- FOXP3在消化系统肿瘤的表达及临床研究
- 背景:FOXP3(Transcription factor forkhead box protein 3)因具有重要的免疫抑制调节功能目前仍被认为是调节性T细胞(Tregs)功能特异性转录因子。最近,人们发现胰腺癌
- 王伟华
- 文献传递
- PLCE1基因多态性在胃癌发生过程作用的探讨
- 酶CE1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)是新发现的磷脂酶家族C新成员,其分子结构和功能较为复杂,在细胞信号转导过程中可能起重要作用.PLCE1的激活可引起一系列的生化反应,最终调节细胞的...
- 代鹏梁平张文涛王伟华颜真
- 关键词：胃癌基因表达
- 文献传递
- 去势大鼠骨质疏松与股骨甲状旁腺激素受体1相关性研究被引量：2
- 2009年
- 目的:观测去势大鼠骨质疏松时血清雌二醇(E2)水平与甲状旁腺激素受体1(PTHR1)表达的关系。方法:雌性大鼠随机分为去势和假去势(即对照组)两组,大鼠切除双侧卵巢诱发骨质疏松症。术后3个月腹主静脉取血,测定各组大鼠血清E2水平;分别用小动物骨骼强度测定仪和双能X线骨密度仪检测右股骨生物学力学和骨密度;从左股骨中提取总RAN和总蛋白,分别检测PTHR1在转录和翻译水平上的变化。结果:去势大鼠血清E2含量为13.80±1.10pmol/L,对照组血清E2含量为23.51±1.20pmol/L;去势组右股骨生物学力度:折断力为9.89±0.65N/kg,压碎力为16.10±1.23N/kg,骨密度为0.0730±0.0075gms/cm2;对照组右股骨生物学力度:折断力为11.74±0.95N/kg,压碎力为19.38±1.84N/kg,骨密度为0.0839±0.0097gms/cm2。与对照组相比,去势大鼠PTHR1基因和蛋白水平表达量均明显降低。结论:去势不仅可引起大鼠E2水平明显降低,并诱发骨质疏松进而导致PTHR1基因和蛋白表达水平均显著下降,提示PTHR1表达下降可能与去势诱导大鼠骨质疏松密切相关。
- 张松王四旺王超王伟华谢艳华
- 关键词：卵巢切除术股骨
- rhB7-H1IgV肿瘤疫苗的研究
- 目的：B7-H1是共刺激分子B7家族新成员之一，通过与T和B细胞表面的PD-1和非PD-1受体结合参与T细胞功能调节和细胞因子分泌。近年来发现B7-H1在肿瘤免疫逃逸过程中可能起到重要作用，使用小鼠单克隆抗体阻断B7-H...
- 王伟华
- 关键词：融合蛋白肿瘤免疫治疗
- 文献传递
- 小鼠可溶性IL-5受体α胞外区基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2009年
- 目的克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Rα)胞外区基因。方法采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增sIL-5Rα胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPROEX中,构建重组表达质粒pPROEX/sIL-5Rα,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达。结果重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确。表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠sIL-5Rα单抗发生特异性免疫反应。结论已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础。
- 宋爱玲蔡累杨怡王伟华王增禄张英起李志奎
- 关键词：胞外区克隆原核表达
- 小鼠sIL-13Rα2在毕赤酵母菌中的表达及初步活性分析被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母菌表达系统进行目的蛋白表达。目的蛋白行SDS-PAGE和Western分析。结果:克隆出可溶性IL-13Rα2目的基因片段,构建重组pPICZα-A/sIL-13 Rα2表达载体,成功转染至毕氏酵母菌,诱导表达出可溶性IL-13Rα2目的蛋白。结论:已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠可溶性IL-13Rα2目的基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。
- 蔡累宋爱玲岳艳王伟华秦鑫张英起李志奎
- 关键词：克隆毕赤酵母菌
- 小鼠sIL-13Rα2基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法提取小鼠脾脏细胞总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母GS115(his4)菌株,进行目的蛋白的诱导表达。表达的蛋白经SDS-PAGE和Western blot,进行分析。结果重组表达质粒pPICZα-A/sIL-13Rα2经酶切鉴定,表明目的基因为正向插入。重组酵母菌的PCR鉴定结果显示,目的基因片段已插入酵母染色体中。目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,每升发酵液约含2mg重组蛋白。重组蛋白可与兔抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应。结论已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠sIL-13Rα2基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。
- 蔡累宋爱玲岳燕王伟华秦鑫张英起李志奎
- 关键词：毕赤酵母克隆
