王浩
- 作品数:20 被引量:36H指数:4
- 供职机构:宁夏医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤基因疫苗免疫增效载体pVAX1-IRES-GM/B7的构建与表达被引量:7
- 2008年
- 目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7。方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达。此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达。结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。
- 刘宁阎瑾琦冉多良贾锐张亮王浩于继云
- 关键词:B7.1IRES癌症疫苗
- 抗肿瘤血管内皮生长因子受体VEGF-R<Sub>2</Sub>抗原及其编码基因与应用
- 本发明公开了抗肿瘤血管内皮生长因子受体VEGF-R<Sub>2</Sub>的抗原及其编码基因与应用。其目的是提供血管内皮生长因子受体VEGF-R<Sub>2</Sub>的抗原及其编码基因与其在制备预防和/或治疗性肿瘤疫苗...
- 于继云阎瑾琦刘颖陈兴贾锐刘国栋王浩
- 文献传递
- 双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定被引量:6
- 2008年
- 目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功。结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。
- 阎瑾琦刘国栋刘荷中贾锐王浩刘宁张亮于继云
- 关键词:内部核糖体进入位点真核表达
- 一种DNA疫苗真核表达载体及其在制备基因疫苗中的应用
- 本发明公开了一种DNA疫苗真核表达载体及其应用。其目的是提供一种DNA疫苗真核表达载体与其在制备抗肿瘤等基因疫苗中的应用。所述DNA疫苗真核表达载体是在pVAX1载体骨架中添加内部核糖体进入位点编码序列得到的重组pVAX...
- 于继云阎瑾琦贾锐王浩张亮刘宁
- 文献传递
- 抗肿瘤多靶点复合抗原及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种抗肿瘤多靶点复合抗原及其编码基因与应用。其目的是提供一种多靶点复合抗原及其编码基因与其在制备预防和/或治疗性肿瘤疫苗中的应用。该抗原具有序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列。其编码基因具有序列表中...
- 于继云刘颖阎瑾琦陈兴宋晓国贾锐刘国栋王浩
- 文献传递
- 重组肿瘤相关抗原蛋白与肿瘤治疗性DNA疫苗静电耦合成为复合纳米颗粒的初步研究被引量:2
- 2008年
- 目的:验证原核表达的重组肿瘤相关抗原蛋白SUR-IM与肿瘤治疗性DNA疫苗pVAX1-2PFcGB能够通过静电耦合形成复合纳米颗粒。方法:通过蛋白-DNA琼脂糖凝胶电泳阻滞实验、DNaseⅠ消化核酸的保护实验及原子力显微镜观察验证二者是否结合;此外,通过体外瞬时转染293T细胞研究蛋白质所结合的质粒是否能够在体外顺利表达。结果:证实二者确实能够通过静电耦合形成纳米级的颗粒,结合后蛋白质对DNA具有一定的保护作用,并且蛋白不会影响与之结合的质粒在细胞中的高效表达。结论:该复合纳米颗粒将蛋白质和核酸组分有机结合在一起,使肿瘤抗原、免疫佐剂及DNA肿瘤疫苗协同发挥作用,为日后进行抗肿瘤功能研究奠定了重要基础。
- 王浩阎瑾琦张飒贾锐张亮刘宁王宇宋晓国于继云
- 关键词:重组蛋白
- 蛋白质-DNA复合纳米颗粒抗肿瘤疫苗的初步研究
- 基因疫苗是近年来刚刚发展起来的一类新型疫苗,由于能诱导细胞和体液双重免疫反应,同时具有产品稳定、运输方便、制造成本低廉的优点,因而具有巨大的开发应用潜力。但目前国内外研究的基因疫苗通常免疫效力较低,激发的免疫应答达不到免...
- 王浩
- 关键词:DNA疫苗复合纳米颗粒
- 文献传递
- 结核疫苗研究进展被引量:11
- 2012年
- 卡介苗(BCG)的免疫保护作用存在争议,多重耐药结核杆菌(MDR-TB)的出现,以及艾滋病(AIDS)的流行,导致结核病(TB)的发病率呈现回升趋势,给TB防治提出了新的挑战。因此,发展新的TB疫苗成为TB防治的迫切需要。本文综述结核疫苗研究的最新进展。
- 吴昊王浩于继云
- 关键词:卡介苗疫苗
- 抗肿瘤多靶点复合抗原及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种抗肿瘤多靶点复合抗原及其编码基因与应用。其目的是提供一种多靶点复合抗原及其编码基因与其在制备预防和/或治疗性肿瘤疫苗中的应用。该抗原具有序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列。其编码基因具有序列表中...
- 于继云刘颖阎瑾琦陈兴宋晓国贾锐刘国栋王浩
- 文献传递
- 多靶点复合抗原抗肿瘤基因疫苗的构建及真核表达被引量:6
- 2008年
- 目的:构建含有人存活蛋白(survivin)-2B主要T细胞表位区域、人和猴绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域融合基因的真核表达质粒,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法:通过基因合成和搭桥PCR技术构建含有Survivin-2B主要T细胞表位区域、人和猴CTP37区域基因的融合基因2PAG,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中,继而又将酶切后的sig-2PAG-FC-GPI融合基因导入含有细小病毒内部核糖体结合位点(IRES)基因且可以共表达人GM-CSF和B7.1融合基因的真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;将构建的重组质粒pVAX1-sig-2PAG-FC-GPI-GM/B7(简称pVAX1-2PFcGB)转染293T细胞,利用流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:2PAG融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pVAX-IRES-GM/B7中;流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组质粒pVAX1-2PFcGB在293T细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pVAX1-2PFcGB,且在293T细胞中可以有效表达,为对该基因疫苗的后续功能研究奠定了基础。
- 贾锐阎瑾琦刘国栋刘宁张亮王浩范明于继云
- 关键词:肿瘤抗原基因疫苗真核表达