程建兵
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：石河子大学医学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 多药耐药及相关蛋白基因抗砷作用
- 2009年
- 目的研究多药耐药基因(MDRI)、多药耐药相关蛋白基因(MRP1)在长期砷暴露的细胞获得对砷的耐受过程中的作用,为抗砷机制的研究提供基础依据。方法采用抑制剂维拉帕米(Verapamil)、MK571,在单一水平和联合水平上阻断MDR1和MRP1基因发挥作用,通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生存率及半数致死量(IC50);通过原子荧光法(AFS)分别检测给予Verapamil、MK571的实验组和对照组在不同时间点抗砷细胞内砷的含量。结果在2,4,8,16,32,64μmol/L砷浓度下,给予抑制剂的抗砷细胞生存率分别为(73.5±0.02)%,(54.6±0.07)%,(44.2±0.05)%,(20.5±0.09)%,(13.5±0.1)%,(7.6±0.05)%,明显低于同步对照组的生存率(93.5±0.05)%,(71.5±0.02)%,(49.2±0.03)%,(38.8±0.08)%,(37.6±0.06)%,(19.5±0.04)%。Verapamil作用下IC50为8.8μmol/L,MK571作用下IC50为6.22μmol/L;同时给于2种抑制剂时,逆转作用更为明显,IC50为5.23μmol/L;MK571作用下,抗砷细胞内砷含量增加明显,至10 h时砷含量达到最大值1.62 ng,明显高出Verapmil组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MDR1、MRP1基因在抗砷细胞获得耐药性过程中起重要作用。
- 郭淑丽罗先道杨丽狄春红程建兵张晓菲杨磊
- 关键词：耐受多药耐药基因多药耐药蛋白蛋白基因
- 三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第二跨膜结构域缺失突变体的构建及其抗砷性研究被引量：3
- 2012年
- 目的检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白第2跨膜结构域(the second transmembrane domain,TMD2)中关键的抗砷结构域。方法采用重叠区扩增基因拼接法构建三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因TMD2的一系列缺失突变体,分别转染至HeLa细胞,激光共聚焦观察其定位,Cell Counting Kit-8检测48 h急性砷中毒后生存率的变化,原子荧光吸收光谱法检测细胞内的总砷含量。结果激光共聚焦证实各突变体的编码蛋白均定位在HeLa细胞的细胞膜上。CCK-8结果显示,转染胞外第4、5环,胞内第4、5环缺失突变体的HeLa细胞IC50分别为33.18、32.84、33.45、34.29μmol.L-1,与转染野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒的HeLa细胞(IC50为33.96μmol.L-1)无显著差异,均高于空载体转染对照组(IC50为19.01μmol.L-1)。转染胞外第6环缺失突变体HeLa细胞的IC50为19.95μmol.L-1,与空载体对照组无显著差异,显著低于野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒转染组。原子荧光分光光度法结果显示,转染胞外第6环缺失三磷酸腺苷结合盒转运体A1的HeLa细胞内砷含量与转染空载体接近,而转染其他突变体的结果与转染野生型三磷酸腺苷结合盒转运体A1的结果基本一致。结论成功构建了5个三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第2跨膜结构域的缺失突变体,且其表达的蛋白仍然正确定位于HeLa细胞的细胞膜上。突变体(除胞外第6环外)仍然具有一定的抗砷性,提示三磷酸腺苷结合盒转运体A1胞外第6环可能是关键抗砷结构域。
- 罗燕程建兵谭晓华尹小菲杨磊
- 关键词：三磷酸腺苷结合盒转运体A1突变体重叠区扩增基因拼接法
- ABCA1胞外第四环缺失突变体的构建及其抗砷性研究
- 目的：构建ABCA1蛋白胞外第四环第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体。转染HeLa细胞后观察其抗砷性变化，推测此突变体可能发挥的功能。
方法：采用重叠区扩增基因拼接法构建ABCA1第1479～1597位氨...
- 程建兵
- 关键词：突变体
- 文献传递
- ABCA1中间缺失突变体的构建及其抗砷性研究被引量：3
- 2010年
- 目的:构建缺失ABCA1,ABCA1蛋白胞外第一环第264-520位氨基酸密码子的基因,并真核表达检测其抗砷性变化。方法:应用重叠区扩增基因拼接法的原理,在拼接延伸后,再进行一次PCR扩增,得到缺失第264-520位氨基酸密码子的ABCA1基因,克隆至pcDNA3.1/V5-His真核表达载体。通过激光共聚焦检测突变体细胞定位,MTT加砷后检测突变体生存率变化。结果:成功构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第264-520位氨基酸密码子的基因。共聚焦显微镜观察突变体定位于细胞膜上,随机区组方差分析结果显示ABCA1突变体生存率明显低于ABCA1野生型。结论:ABCA1胞外第一环缺失突变后基本丧失抗砷功能。
- 张晓菲谭晓华程建兵李金涛孟强杨磊
- 关键词：ABCA1克隆抗砷基因
- 抗砷细胞内荧光物质激光共聚焦显微镜检测
- 2009年
- 目的应用激光共聚焦显微镜检测抗砷细胞内荧光物质含量。方法用荧光染料Rhodamine-123对抗砷细胞进行荧光染色30min,分别用维拉帕米(Verapamil)、亚砷酸钠处理细胞,单纯Rhodamine-123的抗砷细胞为对照组。应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录12,24,36,48,60h等不同时段细胞内荧光强度。结果实验组细胞染色48h后,Verapamil实验组荧光强度分别为(38.940±0.3648),(38.153±0.533),均明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论激光共聚焦显微成像技术可用于抗砷细胞拮抗效果实时定量检测。
- 郭淑丽罗先道杨丽程建兵杨磊
- 关键词：活细胞荧光染料激光共聚焦显微镜
