魏旭文
- 作品数：5 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用被引量：13
- 2003年
- 建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 。
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- 关键词：猪瘟生物素标记
- 大肠埃希氏菌表达猪瘟病毒E_2蛋白的纯化被引量：4
- 2003年
- 采用 pPROEX HTB融合蛋白表达系统 ,将猪瘟病毒E2 基因与 6×His的编码序列在大肠埃希氏菌BL2 1(DE3)中进行融合表达 ,表达蛋白质主要以包涵体形式存在。用 8mol/L尿素溶解包涵体后 ,利用镍离子金属螯合亲和层析法纯化蛋白。结果 ,在SDS PAGE上显示出一 17ku的目的蛋白条带 ,纯度达到 90 %以上。纯化后的蛋白变性。
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- 关键词：大肠埃希氏菌猪瘟病毒E2蛋白纯化包涵体金属螯合亲和层析
- 我国近期猪瘟分子流行病学动态被引量：18
- 2004年
- 利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核苷酸序列间的同源性在80 .7%～ 99.1 %,氨基酸同源性在 89.3%～98.9%。9株野毒分属于 2个不同的组群 ,其中 5株与我国经典的石门强毒和C 株疫苗毒同属于Subgroups1 .1 ,另 4株属于与C 株有较大差异的Subgroup2 .1。
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- 关键词：猪瘟分子流行病学
- 口蹄疫OX株全基因组cDNA的分子克隆、序列测定及分析
- 2004年
- 采用RT-PCR法对FMDVOX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5′UTR长1040nt,3′UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其它参考毒株进行序列比较,并对其基因特征进行分析。结果显示,OX株与OTwyl/97的核苷酸同源性最高,在基因组功能未知区和3A编码区具有两处明显的缺失现象,其一是在3A编码区有30nt的连续缺失,这与OTwyl/97株相同,其二是在功能未知区域有44nt的缺失,这与OTwyl/97株相同,与OAkesu58相似(43nt缺失)。
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- 关键词：口蹄疫基因组分子克隆RT-PCR
- 一种诊断猪瘟抗体的间接酶联免疫吸附测定方法
- 本发明的目的在于提供一种以重组蛋白为抗原建立间接酶联免疫吸附(ELISA)检测抗体的方法。该方法步骤包括，将猪瘟病毒结构蛋白E<Sub>2</Sub>基因中编码抗原的基因片段连接到质粒pGEM－T Easy载体上，获得重...
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- 文献传递
