何利华 作品数:139 被引量:346 H指数:10 供职机构: 中国疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 轻工技术与工程 更多>>
空肠弯曲菌耐药谱特征分析 被引量:13 2013年 目的分析十几年间我国空肠弯曲菌临床分离株对10种抗生素耐药谱特征,了解我国空肠弯曲菌耐药的变迁趋势。方法采用世界卫生组织(WHO)全球食源性病原菌感染网络(GFN)推荐的弯曲菌琼脂稀释法,测定1995年至今分离的116株空肠弯曲菌对6类10种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。结果经对实验结果整体分析,甲硝唑的总体耐药率最高为97.4%(113/116),四环素为82.8%(96/116),环丙沙星为80.2%(93/116),萘啶酸为79.3%(92/116),左氧氟沙星和氨苄西林耐药率相同,为40.5%(47/116),氯霉素为18.1%(21/116),庆大霉素为8.6%(10/116),链霉素为4.3%(5/116),最低为红霉素0(0/116)。随着时间的推进,萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星和氨苄西林的MIC有明显增高趋势;四环素、红霉素、庆大霉素、氯霉素和甲硝唑的MIC值变化不明显;链霉素的MIC值变化有下降的趋势。6.1%的菌株出现了8种抗生素多重耐药的结果,且菌株均出现在2010年后。经统计学分析,萘啶酸、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、氯霉素和氨苄西林6种抗生素在2001年前、2001-2005年、2006-2010年和2010年后4个时间段中耐药率差异有统计学意义。结论空肠弯曲菌对红霉素、庆大霉素以及链霉素3种抗生素依旧保持了较高的敏感性,对萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、甲硝唑以及氨苄西林6种抗生素产生了较大程度的耐药。 顾一心 何利华 刘红莹 刘夏阳 陶晓霞 张建中 张茂俊关键词:空肠弯曲菌 琼脂稀释法 最小抑菌浓度 耐药 肺炎支原体基因型快速分型试剂盒 本发明提供一种肺炎支原体基因型快速分型试剂盒,涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域。本发明基于质谱技术,构建了针对肺炎支原体进行快速分型鉴定的特异性多肽质谱模型,以及使用质谱技术进行分型的试剂盒。本发明试剂盒能够通过特异性指纹... 赵飞 张建中 肖迪 张慧芳 张永婵 胡源 陶晓霞 何利华 顾一心 孟凡亮文献传递 幽门螺杆菌免疫兔血清抗体特异性分析 被引量:1 2009年 对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)抗原、抗体的研究是Hp分型、检测及疫苗开发的基础。Hp免疫血清的制备已成为常规技术,但血清制备过程中的各种因素均可能影响免疫血清的抗体谱,从而引起同类研究间因所用Hp抗体不同导致的结果的差异。本研究对Hp全菌免疫的兔血清抗体谱加以分析,讨论Hp免疫血清制备中存在的一些问题和应对方法。 郭凤华 孟凡亮 何利华 张建中关键词:幽门螺杆菌 免疫血清制备 HP抗体 疫苗开发 抗体谱 传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性的影响分析 被引量:1 2016年 目的应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响。方法将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原。每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定。进一步采用Nano LC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定。结果幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性。幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类(29.6%)、核糖体蛋白(15.5%)、外膜蛋白(10.7%)、假想蛋白(19.0%)、转运相关蛋白(2.0%)、其他蛋白(22.0%)。结论细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性。 张慧芳 陶晓霞 何利华 闫笑梅 王忱诚 张建中 肖迪关键词:肽质量指纹谱 细菌鉴定 传代 稳定性 10kDa以上幽门螺杆菌感染相关尿液差异表达蛋白的高效液相色谱-质谱分析 被引量:2 2016年 背景:除消化性溃疡和胃癌外,幽门螺杆菌(Hp)感染尚与多种胃肠外疾病密切相关。目前临床上尚无Hp感染的体液检测方法。目的:鉴定相对分子质量在10 k Da以上的Hp感染相关尿液差异表达蛋白,为Hp感染的体液诊断提供潜在生物学标记物。方法:志愿者留取晨起中段尿,并行13C-尿素呼气试验以明确Hp感染情况。Hp阴性和阳性尿液样本各取15例,分别混合后提取蛋白,以高效液相色谱-质谱系统分离蛋白、采集数据,行label-free定量分析。另取Hp阴性尿液样本15例和阳性尿液样本11例,对差异表达分析结果进行全扫描验证。应用IPA软件对鉴定出的尿液差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:Label-free定量分析共检测到475个尿液蛋白,并确定其中42个为差异表达蛋白。经外部扫描验证,最终鉴定出11个显著上调的差异表达蛋白。生物信息学分析揭示了这些差异表达蛋白的分子功能、参与的生物学通路、相关疾病等信息。结论:鉴定出的11个10 k Da以上尿液差异表达蛋白有望成为诊断Hp感染的生物学标记物,并可为Hp感染与胃肠外疾病的相关性研究提供分子水平的证据。 张慧芳 孟凡亮 何利华 何利华 肖迪关键词:幽门螺杆菌 蛋白质组学 生物学标记 pYV质粒对小肠结肠炎耶尔森氏菌粘附侵袭上皮细胞及细胞毒性作用的影响 被引量:1 1996年 小肠结肠炎耶尔森氏菌是一个重要的肠道致病菌,对其毒力质粒的研究已引起广泛关注。本文研究了含质粒和不含质粒菌株对上皮细胞(Hep-Ⅱ)粘附、侵袭、细胞毒性作用的差别。结果表明,质粒在该菌对上皮细胞的侵袭性方面没有明显影响,对粘附和细胞毒性作用却有较为明显的影响。 景怀奇 邵祝军 张维妍 何利华 尚德秋 武素怀关键词:小肠结肠炎 耶尔森氏菌 粘附 上皮细胞 一种基于胃液多重实时PCR检测的幽门螺杆菌(HP)个体化治疗辅助诊断方法 本发明公开了一种基于胃液多重实时PCR检测的幽门螺杆菌(HP)个体化治疗辅助诊断方法。本发明所述方法能从10-500μl胃液标本中同时检测出HP的特异基因、HP克拉霉素耐药突变位点A2143G和A2142G、以及相应患者... 张建中 彭贤惠 刘杰 何利华 赵飞 闫笑梅 张茂俊 张慧芳文献传递 基于标本核酸的肺炎支原体基因分型荧光PCR方法的建立和应用 2024年 目的建立一种基于临床标本核酸的肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)核酸检测及基因分型方法。方法通过基因组学比对,选取Mp Genotype 1型和Genotype 2型菌株特异性靶序列设计合成引物和探针,建立Mp双荧光探针PCR检测分型方法,同时评价该方法的特异度、准确度、检测限和重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床标本核酸进行检测,并与已报道的荧光PCR方法进行比对。结果对与Mp种属关系相近的其他种支原体以及常见呼吸道细菌、病毒等18种病原体的核酸进行检测,结果显示均无交叉反应;对90份Mp核酸的检测及分型的准确度为100%。该方法对于Genotype 1型和Genotype 2型Mp检测限均为1.0拷贝/μl的核酸样本,组内、组间重复性实验变异系数均小于2.5%。对88份临床标本核酸的检测中,与已报道的荧光PCR方法RepMp1体系的检测结果相比,Kappa值为0.675,P值为0.267,显示出高度的一致性。结论本研究所建立的Mp核酸检测及基因分型方法敏感度和特异度高,分型准确,可应用于各级省市疾控系统对Mp的监测与防控,促进Mp防控体系的完善,增强监测能力,对Mp的预警预测具有重要意义。 张倚玮 刘立雍 何利华 孟凡亮 顾瑞雪 龚杰 李少丽 赵飞关键词:肺炎支原体 实时荧光PCR 球形孢子丝菌STR分子标记及其应用 本发明涉及球形孢子丝菌STR分子标记及其应用。本发明首次提供一套球形孢子丝菌的微卫星位点(STR分子标记)组合,其中共包括25个高度多态的微卫星位点(SEQ ID NO:1‑25)。同时,提供了一套能够高效扩增球形孢子菌... 龚杰 李若瑜 张建中 何利华 万喆文献传递 蛋白电泳凝胶放置时间对蛋白丰度的影响分析 被引量:1 2014年 目的利用高分辨力的双向电泳技术检测蛋白电泳后凝胶中的蛋白含量随时间推移的损失情况。方法用双向电泳蛋白裂解液提取鼠疫EV菌株(无毒疫苗株)全菌蛋白并定量。取800肚gEV蛋白,平行进行两块双向电泳凝胶电泳,电泳结束后一块凝胶立刻固定并染色,另一块凝胶4℃放置8h后固定并染色,使用ImageMaster 2D Elite软件比较分析两块凝胶蛋白点数量及蛋白丰度。结果相比直接固定染色的凝胶,8h后固定染色的凝胶中蛋白点扩散丢失严重,比电泳后直接固定凝胶少346个蛋白点,且部分相邻蛋白点发生融合,含量在20~350ng的低丰度蛋白65.9%因蛋白扩散丢失。结论蛋白凝胶放置8h后大量低丰度蛋白由于扩散会丢失,并直接影响后续免疫印迹、质谱鉴定等实验结果的可靠性。 顾一心 何利华 孟凡亮 张建中 赵飞关键词:蛋白电泳