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四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用被引量：8: 2007年; 以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。该iELISA与导致常见牛病的非相关抗原无交叉反应。用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本,结果与ICG的符合率为93.33%(140/150)。以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国荷斯坦奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清,结果iELISA与TST的总符合率为87.32%(489/560)。对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性,iELISA与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。; 吴波张书环邓铨涛项杰陈军刘朝陈鑫宋念华陶淑珍黄继根韩永佩赵波林祥梅陈焕春郭爱珍; 关键词：IELISA 牛结核病 MPB70 CFP10 ESAT-6

猪1型圆环病毒全基因组克隆及其感染性初步鉴定被引量：3: 2006年; PCV1 was isolated from IBRS-2 cells line,and its complete genomic sequence was cloned by PCR.Sequence analysis indicated that this PCV1 strain shares >98% nucleotide identity with the other PCV1 strains in GenBank.Then double copy molecule clone(pSK2PCV1) was constructed and used to transfect PK-15 cell line.The results of indirect immunofluorescence(IIF) and RT-PCR suggested that pSK2PCV1 could form infectious virus after being transfected into PK-15 cells.; 曹胜波刘学芹刘朝孙敏轩陈焕春; 关键词：全基因组感染性

编码山羊补体C3d与口蹄疫病毒VP1融合蛋白重组质粒的构建及表达被引量：2: 2008年; 旨在构建含分子佐剂山羊补体C3d基因的O型口蹄疫病毒VP1基因真核表达质粒。克隆山羊C3d基因,通过linker(G_4S)_2将3拷贝C3d基因串联;克隆羊源O型口蹄疫病毒VP1基因,通过linker(G_4S)_2与3拷贝C3d基因相连,构建重组质粒pUC19-VP1-C3d_3。将VP1-C3d_3融合基因亚克隆入含有分泌表达信号肽tPA序列的pcDNA3.1(+)CMV启动子下游,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3。在脂质体介导下,将pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3转染HeLa细胞。间接免疫荧光分析表明,VP1-C3d_3在HeLa细胞中获得了瞬时表达,Western blot分析证实转染的阳性细胞能分泌预期大小(133 kD)的融合蛋白。重组质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3为研制以羊补体C3d为分子佐剂的口蹄疫新型疫苗奠定了基础。; 凌洁玉刘朝佟铁铸樊惠英张德坤陈焕春郭爱珍; 关键词：口蹄疫病毒VP1基因分子佐剂真核表达

湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析被引量：53: 2007年; 本研究旨在分离鉴定湖北地区致奶牛乳房炎的病原菌,鉴定细菌的耐药特征,为奶牛乳房炎防治提供理论依据。从湖北两个主要奶牛小区的9个不同规模的奶牛场采集牛奶样本200份,经检测,其中3份为临床乳房炎样本,49份为隐性乳房炎。两地区隐性乳房炎的检出率分别为36.4%(20/55)与20%(29/145)。两地区乳房炎牛奶的细菌种类分布也各不同。其中武汉东西湖地区停乳链球菌的分离率最高,占33.3%(8/24),而宜昌夷陵区以金黄色葡萄球菌分离率最高,占29%(9/31),其次为无乳链球菌,占25.8%(8/31)。从乳房炎牛奶中共分离到7种细菌共55株,其中金黄色葡萄球菌11株,表皮葡萄球菌10株,无乳链球菌10株,停乳链球菌14株,乳房链球菌2株,大肠埃希氏菌4株,克雷伯氏菌4株。分别对所有分离株进行12种药物的敏感性试验,结果表明所有菌株对先锋V、氧氟沙星均高度敏感,对临床常用的青霉素、链霉素具有较高的耐药性。; 刘朝王京仁张成栋吴波韩永佩赵波余亚军王建华刘友斌程贵宝冯哲田地陈焕春郭爱珍; 关键词：奶牛乳房炎抗药性

奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定以及生物被膜的检测: 奶牛乳腺炎是导致奶牛行业严重损失的一种常见疾病之一。一般分为临床型乳腺炎和隐性乳腺炎两种。而隐性乳腺炎则因为其无明显症状而难以发现，以至于在奶牛群中广泛存在，而且存在巨大的危害。本研究旨在分离鉴定湖北地区致奶...; 刘朝; 关键词：奶牛乳腺炎细菌生物被膜; 文献传递

牛分枝杆菌特异性四联融合蛋白在牛结核病诊断中的临床应用被引量：5: 2007年; 目的以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。方法用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。iELISA与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本;以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国黑白花奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清;对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性。结果iELISA与ICG的符合率为93.33%(140/150),与TST的总符合率为87.32%(489/560),与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。结论该方法具有较高的灵敏度与特异性,与其它方法有较高的符合率。; 吴波张书环邓铨涛项杰陈军刘朝陈鑫韩永佩赵波陈焕春郭爱珍; 关键词：IELISA 融合蛋白牛结核病 MPB70 CFP10 ESAT-6

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刘朝