吴红联
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：北京大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅科技攻关项目辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省高校科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白小鼠的繁殖及其表型鉴定
- 2015年
- 目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)小鼠,为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配,产生子代动物,利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术,分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果 PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组;活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达;睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。
- 王志茹李军刘晓梅吴红联朱德生
- 关键词：睾丸特异性基因重组绿色荧光蛋白
- 5-脂氧化酶转基因小鼠表型初步研究
- 2015年
- 目的建立5-脂氧化酶（5-LO）高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化（AS）发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT—PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠：RT—PCR实验结果显示，转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中，两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4（LTA4）、白三烯B4（LTB4）和半胱酰胺-白三烯受体2（Cys—LTR2）的表达存在差异（P〈0．05），脾和肾脏中LTB4、白三烯C4（LTC4）及Cys—LTR2的表达存在差异（P〈0．05），肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1（Cys-LTR1）的表达存在差异（P〈0．05）。C反应蛋白（CRP）、白介素-1β（IL-1β）、血小板衍生因子（PDGF）、坏死因子-κB（NF-κB）等细胞因子检测结果显示，在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血压测定结果显示，转基因小鼠高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血脂检测结果显示，两种小鼠未见明显差异（P〉0．05）。结论成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。
- 张梅英杨葳吴红联董婉维周生来于洋王惟郭晓冲郑志红
- 关键词：转基因小鼠
- 突变DJ-1转基因小鼠模型的建立被引量：3
- 2009年
- 目的探讨DJ-1L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行聚合酶链反应和Southern blot检测,对Southern blot鉴定阳性的转基因小鼠进行逆转录聚合酶链反应和Western blot检测。结果共产生20只子代小鼠,1号和7号为DJ-1L166P转基因阳性小鼠。1号转基因小鼠大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的DJ-1mRNA表达,均高于正常对照小鼠,但只有大脑中DJ-1mRNA的表达水平显著高于正常对照小鼠(P<0.05);7号转基因小鼠只有肝、肺组织中有DJ-1mRNA表达,也高于正常对照小鼠,但差异无统计学意义。只有1号小鼠大脑有His标签蛋白的表达。结论成功获得1只DJ-1L166P基因突变转基因小鼠模型,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。
- 张梅英吴红联蔺美娜李兆阳周生来于洋王惟吕相川王禄增
- 关键词：DJ-1基因帕金森症转基因小鼠
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的建立
- 目的：
动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种严重危害人类健康的疾病,是导致心肌梗死、脑卒中等疾病的危险因素。目前国内外研究热点多集中于从基因诱导方面研究AS形成的病理机制,近年来证据表明5-脂...
- 吴红联
- 关键词：5-脂氧化酶动脉粥样硬化转基因细胞转染
- 文献传递
- 5-脂氧化酶与动脉粥样硬化的研究进展被引量：4
- 2009年
- 动脉粥样硬化(AS)及其并发症是当今世界上导致死亡的最常见的病因之一。AS发病机制有多种学说,其中动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病的学说已为广大学者所接受。白三烯(LTs)是促进炎症反应的脂类调控因子,在心血管组织中具有强烈的致炎作用,5-脂氧化酶(5-LO)能够氧化花生四烯酸生成LTs等花生酸类物质。近年对动脉粥样硬化的研究中发现5-LO途径及其下游产物LTs对AS的形成、发展及动脉粥样硬化斑块的不稳定性有重要作用。本文结合国内外文献,对5-LO基因结构、蛋白结构和代谢活性等生物学特性以及5-LO及其下游产物与动脉粥样硬化发生、发展的关系进行了总结,对了解和研究动脉粥样硬化疾病及其治疗具有重要意义。
- 吴红联张梅英
- 关键词：动脉粥样硬化5-脂氧化酶白三烯炎症
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备被引量：2
- 2010年
- 目的建立5-脂氧化酶(5-LO)转基因小鼠进行动脉粥样硬化的发病分子机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8 kb)导入BDF1受精卵雄原核并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、Southern blot检测,对9、20、24号转基因小鼠分别提取腹腔细胞、骨髓细胞及脾、肾组织总RNA和蛋白,并采用RT-PCR、Western blot方法进行转录水平检测和蛋白表达检测。结果共产生25只子代小鼠,经PCR和Southern检测获得7只阳性小鼠,经RT-PCR和Western blot检测结果表明,9、20、24号转基因小鼠腹腔细胞、骨髓细胞、脾、肾5-LO和5-脂氧化酶激活蛋白(FLAP)在RNA和蛋白水平表达均高于正常BDF1对照小鼠,且统计学分析腹腔细胞、骨髓细胞表达均具有显著差异(P<0.05)。结论成功建立5-LO转基因小鼠模型。
- 张梅英吴红联杨葳李兆阳董婉维周生来于洋王惟吕相川秦英郑志红王禄增
- 关键词：5-脂氧化酶动脉粥样硬化转基因
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备
- 目的建立5-脂氧化酶(5-LO)转基因小鼠进行动脉粥样硬化的发病分子机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8kb)导入BDF1受精卵雄原核并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织...
- 张梅英吴红联杨葳李兆阳董婉维周生来于洋王惟吕相川秦英郑志红王禄增
- 关键词：5-脂氧化酶动脉粥样硬化转基因小鼠
- 文献传递
- 5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264．7细胞中的表达的初步研究
- 2010年
- 目的构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264．7细胞中的表达，为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体。方法从人全血标本中提取细胞总RNA，以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增5-LO基因，分别构建5-LO目的基因的克隆载体与表达载体，提取质粒，进行酶切、PCR和DNA测序鉴定，将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264．7细胞，RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况。结果构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO，经酶切、PCR及测序鉴定正确；转染细胞后，在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达，RT—PCR和Westemblot结果表明转染pEGFP．5-LO的RAW264．7细胞中有5-LO的表达。结论成功克隆了5-LO基因，构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264．7细胞中表达5-LO蛋白，为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础。
- 吴红联张梅英王惟王禄增
- 关键词：5-脂氧化酶基因克隆真核表达RAW264.7细胞
