孙强玲
- 作品数：9 被引量：41H指数：5
- 供职机构：复旦大学附属中山医院肝癌研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- CK8寡糖链结构及翻译水平改变与人肝癌细胞转移相关性研究被引量：7
- 2007年
- 糖组学方法筛查人肝癌细胞转移过程中发挥重要作用的核心岩藻糖基化蛋白质分子,解析比较筛出的差异蛋白——细胞角蛋白8(CK8)翻译及糖基化修饰改变与人肝癌细胞转移潜能的关系.应用双向电泳(2-DE)、凝集素亲和印迹、凝集素亲和沉淀联合质谱分析技术,筛查并验证与肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白;应用细胞免疫荧光和蛋白质免疫印迹检测CK8的蛋白质表达情况;应用免疫沉淀结合多种凝集素亲和印迹,推测其与肝癌转移相关的寡糖链结构改变.研究发现,3种不同转移潜能人肝癌细胞Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H的扁豆凝集素(LCA)亲和印迹表达谱中,分子质量55～60ku、等电点4～6区域处有核心岩藻糖基化蛋白呈差异表达,质谱鉴定为CK8.LCA亲和沉淀及蛋白质印迹进一步验证CK8异常核心岩藻糖基化与肝癌转移相关;研究发现,CK8分布于细胞浆内,在MHCC97-L和MHCC97-H细胞中蛋白质表达水平较Hep3B高,在MHCC97-H中与LCA和蓖麻凝集素(RCA-1)的亲和力较Hep3B强.以上结果提示,2-DE和凝集素印迹技术联合MALDI-TOF-MS/MS分析可用于筛查疾病过程相关的异常糖基化蛋白质分子,CK8蛋白水平、核心岩藻糖基化及β-1,4末端半乳糖基化的增加均与肝癌细胞转移潜能相关.
- 代智刘银坤郭坤孙强玲卢雯静杨芃原
- 关键词：肝癌细胞肿瘤转移CK8
- 组织特异性启动子及其在肿瘤基因治疗中的应用被引量：5
- 2004年
- 随着基因治疗研究的深入 ,愈来愈多的组织特异性启动子已被用于调控目的基因在靶器官中的表达 ,尤其是携带治疗性基因可以实现对肿瘤组织的特异性杀伤作用 ,组织特异性启动子的应用已成为基因治疗中的一个重要手段 ,现综述各系统启动子的分类及其应用。
- 孙强玲郑晓飞
- 关键词：组织特异性启动子肿瘤基因治疗肿瘤血管
- 人健康肝组织刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白组学研究被引量：9
- 2006年
- 通过凝集素亲和层析技术结合双向电泳-质谱技术构建人健康肝组织Con A结合型糖蛋白数据库并进行生物信息学分析;利用研磨和匀浆两步法抽提人健康肝组织总蛋白,通过固相凝集素亲和层析获得与刀豆凝集素(Con A)结合型糖蛋白,经过双向电泳、荧光染色、图像分析获得人健康肝组织表达谱;通过MALDI-TOF-MS质谱鉴定及生物信息学分析获得人健康肝组织数据库,并建立了高重复性的人健康肝组织Con A结合型糖蛋白表达谱,图谱均点数为301±15,挖取139个蛋白点进行质谱鉴定,去冗余后确定了85个与细胞周期、代谢通路相关的蛋白质;通过NetNGlyc和NetOGlyc对糖基化位点进行预测,并按照geneontology对其功能定位等进行分类,并对其中与肿瘤发生发展相关的蛋白进行具体分析.由此可见,凝集素亲和层析结合2-DE,质谱鉴定是一种高通量的检测方法,Con A结合型糖基化修饰谱的构建为后续研究奠定了基础.
- 孙强玲刘银坤卢雯静程钢周海君周信文魏黎明代智郭坤陆皓杰
- 内质网甘露糖甙酶-Ⅰ样蛋白的研究进展
- 2006年
- 内质网甘露糖苷酶-Ⅰ样蛋白(EDEM)是受内质网应激诱导之后,启动内质网相关糖蛋白降解(GERAD)途径发生的一种有酶结构域但无酶活性的蛋白。现就EDEM编码基因及其蛋白质的结构与功能解析、EDEM参与的GERAD途径,特别是EDEM的作用机制及诱导调控等诸方面予以综述。
- 孙强玲刘银坤
- 关键词：内质网蛋白质折叠
- HBV启动子对肝细胞具有特异性转录活性的研究
- 2005年
- 目的:探讨HBV转录调控核心序列在肝细胞中转录的活性。方法:构建HBV增强子和启动子调控的荧光素酶报告载体,用脂质体转染法将其转染肝细胞和非肝细胞,双荧光素酶报告基因试验检测其在不同细胞中的转录活性。结果:HBV启动子在2.2.15细胞中转录活性最高,在其他肝细胞中的转录活性显著高于非肝细胞。结论:由HBV启动子构建的载体可能是一种新颖的有前景的靶向性肝癌细胞基因治疗载体。
- 孙强玲杨义军付汉江杨明铁轶朱捷孙志贤郑晓飞
- 关键词：转染启动子基因疗法荧光素酶
- 热休克蛋白27在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达及机制研究被引量：12
- 2007年
- 利用不同转移潜能肝癌细胞系探讨热休克蛋白27(HSP27)参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制.细胞免疫荧光技术、RT-PCR和免疫印迹技术显示,HSP27在转移潜能不同的肝癌细胞Hep3B、MHCC97L和MHCC97H中定位于细胞浆,亦可见于细胞核,HSP27 mRNA和蛋白质的表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关.高转移潜能肝癌细胞系MHCC97H的HSP27 RNA干扰试验结果显示,HSP27 RNA干扰后MHCC97H的侵袭(MHCC97H组:21.36±2.92;对照RNAi组:19.88±2.23;RNAi组:11.40±2.05)、运动能力(MHCC97H组:26.35±3.29;对照RNAi组:24.43±3.17;RNAi组:10.92±2.27)明显减弱,细胞凋亡显著增加(MHCC97H组:15.12%;对照RNAi组:17.56%;RNAi组:27.64%).同时进行信号转导基因芯片检测发现,HSP27干扰后核因子κB(NF-κB)通路抑制,并且免疫印迹显示细胞核内活化的NF-κBp65减少,细胞内磷酸化IκBα降低.另外,免疫共沉淀检测发现,在肝癌细胞内HSP27可与IKKβ、IκBα共沉淀,且在HSP27RNA干扰后IKKβ与IKKα结合能力下降.这些结果提示,HSP27可能通过参与细胞内NF-κB通路的激活,影响细胞凋亡和细胞运动,在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.
- 郭坤刘银坤周海君代智陈洁孙瑞霞孙强玲卢雯静康晓楠
- 关键词：热休克蛋白27信号转导RNA干扰
- 人端粒结合蛋白TRF1的克隆、表达和抗体制备被引量：4
- 2004年
- 利用RT PCR技术 ,从HeLa细胞的cDNA文库中扩增到人端粒结合蛋白 1(hTRF1)基因编码区序列 ,克隆至pUCm T载体 ,测序正确后 ,构建带His6 tag原核表达载体pET 2 8c TRF1,经IPTG诱导表达的His6 TRF1融合蛋白分子量约为 6 5kD ,Western blot证实表达产物可特异地与TRF1抗体sc 6 16 5结合。用Ni2 + NTA胶亲和层析纯化可得到电泳均一的融合蛋白 ,免疫新西兰纯种大白兔 ,获得特异性好的多克隆抗体 ,该抗体可用于免疫荧光染色和Western blot方法检测哺乳动物细胞内源性的TRF1分子。
- 江红郑晓飞罗瑛朱捷付汉江孙强玲陈长浩孙志贤
- 关键词：原核表达抗体克隆
- 健康人肝组织麦胚凝集素亲和型糖蛋白表达谱分析被引量：6
- 2007年
- 目的分析健康人肝组织麦胚凝集素(wheatgermagglutinin,WGA)亲和型糖蛋白表达谱。方法从30例健康人肝组织混合样本的总蛋白中用WGA凝集素亲和层析分离纯化糖蛋白,再利用双向电泳结合SYPRO Ruby荧光染色进一步分离WGA亲和型糖蛋白。目的蛋白质点经质谱鉴定后对其进行生物信息学分析及功能分类。结果初步建立WGA亲和型糖蛋白的双向电泳图谱,图谱均点数为(650±50)个,质谱鉴定并去冗余共获116个蛋白。经生物信息学分析104个蛋白具有不同程度的N糖基化位点,最后按Gene Ontology的分类原则进行功能分类。结论凝集素亲和层析结合双向电泳荧光染色、质谱鉴定是一种高通量的检测方法,WGA亲和型糖蛋白表达谱的初步构建为后续研究奠定了基础。
- 卢雯静刘银坤孙强玲周海军周新文郭坤陆豪杰杨芃原
- 关键词：双向电泳
- 人肝脏相关ConA和DSA结合型糖蛋白组学研究
- 目的：随着蛋白组学研究领域的急剧扩展，糖蛋白糖链结构与功能的研究是当前蛋白质组学发展后的重要延伸领域。在此我们选用可以识别二天线型和高甘露糖型结构的刀豆凝集素Con A通过固相亲和层析的富集糖蛋白，通过双向电泳、质谱技术...
- 孙强玲
- 关键词：2-DEDSADIGEDSA
- 文献传递
