李则学
- 作品数：10 被引量：40H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 氟尿嘧啶代谢因子表达水平与进展期胃癌SOX方案新辅助化疗效果被引量：6
- 2014年
- 目的分析进展期胃癌患者新辅助化疗应用SOX方案后肿瘤组织标本氟尿嘧啶代谢因子水平变化与临床疗效的相关性。方法回顾性分析2012年6月至2013年3月解放军总医院普通外科收治的32例胃癌患者临床资料，其中，男23例、女9例，年龄56．6（40—75）岁。治疗前分期评估均为第7版美国肿瘤联合会（AJcc）Ⅱ一Ⅲ期。给予口服氟尿嘧啶（替吉奥胶囊80mg·m^-1。·d^-1，第1—14天）联合奥沙利铂（130mg／i^2，静脉滴注，第1天）新辅助化疗后进行外科手术切除，术中取得新鲜肿瘤及正常组织标本，应用实时反转录（RT）．PCR技术对氟尿嘧啶代谢因子胸腺嘧啶磷酸化酶（TP）、胸腺嘧啶合成酶（Ts）、二氢嘧啶脱氢酶（DPD）、乳清酸磷酸核糖转移酶（OPRT）的表达水平进行检＇钡4，分析其与化疗效果的相关性。结果32例患者均完成了至少2个周期新辅助化疗，21例患者肿瘤达临床缓解，有效率为65．6％（21／32）。10例患者肿瘤达组织学缓解，反应率为31．3％（10／32）。RT—PCR检测结果显示：临床缓解胃癌患者组织中OPRTmRNA表达水平高于未缓解者（3．95±0．81比1．79±0．64，P=0．005）；弥漫型胃癌患者（／2=22）胃癌组织中OPRTmRNA表达显着高于肠型胃癌（n=10）患者（2．54±0．75比1．49±0．56，P：0．014）。有淋巴结转移患者（n=13）胃癌组织中Ts、TPmRNA表达均高于无淋巴结转移（n=19）者（均P〈0．05）。而DPDmRNA各组表达差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论肿瘤组织中OPRTmRNA表达水平与新辅助化疗疗效相关，Ts、TP表达水平与新辅助化疗后淋巴结转移相关。OPRT、TS和TP将有可能成为进展期胃癌以氟尿嘧啶药物为基础新辅助化疗方案的有效性预测因子。
- 李涛梁美霞袁静郭旭冯道夫李婷腾达彭正吴欣李则学王华陈凛
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案氟尿嘧啶
- 外周血Tcm和Treg在胰腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系被引量：4
- 2016年
- 目的探讨胰腺癌患者外周血中央型记忆T细胞(central memory T cells,Tcm)和调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)的表达情况,及其与临床病理因素的关系。方法选取2014年6月—2016年1月解放军总医院普通外科收治的128例未治胰腺癌患者作为胰腺癌组,另选取同期48例体检健康者作为健康对照组。两组均采集外周血5 ml,分离单个核细胞,以荧光标记的抗CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CD25、FOXP3抗体染色,运用流式细胞术检测Tcm及Treg表达率。并进一步分析胰腺癌组Tcm和Treg表达及其与临床病理因素的关系。结果胰腺癌组Tcm及Treg表达率均显著高于健康对照组[(19.38±5.42)%vs(12.22±3.21)%,t=8.60,P=0.00;(2.34±0.89)%vs(0.17±0.03)%,t=16.87,P=0.00]。胰腺癌组Tcm及Treg表达率均与临床分期及淋巴结转移相关(P均<0.05),Tcm表达率还与患者年龄相关(χ2=28.00,P=0.00)。结论未治胰腺癌患者外周血Tcm和Treg高表达,提示存在一定程度的抗肿瘤预存免疫记忆,但呈现为免疫抑制状态;其表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移相关。
- 郑丽娜李则学张兰梁凯梁文涛刘海亮
- 关键词：胰腺肿瘤T淋巴细胞亚群
- 慢病毒载体用于羊骨髓间充质干细胞基因表达实验被引量：1
- 2016年
- 目的探讨慢病毒载体用于羊骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)基因表达关键问题。方法携带绿色荧光蛋白基因(Zs Green)的慢病毒载体感染羊MSCs获得慢病毒转染MSCs(MSCz),采用流式细胞仪、MTT检测、三系分化等方法对MSCz比例、细胞形态、增殖及分化潜能进行评价。结果 MSCz保持骨髓间充质干细胞特有的长梭形细胞形态,并高效表达绿色荧光蛋白。流式细胞仪分析显示MSCz比例随感染复数(multiplicity of infection,MOI)增加而升高,在MOI值为20时MSCz比例可达71.2%。细胞生长曲线分析表明MSCz与MSCs增殖模式和能力相同。三系分化证实MSCz与MSCs在向骨、脂肪和软骨细胞分化方面没有差异。过氧化氢和低氧处理表明MSCz、MSCs对这些不利环境反应相同。结论慢病毒载体是羊MSCs基因表达的良好载体。
- 梁文涛丁毅王嵘张勇李则学梁凯赵云山
- 关键词：慢病毒载体转染
- 移植肝细胞与胶原水凝胶单元皮下创建工程化肝组织
- 2015年
- 背景:胶原水凝胶可为肝细胞生长和组织重建提供良好的基质支持,并且以胶原为基质构建的工程化组织易于合并生长,形成融合组织。目的:尝试将肝细胞/胶原水凝胶复合物打散成小块肝单元,堆积在皮下腔中,提高工程化肝组织厚度。方法:将新鲜分离的大鼠肝细胞与胶原水凝胶复合,构建肝细胞/胶原水凝胶复合物,待固化后将其打散成小块肝单元,以未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物作为对照。取6只SD大鼠,其中3只切除2/3肝脏,诱导肝再生,于双侧腹股沟皮下腔中分别植入打散与未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物;另3只于双侧腹股沟皮下腔中分别植入打散与未打散的肝细胞/胶原水凝胶复合物。植入后7 d取材,采用苏木精-伊红染色、免疫组化染色、印度墨水灌注等方法对工程化肝组织形成情况进行评价。结果与结论:两组移植物均在皮下腔中形成了血管工程化肝组织,但小块肝单元相互融合,形成了大块血管工程化肝组织,肝组织厚度可达4 mm;整块植入的肝移植物只形成小块肝组织,其厚度只有几层细胞。免疫组织化学染色证实,血管工程化肝组织中的肝细胞具有天然肝细胞的特征及功能。肝部分切除实验表明,工程化肝组织具有对肝部分切除再生刺激产生反应的能力。结果表明将肝细胞/胶原水凝胶移植物打散成小块单元,堆积在皮下腔中,可提高工程化肝组织的厚度。
- 李则学张兰梁文涛梁凯卫博
- 关键词：肝细胞胶原水凝胶生物材料肝组织工程
- 细胞毒性T淋巴细胞和细胞因子诱导杀伤细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布被引量：5
- 2010年
- 目的研究细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布特点。方法采用皮下注射人低分化胃腺癌细胞株BGC-823的方法建立荷人胃癌裸鼠模型。将荷瘤裸鼠分为2组，每组9只，分别经尾静脉输入^99Tc^m标记的CTL和CIK细胞。输入后1、6和24h，每组各取3只裸鼠，应用单光子发射型计算机体层摄影术（SPECT）观察2种细胞在裸鼠体内的分布状况，之后处死动物取肿瘤和肝、脾、肾、肺、肠等器官，以井型探测器测量每克组织百分注入活度（％ID／g），计算肿瘤组织％ID／g与正常组织％ID／g的比值（T／NT）。结果SPECT示踪显示2种细胞输入裸鼠体内后均迅速分布至肿瘤和肝、脾、肾、肺、肠等器官。CTL的％ID／g峰值由高到低依次为肿瘤（7．79±0．46）、肝（4．12±0．51）、肠（2．71±0．16）、肾（1．44±0．25）、脾（1．24±0．12）和肺（1．12±0．11），各组织器官T／NT值均〉1；CIK细胞的％ID峰值由高到低依次为肝（6．64±0．67）、肿瘤（5．47±0．87）、肠（3．55±0．23）、肾（2．34±0．41）、脾（1．45±0．17）和肺（1．27±0.21），除肝以外，其他各组织器官T／NT值均〉1。细胞输入后1、6和24h在肿瘤组织的％ID／g值，CTL分别为2．35±0．28、4．58±0．52和7．79±0．46，CIK细胞分别为2．23±0．46、3．25±0．70和5．47±0．87，24h时间点CTL组明显高于CIK组（P〈0．05）。结论CTL和CIK细胞在荷瘤裸鼠体内的分布均具有明确的肿瘤靶向性。
- 武增瀛杜晓辉徐迎新李力刘巨超王金晶李则学
- 关键词：细胞毒性杀伤细胞
- 免疫细胞治疗对晚期胃癌患者外周血记忆T细胞的影响被引量：5
- 2015年
- 目的初步研究免疫细胞治疗对胃癌患者免疫记忆状态的影响。方法 2013年10月-2015年2月在我院普通外科行胃癌根治术的253例患者按照是否经过树突细胞、细胞毒性T淋巴细胞免疫细胞治疗分组,其中免疫治疗组72例,对照组181例,运用流式细胞术检测患者外周血CD4^+T(CM)(CD4^+CD45RO^+CD62L^+)、CD8^+T_(CM)(CD8^+CD45RO^+CD62L^+),CD4^+T_(EM)(CD4^+CD45RO^+CD62L^-)及CD8^+T_(EM)(CD8^+CD45RO^+CD62L^-)比例,分析晚期胃癌患者免疫记忆状态,并进一步分析免疫细胞治疗对免疫记忆形成的影响。结果胃癌患者中CD4^+T细胞中以T_(CM)为主,为54.52%±12.76%;而CD8^+T细胞中以T_(EM)为主,为24.49%±11.39%。相比对照组,免疫治疗组外周血中CD8^+T_(CM)比例显著降低(对照组31.59%±9.29%,免疫治疗组24.26%±7.71%,P=0.025),CD4^+T_(CM)比例显著降低(免疫治疗组47.86%±11.77%,对照组60.00%±11.05%,P=0.006),CD8^+T_(EM)显著升高(对照组20.00%±8.43%;免疫治疗组29.93%±12.40%,P=0.013)。结论记忆T细胞可以有效评价胃癌患者抗肿瘤特异性免疫状态,且免疫细胞治疗可以有效重建胃癌患者抗肿瘤免疫记忆。
- 李则学张兰李沛雨
- 关键词：胃癌T淋巴细胞亚群记忆T细胞免疫细胞治疗
- 胃癌患者外周血记忆T细胞和调节性T细胞的检测及临床意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨胃癌患者外周血记忆T细胞和调节性T细胞的分布规律及其与临床病理因素的关系。方法选取2013年1月-2014年6月我院普通外科140例胃癌患者为胃癌组,62例健康人为对照组,取外周血10 ml,分离单个核细胞,以荧光标记抗CD4、CD8、CD45RO和CD62L 4种抗体染色,运用流式细胞术检测两组患者外周血中CD4^+中央型记忆T细胞(CD4^+T_(CM),CD4^+CD45RO^+CD62L^+)、CD8^+中央型记忆T细胞(CD8^+T_(CM),CD8^+CD45RO^+CD62L^+)比例以及调节性T细胞(Treg,CD3^+CD4^+CD25^+FOXP3^+)比例,比较胃癌组与对照组的差异及T_(CM)和Treg比例与临床病理因素的关系。结果与健康对照组相比,胃癌组CD4^+T_(CM)显著升高(43.32%±9.86%vs 36.97%±6.72%,P=0.022),平均CD8^+T_(CM)比例显著升高(16.79%±9.43%vs 11.41%±4.67%,P=0.028),外周血平均Treg细胞比例显著升高(1.19%±0.24%vs 0.18%±0.09%,P=0.000),三者均与淋巴结转移情况相关。结论胃癌患者在荷瘤状态下体内呈现为免疫抑制状态,但存在一定数量的抗肿瘤预存免疫。
- 李则学张兰李沛雨
- 关键词：T淋巴细胞亚群记忆T细胞调节性T细胞
- 抗肿瘤治疗对晚期肿瘤患者外周血CD4+/CD8+记忆T细胞亚群的影响被引量：10
- 2013年
- 目的探索建立晚期肿瘤的免疫评估方法,并初步研究抗肿瘤治疗特别是免疫治疗对免疫记忆的影响。方法将31例晚期肿瘤患者按治疗与否分为未治组(17例)与经治组(14例),应用流式细胞术检测患者外周血CD4+中央型记忆T细胞(TCM)、CD8+TCM、CD4+效应型记忆T细胞(TEM)及CD8+TEM比例,分析晚期肿瘤患者免疫记忆特征及免疫治疗对免疫记忆的影响。结果 CD4+T细胞中以TCM为主,而CD8+T细胞中TCM、TEM比例相当。与未治组比较,经治组外周血中CD4+TCM和CD8+TCM比例显著降低(P<0.01,P<0.05),CD8+TEM显著升高(P<0.05)。进一步分析发现免疫治疗次数和患者CD8+TCM比例呈显著正相关(r=0.747,P=0.002)。结论记忆T细胞可有效评价晚期肿瘤患者的免疫状态,且免疫治疗可以有效纠正晚期肿瘤患者的免疫耗竭状态。
- 张兰李则学刘海亮梁文涛梁凯李力徐迎新
- 关键词：进展期肿瘤记忆T细胞
- 大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探
- 2014年
- 目的 探讨大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织的可行性，为构建组织工程肝寻找新的方法。 方法 新鲜分离的SD大鼠肝细胞接种在琼脂糖包被的培养皿上进行培养，待其形成肝细胞微球后采用直接注射方式植入大鼠腹股沟处皮下腔。1 周后取腹股沟处组织，HE 染色法观察生成的肝组织形态。 结果 体外培养3 d，肝细胞形成致密的肝细胞微球，直径大小在43 ～ 185 μm，HE 染色显示微球中的肝细胞保持天然肝细胞形态特征。将其植入大鼠腹股沟处皮下腔1 周，HE 染色显示植入的肝细胞成活，并呈三维肝样组织团，肝细胞保持其特有形态特征：胞体为圆形，核大而圆，多为双核。 结论 肝细胞微球皮下移植可形成肝组织，为组织工程肝的构建创建了新的方法。
- 张兰李则学刘海亮李沛雨
- CIK细胞回输对Ⅳ期结直肠癌患者外周血记忆及活化T细胞的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)回输对Ⅳ期结直肠癌患者外周血活化T细胞和中央型记忆T细胞的影响,初步分析CIK细胞的抗肿瘤机制。方法选择我院2014年10月—2015年10月收治的Ⅳ期结直肠癌患者47例,均以静脉输注的方式予3个周期CIK细胞治疗,治疗前和治疗结束后检测外周血中活化T细胞(CD38+HAL-DR+)及中央型记忆T细胞(CD45RO+CD62L+)的占比并进行比较。结果所有患者治疗前均行CIK细胞的制备,培养成熟的CIK细胞数量为(4.87±2.02)×108,其中CD3+CD8+T细胞和CD3+CD56+NK细胞占比分别为(74.31±15.45)%和(32.33±13.57)%。治疗前患者外周血中活化T细胞及中央型记忆T细胞占比分别为(15.35±8.46)%和(20.13±10.53)%,治疗后分别增高至(38.73±14.72)%和(41.18±10.67)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CIK细胞可通过扩增中央型记忆T细胞及激活T细胞来重建患者的抗肿瘤免疫,进而发挥抗肿瘤效应。
- 郑丽娜李则学张兰刘海亮
- 关键词：结肠肿瘤直肠肿瘤CIK细胞记忆T细胞
