王全会
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院放射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- mRNA靶点筛选方法研究进展被引量：18
- 2003年
- mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mRNA上可接近位点以确定靶位点的方法 ,包括mRNA实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mRNA实测分析法又包括多种针对自然折叠mRNA的实验分析技术 ;即基因walk技术 ,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术 ,酶作图法确定二级结构技术 ,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。
- 王全会毛建平
- 关键词：MRNA反义核酸
- 寡核苷酸文库小片段序列的高效快速测定方法
- 本发明涉及生物学领域，发明了寡核苷酸文库小片段序列的连接测定方法：通过将文库小片段序列连接进行序列测定，达到1次序列测定反应可以获得10至30条左右文库小片段序列的目的，相当于发明前10至30次序列测定反应功效，其费用约...
- 毛建平王利红王全会柳晓兰
- 文献传递
- 桥式PCR,一种简易连接DNA标签序列的方法(英文)被引量：1
- 2009年
- MAST方法采用人工文库的DNA标签序列鉴定mRNA的可接近位点。大量的标签序列通过扩增和克隆测序达到阐明mRNA结合位点图。设计了单一引物的PCR,其引物在标签序列两端结合搭桥,在扩增中DNA标签序列在搭桥引物的作用下进行连接,连接的标签序列再克隆和测序。十几条这样的连接产物包含了上千条标签序列。该PCR方法简单、高效以用于高通量的方式对标签序列测序。
- 毛建平王全会周颖方静崔玉芳
- 关键词：生物反应器小鼠胚胎干细胞拟胚体心肌细胞分化
- Fas基因mRNA反义靶点筛选和体外验证
- 2006年
- 应用PARASS(poly-A anchored RNA accessible sites screening)技术筛选Fas基因mRNA获得3个潜在反义作用靶点,靶点1、2、3分别位于Fas基因297nt-317m、619nt～639nt和662nt- 682nt。设计了对应靶点的反义寡核苷酸A1、A2、A3和10-23型DNAzyme D1、D2和D3。将反义寡核苷酸和Fas基因RNA结合再加入RNase H进行反应,10-23型DNAzyme则直接与Fas基因 RNA作用,结果表明:3个靶点的反义寡核苷酸组及DNAzyme均能降解Fas基因RNA,为有效靶点,其靶点反应优势次序为靶点3>靶点1>靶点2。而非靶点对照组和有效靶点突变了2个碱基的对照组均没有反应。靶点2和靶点3与ISIS公司经过多次实验筛选到的Fas反义作用靶点位置基本相同,表明PARASS技术的有效性和可靠性。获得的有效反义寡核苷酸和DNAzyme为后续研究打下基础。
- 左刚韩慧明田晓丽王全会毛建平
- 关键词：FAS
- 采用搭桥引物扩增方法连接寡核苷酸文库小序列
- 本发明涉及生物学领域，发明了两端有固定序列的寡核苷酸文库小序列的连接测定方法，结果1次序列测定反应可以获得约8至20条文库小序列，相当于发明前8至20次序列测定反应功效，其费用约为发明前的二十分之一至八分之一之间。此方法...
- 毛建平王全会袁国刚毛秉智
- 文献传递
- 大肠杆菌16S rRNA的核酶设计和初步应用被引量：2
- 2008年
- 针对细菌rRNA研发抑制细菌增殖的新型抗菌素是抗生素研究领域的新课题。细菌rRNA与基因mRNA一样自然形成折叠卷曲高级结构,其结构上可以结合反义核酸的位点即靶点,靶点的阐明是设计有效反义核酸、核酶(ribozyme)和脱氧核酶(DNAzyme)的关键。MAST方法固定16S rRNA,将其与寡核苷酸文库杂交筛选出靶点,获得了大肠杆菌16S rRNA的6个反义核酸结合靶点,并鉴定5个靶点有效,其中1个为高效。5个靶点的反义核酸能在通透性大肠杆菌菌株培养中不同程度地抑制其生长,针对高效靶点的核酶在转化大肠杆菌中表达而抑制其生长。
- 毛建平袁国刚王全会韦玮魏丽晶崔玉芳
- 关键词：RNA反义核酸大肠杆菌RRNA
- 10-23型DNA酶作为鉴定mRNA靶点有效性的新工具被引量：4
- 2005年
- 10-23DNA酶是能主动切割mRNA的一类反义寡核苷酸.利用10-23DNA酶的直接切割作用验证mRNA结构靶点的有效性.对筛选的绿色荧光蛋白(GFP)基因mRNA的4个靶点平行设计了4条反义寡核苷酸和4条10-23DNA酶,对照组反义寡核苷酸将最佳靶点——靶点2的反义寡核苷酸突变2个碱基,对照组10-23DNA酶将靶点2的10-23DNA酶结合臂中央突变2个碱基.体外4条10-23DNA酶切割mRNA的结果和相应的4条反义寡核苷酸依赖的RNaseH降解结果完全相似,细胞内4条10-23DNA酶对绿色荧光蛋白的表达抑制作用与相应的4条反义寡核苷酸相似,表明10-23DNA酶显示的最佳作用靶点同样是最佳作用效果的反义寡核苷酸结合靶.10-23DNA酶可以作为评价mRNA结构靶点有效性的新工具.
- 毛建平王全会韩慧明袁国刚左刚邵世和毛秉智
- 关键词：DNA酶MRNA靶点有效性反义寡核苷酸绿色荧光蛋白
- 绿色荧光蛋白基因mRNA反义寡核苷酸的筛选和应用被引量：6
- 2005年
- 基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(polyAanchoredRNAaccessiblesitesscreening)方法,即通过在mRNA末端引入polyA,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3’末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNaseH分析显示3个靶点均为有效,在HeLa细胞内针对靶点的反义寡核苷酸能抑制GFP的表达,得到了Northern印迹结果支持.PARASS对反义寡核苷酸药物设计具有应用价值.
- 毛建平王全会施水兰袁国刚左刚崔玉芳毛秉智
- 关键词：MRNA反义寡核苷酸靶点GFP
- 绿色荧光蛋白基因反义核酸位点的筛选及评价
- 目的：mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题，能否找到靶点是设计高效反义核酸的关键。本研究以绿色荧光蛋白基因为靶基因，探讨一种靶位点筛选的方法(RASS方法)，通过评价所筛到位点的有效性，进而评价该方法的有效性，以...
- 王全会
- 关键词：GFP脱氧核酶转染
- 文献传递
- 10-23型脱氧核酶对mRNA表达的双重抑制作用被引量：2
- 2005年
- 目的:10-23型脱氧核酶是脱氧核糖核酸酶中的一种,能主动在RNA分子嘌呤-嘧啶结合点切割所有RNA分子,通过比较反义寡核苷酸的作用,初步研究10-23型脱氧核酶对基因表达抑制作用的发生机制。方法:采用体外转录GFP mRNA与脱氧核酶反应,以及GFP表达质粒与脱氧核酶共转染HeLa细胞,观察脱氧核酶对GFP的抑制作用。结果:体外和胞内实验均显示据靶点设计的10-23型脱氧核酶对绿色荧光蛋白mRNA具有切割作用。当10-23型脱氧核酶的两翼结合臂各具有连续8碱基互补而处在两翼结合臂和酶解核心连接处的2碱基错配时,尽管不能切割mRNA但是在胞内仍然有表达抑制作用;而当两翼结合臂具有4互补碱基紧接1错配碱基和4互补碱基时,10-23型脱氧核酶体外和胞内均丧失作用。结论:10-23型脱氧核酶对基因较强的表达抑制作用来自结合臂的反义寡核苷酸依赖的RNase H降解,和本身对mRNA直接切割作用的叠加,即10-23型脱氧核酶在细胞内具有对基因识别切割和诱导RNase H进行再切割的双重作用。
- 王全会左刚施水兰赵增强崔玉芳毛建平
- 关键词：MRNA反义寡核苷酸基因表达
