陈俊升
- 作品数：8 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 临床分离MRSA中氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6)′-APH(2″)的克隆表达与活性测定
- 2011年
- 双功能酶AAC(6′)-APH(2″)是一种重要的氨基糖苷类抗生素钝化酶,从临床分离出的6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的总DNA中克隆得到AAC(6′)-APH(2″)基因,将该基因插入质粒pET-28a中构建表达载体,然后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21进行异源表达,在IPTG的诱导下产生大量可溶性目标重组蛋白,该重组蛋白经亲和层析分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯度大于90%;建立了此双功能酶的体外测活方法,为建立氨基糖苷类抗生素双功能酶抑制剂筛选模型奠定基础.
- 王春霞陈俊升邵雷陈代杰李继安
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌双功能酶
- 临床分离MRSA中氨基糖苷类抗生素磷酸化酶的克隆表达与活性测定被引量：1
- 2010年
- 目的:从临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中克隆氨基糖苷类抗生素磷酸化酶基因并异源表达,建立其磷酸化反应的体外测活方法。方法:考察临床分离MRSA对氨基糖苷类抗生素的敏感性,从中克隆磷酸化酶基因,并连入pET28a构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化;使用ESI-MS以及抗菌活性实验测定其磷酸化酶活性。结果:药敏实验表明临床分离的6株MRSA均对氨基糖苷类抗生素不敏感,重组表达克隆到的磷酸化酶,表达产物纯化后的纯度大于90%,体外催化试验表明,重组磷酸化酶2h内可以催化反应体系内的卡那霉素B完全磷酸化。结论:异源表达的氨基糖苷类抗生素磷酸化酶具有很好的活性,体外测活方法可靠快捷,为建立氨基糖苷类抗生素磷酸化酶抑制剂筛选模型打下基础。
- 陈俊升苏敏陈代杰李继安阚士东邵雷
- 关键词：氨基糖苷类抗生素耐甲氧西林金葡菌磷酸化酶
- 万古霉素糖基转移酶GtfE在雷莫拉宁产生菌中的异源表达与鉴定
- 雷莫拉宁(Ramoplanin)属于糖肽类抗生素,能够抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌,并且因为其具有独特的化学结构、强大的抗广谱革兰氏阳性菌的功效和暂无对其耐药的报道,而越来越受到人们的关注,目前已经进入Ⅲ...
- 王元希林惠敏陈俊升邵雷李继安陈代杰
- 关键词：万古霉素糖基转移酶异源表达
- 万古霉素糖基转移酶GtfE的异源表达与体外活性检测
- 2013年
- 为了得到具有糖基转移酶活性的重组蛋白,从万古霉素产生菌总DNA中克隆万古霉素糖基转移酶基因gtfE,连入pET-37b构建表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,体外测定纯化后的重组蛋白糖基转移酶活性,用HPLC和ESI-MS检测反应产物。结果表明,重组蛋白具有预期活性,可以催化尿苷二磷酸葡萄糖与万古霉素苷元的糖基化反应。本研究为获得糖基多样性的万古霉素奠定理论基础。
- 王元希陈俊升邵雷李继安林惠敏陈代杰
- 关键词：万古霉素生物合成糖基转移酶异源表达
- 雷莫拉宁 orf20 和恩拉霉素 orf30 在 orf20 敲除突变株中的功能
- 雷莫拉宁生物合成基因簇中orf20与已知的卤化酶基因高度同源,但其功能还未确定。本研究在大肠杆菌中构建orf20回补质粒pSM-6和来源于恩拉霉素生物合成基因簇的卤化酶基因orf30异源表达质粒pSM-9,将其转入敲除了...
- 陈俊升苏敏邵雷陈代杰李继安
- 关键词：基因敲除同源重组异源表达
- 组合生物合成技术在药物研发中的应用被引量：1
- 2009年
- 介绍组合生物合成技术在药物发现中的应用情况及研究进展。近年来迅速发展的组合生物合成技术为微生物活性代谢产物的结构修饰提供了新的方法,利用该技术,通过基因水平的改造,可获得结构新颖的化合物,为药物筛选拓宽了来源。
- 陈俊升景兰邵雷
- 关键词：组合生物合成聚酮合成酶新药发现
- 雷莫拉宁产生菌orf29敲除突变株的回补及orf29体内功能研究
- 敲除雷莫拉宁生物合成基因簇中orf29,所得的突变株能够发酵产生无糖雷莫拉宁,但其功能还未确定。本研究为了验证orf9的体内功能,在大肠杆菌中构建orf29回补质粒pSET152/PermE*/ramo-orf29,将其...
- CHEN Junsheng陈俊升WANG Yuanxi王元希SHAO Lei邵雷CHEN Daijie陈代杰
- 关键词：制药工程同源重组糖基转移酶异源表达
- 万古霉素糖基转移酶GTFE的克隆表达与体外活性检测
- 目的 克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因GTFE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法 从万古霉索总DNA 中克隆糖基转移酶基因GTFE,并连入PET37B构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用L...
- 王元希陈俊升邵雷陈代杰
- 关键词：万古霉素异源表达
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