陈声
- 作品数：14 被引量：153H指数：5
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划霍英东青年教师基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：18
- 2001年
- 用表达非融合蛋白的原核表达载体 p BV2 2 0 ,通过 PCR技术的引物设计对猪繁殖与呼吸综合征( PRRS)病毒 BJ-4株核衣壳蛋白 ( N)基因起始密码子上游进行了改造和修饰 ,成功地构建了含有 PRRS病毒 N基因的原核重组表达载体 p BV-N。 p BV-N转化大肠杆菌 DH5α,温度诱导后菌体裂解物经 SDS-PAGE分析发现 ,在约 1 5 0 0 0处出现 1条诱导前后的 p BV2 2 0载体对照和诱导前的 p BV-N中均缺少的特异性的蛋白条带 ,分子量大小与 PRRS病毒 N蛋白相符 ,并随着诱导时间的延长而变化 ,在诱导后 4 h达到高峰。薄层扫描结果显示 ,重组 N蛋白表达量最多可占菌体总蛋白的 2 7.4 %。 Western-blotting检测 ,此 1 5 0 0 0的蛋白带可为 PRRS病毒 N蛋白的单克隆抗体所识别 ,表明该重组
- 高云杨汉春刘平黄陈声郭鑫韩军黄芳芳
- 关键词：PRRS病毒核衣壳蛋白原核表达PBV220猪繁殖与呼吸综合征PRRS
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4ORF<,6>基因的克隆与表达
- 该研究利用pET-5a原核表达载体成功地在大肠杆菌中表达出PRRSV BJ-4ORF<,6>基因编码的M蛋白.用RNA提取试剂盒提取PRRSV BJ-4基因组总RNA,用两对引物经RTPCR,特异性扩增出PRRSV BJ...
- 陈声
- 关键词：克隆大肠杆菌
- 文献传递
- 鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的多重耐药性被引量：47
- 2003年
- 利用药敏试验监测系统分析了 71株鸡源大肠杆菌临床分离菌株对 9种氟喹诺酮类药物的耐药性 ,结果表明临床分离菌株对沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、二氯沙星、单诺沙星、奥比沙星和萘定酸呈现很高的耐药性 ,耐药率分别为 6 9%、6 9%、5 5 %、76 %、6 9%、76 %和 99% ;对盖特沙星和左氟沙星有轻度的耐药性 ,耐药率分别为11%和 13%。在 71株分离菌株中 ,只有 1株没有耐药性 ,对 3种以上药物有耐药性的菌株占 74 % (5 2 / 70 ) ,对 6种以上药物有耐药性的菌株占 70 % (49/ 70 ) ,呈现出多重耐药性。对耐药菌株GyrA基因QRDR氨基酸变异分析表明 70株耐药菌株的第 83位氨基酸均发生了变异 ,由丝氨酸 (Serine)变为亮氨酸 (Leucine)。对 6种以上氟喹诺酮类药物有耐药性的 4 9株分离株除了 83位氨基酸发生变异外 ,其 87位氨基酸也发生了变异 ,4 1株 87位的氨基酸由天冬氨酸 (D)变为天冬酰胺 (N) ,6株 87位的氨基酸由天冬氨酸 (D)变为酪氨酸 (Y) ,由天冬氨酸 (D)变为甘氨酸和丙氨酸的各 1株 ;对 3种以下氟喹诺酮类药物有耐药性的 2 1株 87位的氨基酸没有发生变异。由此表明鸡源大肠杆菌GyrA基因QRDR区的变异与菌株对氟喹诺酮类药物的耐药程度密切相关 。
- 杨汉春陈声Jianghong Meng吴清明查振林郭鑫
- 关键词：大肠杆菌氟喹诺酮类药物多重耐药性GYRA基因
- PRRS病毒M蛋白在大肠埃希氏菌中的高效表达被引量：10
- 2001年
- 将猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV )ORF6基因从 pGEM T ORF6重组质粒中亚克隆到pET 5а原核表达载体上 ,成功构建重组表达质粒pET5 ORF6。将其转化大肠埃希氏菌BL2 1(DE3 )感受态细胞 ,重组菌经IPTG诱导表达 ,其细菌裂解物经SDS PAGE可检测到分子质量约为 19ku的目的蛋白带 ,经薄层扫描分析 ,目的蛋白占菌体总蛋白的2 6.8% ,采用重组菌裂解物作为包被抗原进行ELISA检测 ,结果表明表达的蛋白显示特异性。
- 陈声杨汉春黄芳芳郭鑫陈艳红
- 关键词：繁殖呼吸综合征病毒M蛋白免疫原性
- 表达PRRSVE基因重组质粒在小鼠诱导的体液免疫应答被引量：1
- 2004年
- 利用 PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) BJ- 4株的 E基因进行修饰和改造 ,在 E基因上游加入 Kozak序列 ,扩增并克隆 E基因。将 E基因 c DNA亚克隆至真核表达载体 pc DNA3.1(+)中 ,构建了真核重组表达质粒 pc DNA- E。用pc DNA- E免疫小鼠 ,经免疫荧光抗体试验检测结果表明 ,重组质粒 pc DNA- E经 3次免疫后 ,所有小鼠血清抗体均为阳性 ,说明pc DNA- E在小鼠体内可诱导特异性的体液免疫应答反应。
- 高云杨汉春刘平黄陈声郭鑫韩军黄芳芳
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因重组质粒体液免疫应答
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4ORF6基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2001年
- 将猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS)病毒 BJ- 4株在 HS.2 H细胞上增殖 ,经超速离心浓缩病毒。用 TRIZOL LS试剂提取病毒基因组 RNA后 ,用 RT- PCR方法特异性扩增 PRRS病毒 BJ- 4的 ORF6基因片段 ;经Sma 酶切鉴定正确后 ,将 PCR产物克隆到p GEM- Teasy载体上 ,经 Amp/IPTG/X- Gal平板筛选、酶切鉴定和质粒 PCR鉴定 ,初步获得含 ORF6基因的阳性重组质粒 p GEM-T- ORF6。对重组质粒进行序列测定 ,并同美洲代表株 VR2 332和欧洲代表株 L V进行比较 ,结果表明 ,BJ- 4 ORF6与 VR2 332的ORF6差异较小 ,核苷酸和氨基酸同源性均为 99.43% ;而与 L V株的差异性较大 ,核苷酸同源性为 70 .6 % ,氨基酸同源性为 77.4%
- 陈声杨汉春郭鑫高云查振林
- 关键词：繁殖呼吸综合征病毒ORF6基因克隆
- PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达
- 用表达非融合蛋白的原核表达载体pBV220,通过PCR技术的引物设计对PRRS病毒BJ-4株核衣壳蛋白(N)基因起始密码子上游进行了改造和修饰,在其上游加入了EcoR I酶切位点,将PRRS病毒N基因插入载体pBV220...
- 高云杨汉春刘平黄陈声郭鑫韩军黄芳芳
- 关键词：PRRS病毒核衣壳蛋白原核表达大肠杆菌
- 文献传递
- 用聚合酶链式反应检测猪源大肠杆菌卡那霉素耐药基因
- 赵静杨汉春李华高云陈声查振林
- 根据编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶[APH(3')- II]钝化酶基因的核苷酸序列，设计合成一对引物P1和P2，用聚合酶链式反应(PCR)技术对26株猪源大肠杆菌临床分离株的卡那霉素磷酸转移酶[APH(3')- II]钝化...
- 关键词：
- 关键词：猪病大肠杆菌猪源大肠杆菌卡那霉素耐药基因PCR
- PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 2000年
- 高云杨汉春刘平黄陈声郭鑫韩军黄芳芳
- 关键词：衣壳蛋白大肠杆菌大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属PRRS
- PRRS病毒BJ-4株全基因组序列测定与分析被引量：4
- 2000年
- 黄芳芳杨汉春郭鑫高云陈声李华
- 关键词：PRRS全基因组
