目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者血清对间充质干细胞（MSC）衰老的作用及机制。方法：收集性别、年龄匹配6例健康对照者及6例SLE患者血清,灭活补体后-80℃保存备用;分离培养3例健康对照及3例SLE患者骨髓MSC,传代至第3~4代备用;以含10%SLE或对照血清的DMEM/F12模拟机体全身血液微环境,培养不同来源骨髓MSC;SA-β-gal染色并计数阳性细胞比例;Real time PCR法检测MSC p53、p21基因水平;Western blot法分别检测p53、p21蛋白及核蛋白NF-κB（p65）表达水平;CCK8测细胞增殖。结果：SLE患者血清增加健康人骨髓MSC的β-半乳糖苷酶阳性比例[（26.6±2.1）%vs（11.8±1.9）%,P〈0.05],对SLE患者骨髓MSC的促进作用更为显著[（58.8±2.8）%vs.（31.2±2.2）%,P〈0.05];SLE患者血清可同时上调健康对照及SLE患者骨髓MSC的p53及p21水平;SLE患者血清既能够抑制健康骨髓MSC增殖[（0.7±0.1）vs（1.1±0.1）,P〈0.01],又能抑制SLE患者骨髓MSC增殖能力[（0.5±0.2）vs（0.8±0.3）,P〈0.05]。此外,SLE患者血清还可显著上调两种来源骨髓MSC核内NF-κB（p65）的蛋白水平。结论：SLE患者血清能够促进骨髓MSC衰老,该过程可能与其胞内NF-κB信号通路的活化有关。
为了探讨SLE患者骨髓局部微环境对间充质干细胞(MSC)衰老的影响及机制。首先收集性别、年龄匹配的健康对照者及SLE患者骨髓各6例,留取上清液并灭活补体;以含10%骨髓上清的DMEM/F12培养基模拟机体骨髓局部微环境,培养脐带来源的MSC;SA-β-gal染色并计数阳性MSC比例;real time PCR及western blot法分别检测MSC的p53、p21基因及蛋白表达水平;荧光显微镜观察MSC核内DNA损伤标记53BP1的表达情况;CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测Annexin V/PI评估细胞凋亡。结果显示,与正常对照相比,SLE患者骨髓上清可显著增加β半乳糖苷酶阳性MSC细胞比例,且上调p53和p21的表达量;在SLE患者骨髓上清处理的条件下,MSC细胞内与DNA损伤反应有关的标志性蛋白53BP1的表达水平显著增高;SLE患者骨髓上清还能够明显抑制MSC的增殖能力。这提示SLE患者骨髓上清促进MSC衰老,其机制可能在于诱导MSC细胞核内DNA损伤反应。
