韩明月
- 作品数：9 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 2型猪链球菌锌转运蛋白A对小鼠免疫保护作用被引量：3
- 2012年
- 目的研究猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)锌转运蛋白A(ZnuA)对小鼠接种致死量2型猪链球菌(S.suis 2)菌株的免疫保护作用,为进一步研究S.suis 2亚单位疫苗奠定实验基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测znuA基因在不同血清型S.suis中的分布情况;蛋白免疫印迹(western blot)检测ZnuA在S.suis 2的表达,利用流式细胞术对ZnuA进行细胞定位,动物实验研究ZnuA蛋白的免疫保护作用。结果除血清型17、21和30型菌株及荷兰分离株T15菌株外,其他30个血清型S.suis菌株、7996菌株以及3株S.suis 2型国内分离菌株基因组中均扩增到目的条带;S.suis 2菌体蛋白与兔抗ZnuA蛋白的血清能发生特异性反应;兔抗ZnuA血清标记S.suis 2的荧光强度明显较高;ZnuA重组蛋白免疫组小鼠死亡率较低。结论 ZnuA是一种具有免疫保护作用的蛋白,可作为S.suis的亚单位疫苗候选分子。
- 李先富潘秀珍韩明月刘文静王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用
- 2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究
- 目的分析猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)ZnuA基因在不同血清型S.suis菌株中的分布情况,并研究ZnuA蛋白的保护作用,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过PCR扩增,检...
- 李先富潘秀珍韩明月王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用
- 文献传递
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 组氨酸三聚体蛋白在2型猪链球菌的定位被引量：3
- 2009年
- 目的研究组氨酸三聚体蛋白(histidine triad protein,Htp)在2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)05ZYH33中的定位,以及sortase A(srtA)基因缺失对该蛋白表达的影响。方法通过生物软件分析Htp氨基酸序列的分子特征;以纯化的Htp重组蛋白为免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗Htp抗血清;利用western blotting和ELISA检测该抗体的特异性和效价;以抗Htp抗体为工具通过流式细胞术验证Htp在菌体表面的定位,并比较05ZYH33和srtA基因敲除突变株△srtA菌体表面Htp的表达量。结果生物软件预测发现Htp存在信号肽和跨膜序列,具备表面蛋白的特征;流式细胞分析发现Htp定位于S.suis 2表面;△srtA菌体表面Htp的量明显少于野生型菌株。结论本研究明确了Htp在S.suis 2菌体表面的定位并发现srtA基因敲除后细菌表面的Htp有所减少,为进一步研究Htp在猪链球菌致病过程中发挥的功能及其调控机制奠定了基础。
- 邵珠卿潘秀珍韩明月李先富秦跃红王长军唐家琪
- 关键词：流式细胞术SORTASE
- 2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析被引量：7
- 2010年
- 目的克隆2型猪链球菌高亲和力锌吸收蛋白(High-affinity zinc uptake system protein,ZnuA)编码基因并进行原核表达,研究ZnuA蛋白的免疫学活性。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因znuA,构建重组表达质粒pET32a::znuA,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;Western blot检测ZnuA蛋白的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA检测多抗血清效价。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;Western blot结果表明ZnuA蛋白具有良好的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清。结论在原核系统中成功地表达了znuA基因编码的蛋白,且ZnuA重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究znuA基因在猪链球菌致病过程中的作用以及猪链球菌疫苗的开发奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿李先富刘文静郑峰王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌
- 2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌克隆
- 2型猪链球菌ZnuA和Hlp重组蛋白的制备及其免疫学特性研究
- 猪链球菌(Streptococcussuis,S.suis)是重要的人兽共患病病原体,可引起人和猪患脑膜炎、关节炎、肺炎、败血症甚至急性死亡,给养猪业和从业人员健康均带来巨大威胁。1998年和2005年,在我国江苏省和四...
- 韩明月
- 关键词：猪链球菌重组蛋白原核表达免疫学特性
- 文献传递
- 2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究
- 分析猪链球菌(Streptococcus suis，S.suis)ZnuA基因在不同血清型S.suis菌株中的分布情况，并研究ZnuA蛋白的保护作用，为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法 通过PCR扩增，检测...
- 李先富潘秀珍韩明月王长军唐家琪
- 文献传递
- 猪链球菌反应调节因子CovR单克隆抗体的制备与鉴定被引量：9
- 2010年
- 目的CovR是一个全局性反应调控因子,对猪链球菌的致病性具有重要调控作用。文中制备抗2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)反应调节因子CovR蛋白单克隆抗体(mAb),以便对CovR的调控机制进行系统研究。方法以基因工程重组CovR蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选可稳定分泌抗CovR mAb的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA法和Western blot鉴定抗CovR mAb的特异性后,制备小鼠腹水并测定单抗腹水的抗体效价。单抗分型ELISA鉴定抗CovR单克隆抗体IgG亚类。结果获得2株能稳定分泌抗CovR mAb的的杂交瘤细胞株1A4和4D7,其培养上清抗体效价分别为1∶800、1∶1600,其相应单抗腹水的抗体效价分别为1∶819200、1∶1638400。mAb 1A4和4D7IgG亚类分别为IgG2b、IgGl。结论成功制备了抗CovR mAb,为进一步研究CovR的调控机制奠定了基础。
- 李先富郝喜娜韩明月王长军唐家琪潘秀珍
- 关键词：猪链球菌单克隆抗体
