高荣琨
- 作品数：31 被引量：185H指数：7
- 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省科技攻关计划项目山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条的研制和初步应用被引量：6
- 2015年
- 为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。
- 宁官保刘国莉张鼎李宏全马海利高荣琨郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李建慧李桂兰闫芳田文霞
- 关键词：鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条
- 霍阿基亚型羊驼显性白毛调控基因外显子2的克隆与序列分析
- 2013年
- 羊驼作为一种高品质毛皮经济动物,对其毛色的研究可以为提高羊驼经济价值提供理论依据。本试验应用RT-PCR技术克隆羊驼显性白位点基因(KIT)第2外显子(exon2),并与其他动物相应区域进行同源性比较,结果发现其序列与牛和山羊的同源性较高,可达到96%,其编码的氨基酸更高,达98%;而与人和家鼠的同源性较低,只有78%和57%。该研究结果为加快霍阿基亚型羊驼育种进展提供了理论依据。
- 高荣琨李建平曲海娥江倩陈伟王莹张巧灵
- 关键词：毛色
- 苯并芘(BaP)对鲤鱼肝、肾抗氧化、非特异性免疫能力及组织结构的影响被引量：13
- 2019年
- 为探究苯并芘(BaP)对鲤鱼的毒性机制,本研究检测了不同浓度BaP(0、0.1、0.5、1.0μg·L^(-1))暴露对鲤鱼肝、肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及非特异性免疫酶溶菌酶(LZM)、酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性,以及硝基四氮唑兰(NBT)阳性细胞及肝、肾组织结构的影响。结果表明,1.0μg·L^(-1)BaP暴露30 d后,鲤鱼肝、肾组织SOD活性、MDA含量及肝组织CAT、肾组织GSH活性均显著低于对照组;1.0μg·L^(-1)Ba P暴露的肝、肾组织LZM、AKP和PO活性以及肝组织ACP活性均显著低于对照组;不同浓度Ba P暴露30 d后,鲤鱼NBT阳性细胞数均显著下降,且对肝、肾组织造成不同程度的损伤。相关性分析结果表明,Ba P暴露浓度与肝、肾组织的SOD活性呈负相关,与MDA含量呈正相关,与肝、肾组织的AKP、ACP、PO活性呈负相关,与NBT阳性细胞数呈负相关。综上,水体中Ba P暴露对鲤鱼肝、肾抗氧化和非特异性免疫能力及组织结构产生了一定程度的负面影响,本研究为水体中Ba P的生态毒性效应研究提供了理论参考。
- 陈剑杰曹谨玲贺鑫晋郭文静罗永巨高荣琨
- 关键词：抗氧化能力非特异性免疫
- 仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定被引量：1
- 2006年
- 从各地发生水肿病的仔猪的脏器中分离到36株细菌,通过菌体形态、菌落形态、革兰氏染色特性、生化特性、血清型等一系列的鉴定,确认为大肠埃希氏菌,从而确定了引起仔猪水肿病的主要血清型,为今后的防治提供了依据。动物致病性试验表明,该菌对小鼠有较强的致病性,可引起小鼠死亡。肉汤培养物无菌滤液能致死小鼠且剖检见相关脏器水肿,引起细胞死亡。
- 牛艺儒宁官保高荣琨
- 关键词：仔猪水肿病大肠杆菌菌体形态菌落形态
- 重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定被引量：3
- 2020年
- 细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku。试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增Ex-FABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定。结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确。试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据。
- 田志雄李娜娜卢晓晓郭敏张宁李欣张鼎赵宇军闫芳高荣琨宁官保田文霞
- 关键词：基因克隆原核表达蛋白纯化
- 黑素皮质素受体1(MC1R)基因与VC-獭兔毛色关系的研究被引量：7
- 2013年
- 为研究黑素皮质素受体(Melanocortin1receptor,MC1R)基因对獭兔毛色的影响,本试验采用RT-PCR技术克隆了MC1R基因的cDNA片段,发现MC1R基因长951bp,编码317个氨基酸的前体蛋白,蛋白质PI为9.26,分子量36.28ku,具有7个跨膜结构域,与其他动物MC1R蛋白性质相符。其氨基酸序列经同源性比对结果显示:其与牦牛,马、绵羊、骆驼、牛等哺乳动物的同源性均高于93%,有14个突变频率较高的位点,其中第42、82、176、18、185位点为VC-獭兔特异性突变位点,表明该序列在哺乳动物中较为保守。但这些突变位点均发生极性、亲水疏水性等变化,这些突变可为进一步探测不同群种间的MC1R基因及该基因与獭兔毛色的关系提供理论依据。
- 高荣琨陈伟曲海娥李建平张巧灵
- 关键词：MC1RRT-PCR毛色
- 致猪水肿病大肠杆菌标准菌株F107/86 fedA基因的克隆与原核表达
- 2012年
- 以致猪水肿病大肠杆菌标准菌株F107/86的基因组DNA为模板,对去掉信号肽的456bp的fe-dA基因进行了PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHⅠ与EcoRⅠ位点之间,经酶切鉴定与测序,在大肠杆菌中以IPTG诱导表达,并对表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析进行验证。结果表明,筛选出的阳性质粒pGEX-fedA-2(pfedA)经测序并与GenBank中收录的M61713序列进行比较,证明插入序列及读码框正确;表达产物GST-FedA经SDS-PAGE分析大小约42.4ku,Western-blot分析证实其具有良好的反应原性。所构建的原核表达载体可大量表达抗原蛋白,为进一步研究猪水肿病亚单位疫苗奠定了基础。
- 宁官保田文霞刘国刚李宏全马海利高荣琨
- 关键词：水肿病克隆原核表达
- 肉鸡谷胱甘肽S-转移酶A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化
- 2019年
- [目的]谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少。[方法]本试验采用RT-PCR方法扩增肉鸡GSTA3基因,连接pZeroBack/blunk克隆质粒,再与表达载体pET-28a连接,并转入E.coli BL21(DE3)中获得pET-28a-GSTA3重组表达质粒,使用IPTG诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行SDS-PAGE鉴定,使用谷胱甘肽-S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测。[结果]试验成功构建重组表达质粒pET-28a-GSTA3,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa,与预期一致,并且表达的重组GSTA3蛋白具有生物活性。[结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。
- 卢晓晓杨世雄李娜娜张宁李欣宁官保张鼎赵宇军闫芳高荣琨田文霞
- 关键词：胫骨软骨发育不良基因克隆原核表达
- 太原地区鸡源性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：8
- 2013年
- 为调查太原市周边地区鸡源大肠杆菌(E.coli)的流行情况,本研究从规模化养鸡场采集患腹泻病鸡的粪便样品进行E.coli分离、血清型鉴定及耐药性检测,通过接合试验检测质粒在抗生素抗性水平转移中的作用。结果表明:分离到81株E.coli属于15种不同血清型,其中28株属于5种优势血清型,即O1、O8、O78、O84和O143;所有分离菌株对13种抗菌药物均有不同程度的耐药性,其中qnrA、tetM、tetA、sul2、strA、aadA、floR为检测到的主要耐药基因;分离菌株质粒携带的7种耐药基因可通过接合作用转移。该研究结果证明E.coli对常用抗生素的耐药已普遍存在,其携带的耐药基因可通过接合作用在细菌之间传递。
- 高荣琨王丽芳李锐李文斌郑明学
- 关键词：大肠杆菌耐药性
- 一起番鸭细小病毒病的诊制
- 2006年
- 牛艺儒李玉娥高荣琨杜娟宁官保
- 关键词：番鸭细小病毒病周龄鸭场小鸭发病病鸭
