于波
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析被引量：5
- 2013年
- 目的对国内不同宿主来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析，以初步建立中国非O157STEC菌株的基础数据库，了解其分子流行病学特征。方法参照PulseNet非O157STEC的PFGE实验方法对76株非O157STEC分离株进行分析，并使用BioNumerics软件进行聚类。结果在PulseNet推荐的电泳参数和内切酶XbaI情况下，菌株酶切片段分布均匀，条带易于识别。76株非O157STEC分离株产生62种PFGE带型，初步聚类为A-M13个群，不同来源菌株的PFGE带型分布广泛，但均具有某些优势的PFGE聚类群。结论国内不同来源的非O157STEC呈高度多态性，PulseNet推荐的PFGE电泳参数和内切酶XbaI适用于中国非O157STEC菌株的分析。
- 金东赵爱兰白向宁孟琼于波袁雪娇熊衍文侯雪新李振军
- 关键词：脉冲场凝胶电泳分子分型
- 粪肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立用于检测粪肠球菌的TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative-Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)方法。方法根据粪肠球菌的d-丙氨酸聚连接酶(ddl)基因设计TaqMan FQ-PCR的引物及探针,并使用39种常见致病菌和条件致病菌检测其特异性。将目的基因克隆到质粒中,制作标准曲线,确定方法的检测下限。制备血液模拟标本,直接提取核酸进行检测,探索临床应用的可能。结果在特异性评价实验中,除阳性对照外其余样本均未出现特异性扩增曲线。建立粪肠球菌TaqMan FQ-PCR方法的标准曲线,确定该方法的检测下限为20 copy/管。通过对粪肠球菌血液模拟标本的检测发现,本方法对模拟标本的检测灵敏度为3.9×103cfu/ml。在稳定性评价中,对含菌量为3.9×108、3.9×106和3.9×104cfu/ml的血液模拟标本重复检测10次,结果显示扩增反应Ct值的变异系数(CV)为0.99%～1.84%。结论本研究建立了适用于临床标本检测的粪肠球菌TaqMan FQ-PCR方法。
- 金东于波刘莎刘凯徐建国叶长芸
- 关键词：粪肠球菌
- 屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究被引量：3
- 2013年
- 目的建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法。方法根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性。结果在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线。建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管。通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%～3.91%;组间变异系数为1.52%～1.69%。应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100～1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL。结论本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法。
- 金东于波叶长芸刘凯侯雪新孙渭歌徐建国李振军
- 关键词：屎肠球菌
