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PEI接枝化聚[L-天冬酰胺-co-L-赖氨酸]的合成及其转基因性能研究: 目的基因治疗是近10年来兴起的新方法,与传统的药物治疗相比,基因治疗是将外源基因导入目的细胞并有效表达,从而达到治疗疾病的目的。在基因释放体系中,主要有病毒载体介导体系和非病毒介导体系。前者有很高的基因转染效率,但是由于...; 张振方段亚军韩素芳王燕铭于琦孔德领俞耀庭; 文献传递

大黄素和[Ca<'2+>]对平滑肌细胞电活动的作用及机制研究: 于琦

阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导STAT3-shRNA对前列腺癌生长的抑制作用被引量：2: 2007年; 目的探讨第5代阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(G5-PAMAM-D)作为小发卡RNA (shRNA)真核表达质粒的载体,进行前列腺癌RNA干扰基因治疗的可行性。方法根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)cDNA序列结构,分别设计构建表达EGFP mRNA、STAT3 mRNA的特异shRNA真核表达质粒pSilencing 4.1-EGFP-shRNA和pSilencing 4.1- STAT3-shRNA。在体外以G5-PAMAM-D为载体,将质粒pEGFP-C1和pSilencing 4.1-EGFP-shRNA共转染前列腺癌细胞PC-3、22Rvl,通过观察EGFP表达检测干扰效果以及转染效率;然后,以同样的方式将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA转入前列腺癌细胞系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞生长的抑制作用,丫啶橙染色观察细胞凋亡。制作前列腺癌小鼠模型,将G5-PAMAM-D与质粒pSilencing 4.1-STAT3-shRNA的混合物注射人荷瘤鼠肿瘤内,观察对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明,G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1.EGFP-shRNA转入前列腺癌细胞,明显沉默EGFP的表达,并且G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA有效转入前列腺癌细胞中,明显抑制肿瘤细胞的生长,增加细胞的凋亡。体内实验证明,G5-PAMAM-D/pSilencing 4.1-STAT3-shRNA可抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长,而各对照组肿瘤生长无明显抑制。结论G5-PAMAM-D作为基因载体,可将shRNA的真核表达质粒在体内外转入前列腺癌组织细胞,并有效表达shRNA;G5-PAMAM-D可能成为应用前景广阔的小干扰RNA(siRNA)的载体。; 赵维明修有成徐勇王燕铭程兆康于琦孔德领; 关键词：前列腺肿瘤 RNA干扰纳米基因载体 STAT3

胆固醇修饰的低分子量聚乙烯亚胺接枝化聚[L-天冬酰胺-co-L-赖氨酸]作为基因载体的性能研究被引量：4: 2008年; 通过将低分子量的聚乙烯亚胺(PEI600)及其胆固醇衍生物与聚(L-天冬酰胺-co-L-赖氨酸)(PSL)进行开环反应,合成了一类新型的肿瘤靶向基因载体,研究了这类载体与DNA形成复合物的性质以及介导绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1转染不同细胞的性能.结果表明,在复合质量比大于5∶1时,各载体均能与DNA形成结构稳定的复合物.同时转染实验结果证明,通过在侧链引入一定数目的胆固醇,可以明显提高载体对于癌细胞HepG2和Hela的转染效率.这类新型的载体具有良好的细胞相容性、较高的转染效率以及易于进行靶向修饰等特点,在基因治疗研究领域中将具有较好的潜在应用价值.; 王燕铭张振方于琦王连永孔德领俞耀庭; 关键词：胆固醇聚乙烯亚胺基因载体

新型基因载体G5-PAMAM-D在前列腺癌HSV-tk/GCV自杀基因系统中的应用被引量：4: 2007年; 背景与目的:考察纳米级阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(polyam idoam ine dendrimers,PAMAM-D)作为基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:以第5代PAMAM-D(G5-PAMAM-D)为载体将含增强型荧光蛋白(EGFP)基因片段的重组质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,成功表达EGFP后,再以G5-PAMAM-D为载体将含HSV-tk自杀基因的真核表达重组质粒pcDNA3-tk转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,转染48h后,对转染的两种细胞给予浓度为0、10、100、1000、10000μmol/L前体药更昔洛韦(Ganciclovir,GCV),24h后采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响。制作前列腺癌皮下荷瘤小鼠,将G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物瘤内注射,24h后腹腔注射GCV,观察这一复合物体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:荧光观察及FCM结果证明G5-PAMAM-D可将pEGFP-C1转入两种前列腺癌细胞并表达EGFP。采用G5-PAMAM-D将pcDNA3-tk重组质粒转染PC-3和22Rv1细胞,给不同浓度的前体药GCV后,实验组细胞与对照组相比有明显浓度依赖性生长抑制。荷瘤小鼠在给予瘤内注射G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物后,行腹腔注射GCV,治疗后第40天,实验组肿瘤体积(1135±245mm3)与对照组裸质粒组(9965±2109mm3)和PAMAM-D组(8357±1956mm3)相比肿瘤生长明显被抑制(P<0.01),生存时间延长。结论:G5-PAMAM-D可作为前列腺腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。; 赵维明徐勇王燕铭程兆康于琦孔德领; 关键词：自杀基因前列腺癌非病毒载体

壳聚糖纳米粒介导的HSV-tk基因对前列腺癌的体外杀伤作用被引量：6: 2007年; 目的:考察壳聚糖纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:将壳聚糖纳米粒包裹的含报告基因的质粒pEGFP-C1分别转染前列腺癌细胞PC-3和22Rv1,并观察EGFP的表达情况。随后将含HSV-tk自杀基因的真核高效表达质粒pcDNA3-tk经壳聚糖纳米粒包裹后转染上述2种前列腺癌细胞,转染48 h后,以RT-PCR检测HSV-tk基因的表达情况。最后对转染的2种细胞给予不同浓度的前体药更昔洛韦(ganci- clovir,GCV)作用24 h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学分析。结果:壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞中壳聚糖纳米介导的转染效率高于脂质体。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-tk于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有HSV-tk基因的表达。给予前体药物GCV后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明HSV-tk自杀基因纳米粒在细胞中表达,从而使HSV-tk/GCV自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论:壳聚糖纳米粒能将质粒基因pcDNA3-tk转入前列腺癌细胞并表达胸苷激酶发挥作用,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体。; 赵维明徐勇王燕铭程兆康张素爱于琦孔德领; 关键词：前列腺肿瘤转染基因自杀

壳聚糖纳米粒介导的CD基因对前列腺癌的体外杀伤作用被引量：2: 2006年; 目的考察壳聚糖(Chitosan)纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法将壳聚糖纳米粒包裹含报告基因质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rvl,观察EGFP的表达情况,再将含胞嘧啶脱氨酶(Cytosinedeamiase,CD)自杀基因的真核表达质粒pcDNA3-CD转染至该2种前列腺癌细胞,转染48h后,以RT-PCR检测CD基因的表达。对转染的两种细胞给予不同浓度的前体药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)24h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学处理。结果表明壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞其转染效率高于脂质体转染试剂。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-CD于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有CD基因的表达。给予前体药物5-FC后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明壳聚糖纳米粒可将CD自杀基因递送至前列腺癌细胞中,并在细胞中进行表达,从而使CD/5-FC自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论壳聚糖纳米粒能将质粒基因转入前列腺癌细胞并表达,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。; 赵维明徐勇王燕铭程兆康张素爱于琦孔德领; 关键词：壳聚糖纳米粒基因治疗 CD自杀基因前列腺癌

超顺磁性Fe3O4纳米颗粒表面修饰及细胞标记: 目的磁性纳米复合材料是生物医学工程领域中具有重要发展前景的一种新型功能材料,由于具有独特的理化性质和优异的应用性能,已经引起人们广泛的研究兴趣。本文系统研究了具有超顺磁性的 FeO磁性纳米粒子的制备、表面修饰及其生物相容...; 王雅洁王燕铭于琦孔德领俞耀庭; 文献传递

癌细胞靶向非病毒基因载体的合成及其性能研究: 目前基因治疗主要的发展障碍之一，就是如何有效地将基因释放到靶细胞中长期稳定的表达，而又较少地产生副作用，即载体的效率、靶向性和安全性的问题。阳离子高分子基因传递系统在过去十几年取得明显进展，结果表明结构简单的高分子很难帮...; 于琦; 关键词：癌细胞非病毒基因载体转铁蛋白基因治疗; 文献传递

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于琦

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