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养殖龟鳖源气单胞菌耐药性与质粒介导喹诺酮类耐药基因分析被引量：14: 2014年; 为了解养殖龟鳖源气单胞菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）、喹诺酮类耐药决定区（QRDR）与耐药表型之间的关系；实验采用K—B纸片法测定了1996--2013年从广东地区患病龟鳖分离的67株气单胞菌对23种常见抗菌药物的耐药性，并检测5种PMQR基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac（6’）-Ib—cr，同时分析PMQR基因阳性菌株染色体上gyrA、parC基因QRDR的突变情况。结果显示，67株气单胞菌对氨苄西林、头孢噻吩和磺胺复合物的耐药率分别高达100％、92．54％和83．58％，对喹诺酮类药物呈现中等耐药，耐药率介于19．40％-64．18％，而对亚胺培南、呋喃妥因、阿米卡星、头孢噻肟敏感性较高，耐药率低于10％；79．10％（53／67）的菌株对3类或以上抗菌药物具有耐药性。19．40％（13／67）的菌株携带PMQR基因，其中，8．96％（6／67）携带qnrSl基因、5．97％（4／67）携带qnrS2基因、7．46％（5／67）携带aac（6’）-Ib—CF基因[其中2株同时携带qnrS2和aac（6’）-Ib．CF基因]。13株PMQR基因阳性菌株均分别携带1—4个质粒，大小介于0．8-15kb；其中6株在gyrA基因及parC基因上均发生变异，3株仅在删rA基因上发生变异，另外4株未发现QRDR的基因突变。研究表明，广东地区龟鳖源气单胞菌对多种抗菌药物耐药并存在多重耐药现象；而且PMQR机制的存在预示着喹诺酮类耐药性很可能会在水产临床上更加快速而广泛地传播，应引起重视。; 谭爱萍邓玉婷姜兰吴雅丽冯永永黄玉萍罗理王伟利; 关键词：龟鳖气单胞菌耐药质粒介导喹诺酮类

利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼核受体PXR基因初探: 2018年; 孕烷X受体(Pregnane X receptor,PXR)是核受体超家族(NRs)中NR1I的重要成员之一,在保护机体免于内源性和外源性物质损伤方面具有重要作用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立PXR基因敲除的斑马鱼模型,为研究环境污染物的毒性机理及代谢过程提供基础模型。根据PXR基因序列,设计gRNA靶位点,体外转录合成gRNA。同时,将设计合成的gRNA与Cas9 mRNA通过显微注射转入斑马鱼受精卵,经孵化、筛选出有效的突变体,并逐代培养杂交筛选出PXR基因敲除突变体。结果表明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除PXR基因,经测序分析获得稳定的PXR(+4/+4)基因纯合体。; 成凯冯永永周莉李凯彬聂湘平; 关键词：PXR 斑马鱼

利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因被引量：1: 2018年; β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sg RNA识别位点,体外转录制备sg RNA并与Cas9 m RNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sg RNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。; 李文龙冯永永李凯彬聂湘平; 关键词：斑马鱼基因敲除

猪-鱼复合养殖模式中气单胞菌Ⅰ类整合子的流行情况及其耐药特征: 为了解广东地区猪-鱼复合养殖模式下气单胞菌整合子流行情况及其耐药特征,从广东省佛山和肇庆市5个不同猪-鱼复合养殖场采集分离猪粪、鱼、池塘水及池塘底泥的气单胞菌(Aeromonas)共3 17株,通过微量二倍稀释法测定其对...; 邓玉婷冯永永姜兰谭爱萍张瑞泉罗理; 关键词：气单胞菌 I类整合子耐药; 文献传递

四带无须鲃透明品系的海分枝杆菌感染模型被引量：1: 2017年; 【目的】了解海分枝杆菌Mycobacterium marinum对四带无须鲃Puntius tetrazona透明品系的感染特性,构建感染模型。【方法】分别采用腹腔注射、肌肉注射及与感染鱼共居的感染方式,研究海分枝杆菌对四带无须鲃透明品系的感染特性;组织切片和压片观察细菌在四带无须鲃体内不同组织的分布及其引起的特征病理变化。【结果】2种注射方式均在感染部位周围观察到病变,并导致鱼体死亡;共居感染鱼病程发展较为缓慢,并出现消瘦、体色苍白等症状。感染鱼均可分离到病原菌,主要器官观察到典型肉芽肿结构,且抗酸染色能将其中细菌特异染色;各器官有黑色素巨噬细胞中心形成,并伴有不同程度的病理变化。【结论】四带无须鲃透明品系对海分枝杆菌敏感,症状便于观测,病理变化典型,可作为感染模型系统发展。; 王芳刘春姜兰冯永永李凯彬

不同养殖模式下气单胞菌的药物敏感性分析: 随着抗菌药物在水产养殖中的广泛应用和耐药菌的出现，细菌耐药性的问题一直备受关注。为了解我国珠三角地区不同养殖模式下气单胞菌(Aeromonas)的敏感性情况，从广东省佛山和肇庆市5 个不同猪-鱼复合养殖场和2 个四大家鱼...; 冯永永邓玉婷姜兰谭爱萍张瑞泉罗理; 关键词：池塘养殖模式气单胞菌

畜禽–鱼复合养殖模式中气单胞菌I类整合子的分子流行特征: 冯永永; 文献传递

猪–鱼复合养殖模式中气单胞菌I类整合子的流行情况及其耐药特征被引量：4: 2016年; 为了解广东地区猪-鱼复合养殖模式下气单胞菌整合子流行情况及其耐药特征,从广东省5个不同猪-鱼复合养殖场采集分离猪粪、鱼、池塘水及池塘底泥的气单胞菌共317株,通过微量二倍稀释法测定其对20种药物的敏感性;PCR扩增Ⅰ类整合子整合酶基因intI1,并分析其基因盒阵列结构。结果表明,317株气单胞菌对20种药物耐药程度不一,氨苄西林、磺胺间甲氧嘧啶、萘啶酸的耐药率相对较高。intI1的检出率为15.77%,鱼源和猪源的整合子检出率高于环境源。整合子阳性菌对测试的12种药物的耐药率显著高于阴性菌,且表现为多重耐药;50个Ⅰ类整合子共检测到16种耐药基因盒,包括了编码氨基糖苷类耐药基因aadA1、aadA2、aac6-Ⅱ、aacA4,甲氧苄啶耐药基因drfA1、dfrA12、dfrA15、dfrA17、dfrB4,β内酰胺类耐药基因bla_(OXA-10)、bla_(OXA-21),氯霉素耐药基因catB3、catB8,利福平耐药基因arr2、arr3以及质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr。携带了不同类耐药基因盒的整合子阳性菌还表现出所对应的对甲氧苄啶、链霉素、氯霉素类等的耐药表型,由此推测整合子的存在与细菌的多重耐药密切相关。研究表明,I类整合子分布于广东地区猪-鱼复合养殖模式下不同来源气单胞菌,并介导细菌对多种抗菌药物耐药。有必要开展畜禽-鱼复合养殖模式下细菌耐药性的传播机制研究,为水产养殖合理用药提供依据。; 冯永永姜兰邓玉婷谭爱萍张瑞泉罗理; 关键词：气单胞菌 I类整合子耐药

畜禽—鱼复合养殖模式中气单胞菌Ⅰ类整合子的分子流行特征: 气单胞菌(Aeromonas)是隶属气单胞菌科(Aeromonaseae)的一类革兰氏阴性短杆菌,多见于江河或沿岸的海水中。气单胞菌是一种典型的条件致病菌,是鱼类的重要病原菌,亦可引起人畜的偶发性感染,致肠道疾病或食物中...; 冯永永; 关键词：气单胞菌 I类整合子; 文献传递

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