- 人HMGN5基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的构建人HMGN5基因的shRNA慢病毒载体并鉴定在肺癌A549和H1299细胞上的沉默效率。方法设计HMGN5基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLL-3.7载体,并筛选获得有效的shRNA慢病毒载体,在293T细胞包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549和H1299细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平上检测HMGN5的沉默效率。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到5×108TU/ml。shRNA慢病毒颗粒感染A549和H1299细胞后HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了71.7%和50.7%。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为探讨HMGN5在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。
- 陈鹏马忠森王秀丽李博任锦胡娱新郏博刘锋石莹
- 关键词：SHRNA慢病毒
- RNA干扰沉默HMGN5基因对肺癌H1299细胞增殖和周期的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨RNA干扰技术沉默高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因对肺癌H1299细胞增殖和细胞周期的影响,为肺癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法:构建HMGN5特异性siRNA慢病毒载体,感染肺癌H1299细胞,设阴性对照组及干扰组,应用Real-time PCR和Western blotting方法分别从mRNA和蛋白质水平检测各组干扰质粒对HMGN5基因的干扰效果,MTT和BrdU法检测HMGN5 siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:与阴性对照组比较,干扰组HMGN5的mRNA表达量下降了50.7%(P<0.05),蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;BrdU实验RNAi干扰组细胞增殖率(37.8%)明显低于对照组(55.0%)(P<0.05);流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(54.6%±0.9%)高于阴性对照组(46.5%±0.4%)(P<0.05)。结论:运用RNA干扰技术能够有效沉默H1299细胞的HMGN5基因,并抑制肺癌细胞的增殖能力,提示HMGN5在肺癌的发生发展中起重要作用,抑制HMGN5的表达可能成为一种治疗肺癌的方法。
- 陈鹏马忠森王秀丽任锦胡娱新李景贺李博郏博刘锋
- 关键词：RNA干扰细胞增殖
- 特发性肺间质纤维化患者血清诱骗受体3和癌胚抗原水平分析被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨诱骗受体3和癌胚抗原与特发性肺间质纤维化的关系。方法:特发性肺间质纤维化患者46例和健康体检者(对照组)30例,采用双抗体夹心酶联免疫法检测血清诱骗受体3水平,间接酶联免疫吸附法检测癌胚抗原水平。结果:与对照组比较,特发性肺间质纤维化组血清诱骗受体3及癌胚抗原水平明显升高(P<0.01),诱骗受体3及癌胚抗原与特发性肺间质纤维化严重程度具有一定相关性。结论:联合监测血清诱骗受体3及癌胚抗原水平,对特发性肺间质纤维化的诊断和判断进展及预后具有参考价值。
- 刘晶刘锋杨洋吴春风安继红辛秀琴马忠森
- 关键词：特发性肺间质纤维化诱骗受体3癌胚抗原
- 氯丙嗪对紫杉醇协同作用的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察氯丙嗪与紫杉醇联合应用对人肺巨细胞癌株(PLA801D)增殖抑制及对其细胞周期的影响。方法采用MTT法检测不同浓度紫杉醇单独及与氯丙嗪联合使用时对PLA801D细胞的生长抑制率;应用流式细胞术分析单独及联合用药后,PLA801D细胞周期的变化和凋亡率。结果单药组诱导的凋亡率随紫杉醇剂量增加而升高,当紫杉醇浓度为24μg/ml时,诱导的凋亡率最高为13.2%;而两药联用(紫杉醇剂量不变,氯丙嗪剂量为4μg/ml),诱导的凋亡率明显高于紫杉醇单用组为55.8%,两组比较差异显著(P<0.01)。同时,两药联用比单用抑瘤率亦有不同程度的提高(P<0.05),且呈时间、剂量依赖性。结论在一定浓度范围内,氯丙嗪在增强紫杉醇诱导PLA801D细胞凋亡及增殖抑制作用上具有明显的协同效应。
- 安继红刘锋陈鹏孙立群
- RNAi沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的构建HMGN5基因的shRNA慢病毒载体,并在肺癌A549细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法筛选HMGN5基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,与LentiLox3.7慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞,设阴性组及干涉组,应用Real-time PCR和Western印迹的方法检测HMGN5在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察HMGN5基因沉默对A549细胞增殖的影响。结果构建的shRNA慢病毒颗粒感染A549细胞后,干涉组HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了71.7%,显著抑制其蛋白表达;MTT结果表明细胞增殖能力明显降低,干涉组克隆形成能力较阴性组明显减弱。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,其能够在肺癌A549细胞上有效沉默靶基因。HMGN5基因具有影响肺癌细胞恶性增殖的能力,为肺癌的基因治疗奠定了实验基础。
- 陈鹏马忠森王秀丽于庭胡娱新郏博刘锋石莹詹婧
- 关键词：RNAI肺癌细胞增殖
- 氯丙嗪对肺癌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 安继红陈鹏姚芳刘锋
- 关键词：氯丙嗪肺癌凋亡率
- 儿童木村病1例报告被引量：2
- 2011年
- 1临床资料
患儿，男，11岁。因反复左眼突出2年余入院。患儿2年前发现左眼突出，逐渐明显，入院前2个月曾就诊于本院眼科，诊断为眼眶异物行手术治疗，病理显示肿物呈灰褐色，切面灰白质硬。
- 陈鹏许忠田昕张思瑾郑百红郭楠刘锋
- 关键词：木村病儿童手术治疗眼眶异物患儿左眼
