孙志伟
- 作品数：119 被引量：317H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学军事经济管理更多>>
- B型肉毒毒素保护性抗原Hc在大肠杆菌中的可溶性高表达被引量：8
- 2008年
- 目的:通过序列优化及表达条件改进,在大肠杆菌中高效可溶性表达B型肉毒毒素保护性抗原Hc(Bont/B-Hc)。方法:对Bont/B-Hc基因片段优化,用大肠杆菌常用密码子替换稀有密码子,并将(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多条具有重叠互补序列的寡核苷酸片段,采用重叠延伸PCR方法获得了Bont/B-Hc的全长基因,并构建了原核可溶性表达载体;将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导Bont/B-Hc的表达并进行纯化及Western印迹鉴定。结果和结论:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性高表达,占菌体裂解液上清总蛋白的26.7%,表达量达到30mg/L,是目前国内外已知表达的最高水平;经Ni柱一步纯化后,目的蛋白纯度可达到80.3%,为肉毒毒素中和抗体的制备及亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 于蕊王双余云舟俞炜源孙志伟
- 关键词：B型肉毒毒素
- 定点整合人Bcl-2基因的CHO/dhfr-细胞株的建立被引量：1
- 2005年
- 构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达。通过流式细胞仪和DNALadder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血清IMDM培养基中细胞的活细胞数目和活细胞比例。结果获得了稳定表达Bcl-2基因的细胞株CHO-Bcl-2,该细胞株能高水平表达Bcl-2蛋白。在无血清培养过程中,CHO-Bcl-2细胞比对照细胞保持高约15%的活细胞比例,细胞总数高25%。CHO-Bcl-2在高NH4+(50mmol/L)培养条件下具有较低的凋亡水平。建立了能够高表达Bcl-2基因并具有一定的抗凋亡能力的重组CHO/dhfr-细胞株。
- 许凌峰刘志刚孙志伟林建波杜韫刘姗俞炜源
- 关键词：BCL-2基因细胞培养凋亡
- 重组人sIL-2Rα在HEK293细胞中的分泌性表达与鉴定
- 2010年
- 目的在HEK293细胞瞬时表达带有组氨酸标签的重组人sIL-2Rα的胞外功能区片段,并进行纯化与鉴定。方法对GenBank中IL-2Rα膜外区基因序列进行优化,并在3′端融合组氨酸标签序列的基因,人工合成该基因并将其克隆到表达载体pL-293;转染HEK293细胞瞬时表达sIL-2Rα;表达产物His标签纯化;SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。结果表达产物中在相对分子质量为48 000处可见与目的蛋白相对分子质量相符的条带,该条带可被sIL-2Rα单克隆抗体识别。结论构建的重组sIL-2Rα质粒能够在HEK293细胞瞬时表达,表达量为1~1.5 mg/L。
- 王双陈燕侠王瑞琳孙志伟林建波俞炜源
- 关键词：SIL-2R
- 抗OX40治疗性单抗的研制简介
- 治疗性单抗作为肿瘤免疫治疗领域中的一支重要方向,本课题采用高通量噬菌体抗体库固相筛选技术，对多个抗体库进行多轮筛选，得到具有一定结合活性的单链抗体一株，并命名为OX40mab。其与抗原结合亲和力同OX40唯一配体OX40...
- 侯小娟王双仇玮祎孙志伟
- 关键词：药物设计抗肿瘤作用
- 复方蒿甲醚片和苯芴醇两种剂型治疗恶性疟临床对比试验被引量：6
- 2000年
- [目的 ]观察复方蒿甲醚及其组分之一苯芴醇两种剂型对恶性疟的疗效和安全性。 [方法 ]共收治 15 0例恶性疟患者 ,采用双盲 (复方蒿甲醚片组和苯芴醇片组 )、随机、对比方法 ,其中复方蒿甲醚组 (A) 5 1例、苯芴醇片剂组 (B) 5 0例、苯芴醇胶丸组 (C) 4 9例。病人住院后观察 2 8d。 [结果 ]A、B、C3组的平均退热时数分别为 (17.1±8.6 ) h、(34.0± 2 3.2 )和 (2 9.4± 2 4.9) h;平均原虫转阴时间分别为 (2 9.7± 8.9) h、(5 1.6± 14.1) h和 (5 4.7± 17.4) h;3组患者均达到临床治愈 ;观察期间无明显不良反应 ,化验检查亦无明显改变。 [结论 ]复方蒿甲醚和苯芴醇两种剂型对恶性疟均有良好的治疗作用 。
- 孙志伟单承启李国福丁德本刘光裕王京燕焦岫卿
- 关键词：复方蒿甲醚苯芴醇恶性疟药物疗法
- 全人源P选择素抗体在急性肺炎治疗中的应用
- P-selectin是细胞黏附分子选择素家族成员之一,通过与其配体相互作用参与体内多种生理和病理过程。P-selectin在诸多疾病如心血管疾病、炎症反应、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生发展中发挥着重要作用。通过阻断P-s...
- 仇玮祎王双李鹤张畅俞炜源孙志伟
- 文献传递
- 抗肝癌单链抗体与PE38融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：5
- 2003年
- 目的 :实现二硫键稳定的抗肝癌单链抗体与PE38融合 ,免疫毒素在大肠杆菌中的可溶性表达 ,为下游的活性检测等工作打下基础 .方法 :设计了两种不同的表达载体(GST、硫氧还蛋白促可溶表达载体 ) ,并通过改变宿主菌菌株、IPTG诱导浓度、诱导温度及诱导时间等 ,优化表达条件 ;通过ELISA法判断该免疫毒素中单链抗体的结合活性 .结果 :抗肝癌单链抗体与PE38融合蛋白在大肠杆菌Origami(DE3)的上清中得到表达 ,表达量占菌体总可溶蛋白量的2 1% ;ELISA法证实该融合蛋白保持了亲本抗体的特异性 .结论 :dsFv
- 赵君孙志伟刘彦仿俞炜源
- 关键词：免疫毒素类单链抗体
- 抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:获得人源性抗P-选择蛋白(selectin)特异性抗体,为相关疾病治疗奠定基础。方法:在HEK293细胞中真核分泌表达人P-选择蛋白功能性片段,以此蛋白片段作为抗原,利用本室构建的大容量全合成人源性噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮固相筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体A1改造成全抗体(IgG1),重组质粒转染H293细胞后,抗体得到表达;表达后在全抗体水平上用ELISA和Western印迹分别验证了A1抗体的特异性,并通过非竞争ELISA方法初步测定这株抗体的亲和力。结果:3轮筛选得到3株特异性噬菌体抗体,其中富集效果最好的单链抗体A1改造成全抗体形式后特异性良好,抗体亲和力Kd=2×10-8 mol/L。结论:筛选得到一株特异性较好的抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体A1,其特异性和亲和力较好,有继续开发的价值。
- 李鹤王双林建波孙志伟何建勇
- 关键词：真核表达噬菌体抗体特异性
- 一种稳定性高的人源抗VEGF抗体及其应用
- 本发明提供了一种稳定性高的人源抗VEGF抗体及其应用。通过计算机辅助分子设计结合实验验证，对一株抗VEGF功能抗体的轻重链可变区进行热稳定性改造，在不降低抗体亲和力的前提下，获得了热稳定性更好的突变体抗体，将各突变位点进...
- 王双孙志伟曾大地常红艳仇玮祎孙九如范志和杨涛范铁炯
- 日本脑炎病毒SA14-14-2E蛋白结构域Ⅲ的抗原性和免疫原性分析被引量：3
- 2009年
- 为了表达日本脑炎病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域DⅢ区,了解其作为亚单位疫苗的可能性,本研究根据SA14-14-2病毒株序列(GenBank Accession No.D90195)设计两条引物,以全长JEV感染性克隆pBR-JTF为模板,通过PCR扩增出JEVE蛋白DⅢ的cDNA片段,构建了原核表达载体pET-JEDⅢ,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行融合表达。融合蛋白为可溶性表达,表达量约占菌体蛋白的75%。用纯化后蛋白免疫新西兰兔和BALB/C鼠,通过ELISA,Western blotting,噬斑减少实验,及乳鼠攻毒实验验证JEDⅢ的抗原性和免疫原性。Western blotting及ELISA结果表明纯化后的表达产物具有良好的抗原性,纯化的JEDⅢ蛋白免疫新西兰兔,可以获得高达1:7×105滴度的抗JEV特异性抗体;JEDⅢ蛋白免疫BALB/C鼠,可以获得1:8.2×104滴度的抗JEV特异性抗体。并且获得1:256滴度的中和抗体,乳鼠攻毒实验能达到75%的保护效果。以上结果说明本研究表达、纯化的重组JEDⅢ蛋白,免疫小鼠以及兔后,能产生抗JEV的特异性抗体,中和性抗体,能够保护部分乳鼠接受毒种的攻击,抗原性及免疫原性较好,有进一步开发研制成亚单位疫苗的潜能。
- 黄莺刘珊杨鹏杜韫孙志伟俞炜源
- 关键词：日本脑炎病毒E蛋白亚单位疫苗
