宋玉靖
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
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- 发文基金：山西省科技攻关计划项目博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
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- 人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因片段(363～505位氨基酸)的原核表达质粒,并鉴定所表达蛋白的反应原性。方法以含有HCMVpp65全长基因的pGEM-T-pp65质粒为模板,PCR扩增pp65基因第1087～1515位核苷酸片段,酶切后插入pET-21a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,纯化后进行Western blot鉴定。结果酶切分析和测序证明原核表达质粒pET-21a(+)-pp65构建正确。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,以1.0mmol/L IPTG诱导5h,目的蛋白的表达量最高。纯化后的蛋白具有良好的反应原性。结论已成功构建了HCMV pp65基因片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白。
- 宋玉靖樊卫平王宏伟张帆范国权
- 关键词：人巨细胞病毒原核表达
- 简易外周血单个核细胞分离方法的探索被引量：9
- 2010年
- 目的探索简单、经济易行的大容量血样无菌分离外周血单个核细胞(PBMC)的方法。方法同时用新方法和经典的聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离同一份血样。配对t检验分析比较两种方法获取PBMC的数量。新方法采用先离心抗凝血,取出血浆与红细胞交界层,再用经典分离法分离交界层获得PBMC,余留抗凝血再次离心取出交界层并分离获取PBMC。结果新方法得到的PBMC总数不低于经典分离法(P>0.05)。结论该法能简单安全地从大量血样中无菌分离PBMC。
- 樊卫平宋玉靖郝颜琴刘军权陈复兴王宏伟
- 关键词：PBMC
- 人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达、鉴定以及酵母表达载体的构建
- 目的:选择HCMVpp65基因中能激发CTL和B细胞免疫的优势抗原表位基因pp65(1087-1515nt)基因片段，PCR扩增片段，构建表达载体并在原核细胞中进行功能性表达，进一步鉴定表达蛋白的抗原性;构建酵母pPIC...
- 宋玉靖
- 关键词：巨细胞病毒PP65蛋白原核表达
- 文献传递
- WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。
- 樊卫平谢艳云宋玉靖王宏伟郝彦琴苑晓娟
- 关键词：WT1肽疫苗树突状细胞CTL抗肿瘤
