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师忠芳: 作品数：33 被引量：44H指数：5; 供职机构：首都医科大学附属北京天坛医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金海外及港澳学者合作研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>

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腺苷酸活化蛋白激酶在星形胶质细胞中的表达: 2017年; 目的通过检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)α1、α2、β1、β2、γ1及γ2亚基在培养大鼠星形胶质细胞中的表达,探讨AMPK在星形胶质细胞中以何种形式组成三聚体。方法取新生1 d的Wistar大鼠脑皮层进行星形胶质细胞培养,用胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和S100β免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞。应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测培养星形胶质细胞中AMPK各亚基的表达情况。结果 GFAP和S100β细胞免疫荧光染色显示,培养细胞95%以上为免疫荧光染色阳性细胞。RT-PCR实验结果显示培养的星形胶质细胞中有AMPKα1、α2、β1、γ1及γ2亚基的特异性目的条带出现,没有AMPKβ2亚基目的条带出现;在出现的5种特异性目的条带中,AMPKα2、β1及γ1亚基目的条带表达相对较多,而AMPKα1及γ2亚基只有微弱表达。结论星形胶质细胞中AMPK由α2、β1及γ1亚基组成三聚体,在星形胶质细胞能量代谢调节中发挥重要作用。; 师忠芳徐立新闫旭董丽萍袁芳; 关键词：腺苷酸活化蛋白激酶星形胶质细胞细胞培养缺血性脑损伤

实验教学对医学及护理研究生科研能力的影响被引量：6: 2014年; 随着医疗卫生事业的迅速发展，医学及护理研究生的培养受到广泛重视。医学及护理研究生科研能力的培养在整个研究生培养体系中占有重要位置，包括生物化学、分子生物学及细胞培养等在内的实验教学对医学及护理研究生科研能力的培养有重要影响。其中的细胞培养实验教学不仅使学生学到了细胞培养的相关知识，也使其认识到无菌观念的重要性，对其今后从事临床及护理工作非常重要；同时，细胞培养实验教学能提高医学及护理研究生创新能力、思维能力、观察能力、实际操作能力、统筹能力及协调能力等科研能力。; 师忠芳袁芳

MAPKs信号通路干预对体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4表达的影响被引量：6: 2010年; 目的研究体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达变化,并观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路特异性抑制剂对此变化的影响。方法利用传代培养10d左右的大鼠星形胶质细胞制作划痕损伤模型,部分实验于划痕损伤前1h分别加入ERK抑制剂U0126,p38MAPK抑制剂SB203580及JNK抑制剂SP600125。观察细胞形态变化、GFAP免疫细胞化学染色变化,并用实时荧光定量PCR法检测AQP4mRNA表达变化。结果划痕损伤后12h,细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞突起向划痕区伸出,划痕区出现GFAP免疫化学染色阳性细胞,AQP4mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而U0126,SB203580和SP600125预处理均能阻止此种变化(P<0.05)。结论划痕损伤引起培养星形胶质细胞AQP4mRNA表达下调,MAPKs抑制剂可对抗此作用,提示MAPKs信号通路参与星形胶质细胞损伤后AQP4表达变化的调节。; 师忠芳赵焕英袁芳韩明路杨; 关键词：星形胶质细胞水通道蛋白4 丝裂原活化蛋白激酶

大鼠星形胶质细胞无血清培养方法的研究被引量：1: 2018年; 目的探索应用无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代培养及传代培养的方法.方法取出生24 h内Wistar大鼠大脑皮质组织,机械吹打分散为单细胞后在无血清培养基中进行原代培养.细胞传代时分别使用乙二胺四乙酸（EDTA）-胰酶或胰酶作为消化液,浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）终止消化作用,按照1∶2或1∶3的比例传代.显微镜下观察细胞生长状态,胶质纤维酸性蛋白（GFAP）细胞免疫荧光染色方法鉴定细胞表型,MTF法检测传代细胞增殖情况.结果细胞悬液静置15 min后更换新的无血清培养基培养,7d后显微镜下可见细胞生长良好,折光性强,胞体小而突起长;细胞免疫荧光染色鉴定显示＞95％的细胞为GFAP阳性细胞.与应用SBTI终止胰酶反应时未进行离心比较,低温、低速离心（4℃、3 000 ×g）3 min后,传代细胞可在无血清培养基中生长正常并增殖.MTT检测结果显示,EDTA-胰酶消化效果优于胰酶（A值分别为0.290±0.007、0.270±0.006,P＜0.010）;使用浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI终止消化（A值分别为0.290 ±0.013、0.290±0.017,P=0.820）及以1∶2或1∶3比例传代（A值分别为0.340±0.070、0.320 ±0.030,P =0.770）,传代星形胶质细胞数量的差异均无统计学意义.结论本研究建立无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代及传代培养的方法,为避免血清干扰更好地开展体外星形胶质细胞功能的研究提供了新的细胞模型.; 徐立新贾梅师忠芳董丽萍闫旭王玉娇陈烨袁芳; 关键词：星形细胞培养基无血清原代细胞培养

谷氨酸引起培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4表达动态变化被引量：1: 2010年; 目的研究谷氨酸是否引起培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达变化。方法利用传代培养至10d左右的大鼠星形胶质细胞,给予1mmol/LL-谷氨酸钠,分别作用1h、3h、6h、12h、24h、48h后进行细胞形态学观察、GFAP免疫化学染色及荧光定量PCR检测AQP4mRNA表达变化。结果谷氨酸作用1h后星形胶质细胞出现肿胀并随着作用时间延长肿胀持续,AQP4mRNA3h时开始出现表达降低(P<0.05),后随谷氨酸作用时间延长先下调后上调,12h达最低(P<0.01),48h升至高于正常(P<0.05)。结论AQP4可能在谷氨酸引起星形胶质细胞肿胀发生发展中发挥作用。; 路杨师忠芳袁芳韩明; 关键词：谷氨酸水通道蛋白4 星形胶质细胞

人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对5种抗肿瘤药物敏感性的研究: 2011年; 目的检测人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对顺铂(DDP)、替尼泊甙(VM26)、尼莫斯汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)及长春新碱(VCR)5种临床常用抗肿瘤药物的敏感性,筛选脑胶质瘤化疗敏感药物。方法用含0%、10%及20%胎牛血清的DMEM培养基培养BT325胶质瘤细胞,分别在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,以确定细胞生长的最佳血清浓度;采用CCK-8法检测不同血浆峰浓度(PPC)5种药物对BT325胶质瘤细胞活性的影响,计算抗肿瘤药物的抑制率及IC50。结果细胞形态观察及细胞生长曲线显示含10%胎牛血清的DMEM培养基对BT325胶质瘤细胞生长较为适宜。细胞活性检测显示DDP在0.625×PPC(抑制率为51.8%)及以上浓度时可抑制BT325细胞生长,在1.25×PPC(抑制率为75.1%)及以上浓度时BT325细胞高度敏感,且有量效关系;VM26对BT325细胞抑制率均在79.6%以上,为高度敏感,剂量范围广且存在量效关系;VCR各浓度对BT325细胞抑制率为50%左右,但是与药物剂量无关;各浓度ACNU、TMZ对BT325细胞抑制率均在34%以下,无抑制作用。结论 BT325胶质瘤细胞对DDP、VM26敏感,对VCR、ACNU、TMZ不敏感。; 韩明袁芳董丽萍师忠芳袁辉杨少华; 关键词：抗肿瘤药药物敏感性

脑内水通道蛋白4表达调节的研究进展被引量：5: 2007年; 脑内水通道蛋白4(AQP4)在细胞分化不同阶段表达情况不同,内皮细胞也影响其表达分布;星形胶质细胞及其微环境的渗透压、氨浓度、氧分压、温度以及一些其他因素如激素及肽类、外源性物质铅、补体抑制剂、脂多糖等的存在都会影响AQP4表达。但脑内AQP4表达的调节机制不十分清楚,与之相关的有蛋白的相互作用、蛋白激酶C(PKC)磷酸化途径、丝裂原激活的蛋白激酶信号转导途径、钙信号途径、转录因子活化等,其中研究最多的是PKC通过磷酸化抑制AQP4的活性。; 师忠芳袁芳; 关键词：水通道蛋白4 蛋白激酶C 磷酸化

比较谷氨酸引起两品种大鼠培养星形胶质细胞肿胀的差异被引量：1: 2016年; 目的比较Wistar大鼠及SD大鼠培养星形胶质细胞(AST)对谷氨酸所致细胞肿胀的差异。方法利用新生1 d的Wistar大鼠和SD大鼠进行AST原代及传代培养,传代培养10 d分别给予1、10 mmol/L谷氨酸孵育48 h,通过乳酸脱氢酶释放率检测细胞活性,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色、Image Pro Plus软件测量细胞周长表示细胞体积变化,通过逆转录实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达变化。结果谷氨酸对不同品种大鼠AST活性影响没有差异(P>0.05)。在正常情况下,Wistar大鼠AST周长小于SD大鼠,在给予谷氨酸处理后,均明显大于SD大鼠(P<0.05)。在给予1 mmol/L谷氨酸后,Wistar大鼠AST的AQP4mRNA表达明显高于SD大鼠(P<0.05)。结论 Wistar大鼠AST对谷氨酸所致细胞肿胀较SD大鼠明显,且谷氨酸对两品种大鼠AST上AQP4表达变化的影响存在差异。; 师忠芳徐立新卢易董丽萍闫旭杨少华袁芳; 关键词：谷氨酸星形胶质细胞水通道蛋白4

大鼠星形胶质细胞体外培养划伤模型的建立: 目的建立大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AST）体外培养划伤模型。方法取新生1-2 d Wistar大鼠皮层进行AST原代培养,约10天后传代,传代培养至10天左右,用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色检测鉴...; 师忠芳袁芳董丽萍徐立新韩明; 关键词：星形胶质细胞细胞培养乳酸脱氢酶; 文献传递

人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞Syntrophin的表达变化被引量：2: 2017年; 目的观察人颞叶内侧癫痫(MTLE)海马组织星形胶质细胞syntrophin的表达变化。方法 2015年4月至2016年7月,17例癫痫患者手术切除的海马组织,依据苏木素-伊红(HE)染色及胶质原纤维酸性蛋白、神经元核抗原免疫组织化学染色结果,分为MTLE组13例和非MTLE组4例。免疫荧光双重组织化学法及免疫荧光组织化学法观察syntrophin的表达。结果 MTLE组星形胶质细胞大量增生,神经元明显减少。syntrophin在星形胶质细胞膜及足突处表达。与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin在血管周围星形胶质细胞足突处分布减少,在其他部位分布增加。图像分析显示,与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin蛋白量显著增多(t=5.421,P<0.001)。结论海马组织syntrophin在星形胶质细胞上的分布及其整体表达变化可能与MTLE发生相关。; 王晓璇孙振荣吴敏师忠芳闫旭徐立新董丽萍杨少华袁芳; 关键词：颞叶内侧癫痫海马星形胶质细胞 SYNTROPHIN

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