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李沂: 作品数：14 被引量：12H指数：2; 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划吉林省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救: 2012年; 将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。; 崔鹤馨李沂田宇飞袁森凡敏靖杰齐延新郭欢欢田明尧金宁一; 关键词：病毒拯救禽流感病毒重组病毒

新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证被引量：1: 2011年; 目的:构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证。方法:设计一个包含人巨细胞病毒启动子(CMVpromoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域(MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDGFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGHpolyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassetteⅡ),在其上下游添加NruⅠ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用NruⅠ酶切pGH-Ⅱ,回收1 300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,NruⅠ及BglⅡ/PstⅠ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2;然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证。结果:两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达盒具有蛋白展示功能。结论:成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础。; 杜寿文李昌王宇航任大勇刘存霞孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 关键词：EGFP

IFITM1\2\3的克隆表达及其抗病毒作用研究: 干扰素诱导的跨膜蛋白家族,又被称作IFITM家族,最近的研究表明其具有一定的抗病毒作用,本研究首先设计了克隆ifitm1, ifitm2, ifitm3三种基因的上下游引物,在再通过以IFN-α作为诱导剂,诱导人胚肾29...; 李沂; 关键词：VSV-G 抗病毒; 文献传递

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 引言/目的痘苗病毒天坛株自身具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等作为载体的优越性,还具有相对毒力较弱、比较安全等特点,因此广泛用于生物医药研究与开发。本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表...; 杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青金宁一; 文献传递

IFITM3基因的克隆及其在真核细胞中的表达与定位研究被引量：1: 2012年; 目的:干扰素rhIFN-α2B体外诱导人胚胎肾细胞系293T细胞获得IFITM3基因,观察IFITM3基因在293T细胞中的表达与定位。方法:利用干扰素rhIFN-α2B体外诱导293T细胞获得IFITM3基因,采用RT-PCR技术扩增获得干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM3全长cDNA,扩增产物连接至pMD18-T载体上,测序正确后,将IFITM3基因亚克隆至真核表达载体pVAX1中获得重组质粒pV-IFITM3,通过转染293T细胞进行表达与定位研究。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,获得的目的基因IFITM3能够表达,且具有良好抗原活性;激光共聚焦显微镜观察显示,IFITM3基因表达后主要分布于细胞膜上。结论:成功获得IFITM3基因,并验证了其表达。该研究为基于IFITM3的抗病毒药物以及探讨其抗病毒机制研究奠定了坚实基础。; 朱娜李昌郭焱李沂孙丹丹任静强杜寿文秦艳青王茂鹏田宇飞金宁一; 关键词：克隆

3种常见呼吸道病毒检测基因芯片的制备被引量：6: 2013年; 目的建立一种可同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒的基因芯片方法。方法根据GenBank已发表的鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列,应用生物学软件设计相应的引物和寡核苷酸探针,构建检测芯片;使用巢式PCR扩增标记目的片段,将其与检测基因芯片进行杂交和扫描分析;通过特异性、灵敏性和重复性试验评估基因芯片方法。结果设计的全部探针均能与相应的标记样品特异性杂交,其中探针1a和1b可特异检测鼻病毒;探针2a、2b和2c可特异检测呼吸道合胞病毒,探针3a和3b可特异检测腺病毒。基因芯片法检测3种病毒的最低拷贝数分别是2.59×102个/μl、2.21×101个/μl和2.05×102个/μl。结论构建的基因芯片可特异性检测样品中低滴度的鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒,有望为临床提供确诊依据。; 崔鹤馨田明尧姜庆利袁森田宇飞李沂刘昊靖杰阎富龙金宁一朱光泽; 关键词：鼻病毒呼吸道合胞病毒腺病毒巢式PCR 基因芯片

IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探: 2013年; 目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用。方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-sim-ple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况。同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用。结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布。过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用。结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础。; 李沂李昌杜寿文王茂鹏朱羿龙刘存霞秦艳青金宁一; 关键词：克隆表达抗病毒作用

新型三基因表达盒痘苗病毒转移载体的构建及评价: 痘苗病毒广泛用于外源基因表达和基因工程重组病毒疫苗的研发，因此一种高重组率、高效表达、遗传稳定性优良的痘苗病毒转移载体非常重要。本研究为疫苗研制和基因治疗提供了有效的载体pSTKE，运用该载体制备的重组病毒可同时高效表达...; 杜寿文金宁一李昌王宇航刘存霞任大勇孙丹丹朱娜李沂秦艳青; 关键词：痘苗病毒穿梭载体基因转移