林先滋
- 作品数：19 被引量：80H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- pri—miR-103-1重组腺病毒的构建及其在山羊原代乳腺上皮细胞中的表达
- miR-103—1位于PANK3(泛酸酯酶3)的第五内含子。miR-103-1在人、小鼠、牛的乳腺组织中高表达，且在乳腺癌组织中的表达量较正常组织下降显著。同时，miR-103-1可能调控脂肪酸合成相关基因、脂肪酸运输基...
- 林先滋罗军
- 关键词：重组腺病毒乳腺上皮细胞
- 一种山羊SCD基因重组腺病毒载体的构建方法
- 本发明公开了一种山羊SCD基因重组腺病毒载体的构建方法，包括以下步骤：A1，构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-SCD；A2，重组腺病毒载体Ad-SCD的构建，通过对SCD基因过表达，将可能引起乳腺或其它组织合成...
- 赵旺生罗军朱越滕炎玲林先滋李君
- 文献传递
- 西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2010年
- 【目的】构建西农萨能羊BTN基因RNA干扰的重组腺病毒载体,为研究BTN基因的功能和作用机制奠定基础。【方法】设计并合成3对针对BTN不同位点的shRNA编码序列,克隆到pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA载体中,并与已构建好的表达BTN的pDsRed1-C1-BTN载体共转染HEK293细胞,筛选有效的干扰序列。通过与腺病毒骨架质粒重组,制备表达干扰BTN基因的shRNA的腺病毒,经PacⅠ线性化后,在HEK293细胞中包装并扩增病毒,用TCID50法进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清液。【结果】成功构建了西农萨能羊BTN基因的RNAi腺病毒表达载体,腺病毒经包装和扩增后,病毒滴度可达到5×109PFU/mL。【结论】获得了有功能的pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA病毒重组子。
- 赵旺生罗军王伟滕炎玲王桢林先滋
- 关键词：RNA干扰腺病毒载体
- 陕北白绒山羊HSL基因外显子1的SNPs及其与部分生产性状的相关分析被引量：7
- 2009年
- 【目的】探讨陕北白绒山羊激素敏感脂酶(Hormone sensitive lipase,HSL)基因外显子1的SNP遗传多态性及其与产绒、胴体和生长性状的相关关系,为陕北白绒山羊分子标记辅助选择提供理论依据。【方法】测定168只陕北白绒山羊部分生长、胴体指标。利用PCR-SSCP技术分析HSL基因外显子1的SNP遗传多态性。【结果】陕北白绒山羊HSL基因外显子1有AB和AA 2种基因型,在群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态;AB与AA基因型个体的绒长差异极显著(P<0.01),体高和背膘厚差异显著(P<0.05),其他性状均无显著差异;AB基因型个体初生重、断奶重、绒长、周岁重、体高、体长、管围、背膘厚大于AA基因型,但AA基因型个体毛长、产绒量、胸围、眼肌面积大于AB基因型。【结论】陕北白绒山羊HSL基因外显子1具有多态性,该基因可能是陕北白绒山羊产绒及胴体性状的主效基因,或者与控制这些性状的主效基因相连锁。
- 刘俊霞罗军滕炎玲绳贺军林先滋余刚
- 关键词：陕北白绒山羊PCR-SSCP单核苷酸多态性
- 一种稳定表达山羊miR-103的腺病毒载体的构建方法及其应用
- 本发明公开了一种山羊miR-103的腺病毒载体的构建方法及其应用，其特征在于包括如下步骤：合成上、下游引物，以山羊miR-103DNA模板进行PCR扩增，其中所述上游引物为5’-CGC GATCGGTACCAACAGAA...
- 林先滋罗军赵旺生余康朱江江张犁苹
- 文献传递
- 一种乳腺上皮细胞的组织块种植方法
- 本发明公开了一种乳腺上皮细胞的组织块种植方法，其特征在于，包括如下步骤：1)预处理：以血清铺满培养皿，静置；2)种植：在所述培养皿中种植乳腺组织块，收集乳腺上皮细胞和成纤维细胞；3)纯化：除去成纤维细胞，得到乳腺上皮细胞...
- 王桢罗军王伟赵旺生林先滋滕炎玲
- 文献传递
- miR-200家族在西农萨能奶山羊乳腺组织中的表达分析被引量：6
- 2013年
- 笔者拟获得山羊miR-200家族乳腺组织表达谱,研究miR-200家族成员之间表达相关性及miR-200家族成员与山羊乳成分的相关性。通过定量PCR,检测miR-200家族在西农萨能奶山羊泌乳中期和干奶期乳腺组织中的表达量;利用Pearson相关系数分析miR-200家族不同成员表达量之间的相关性,同时分析miR-200家族成员与山羊乳成分之间的相关关系;利用miRanda和TargetScan 6.2软件分析、RNAhybrid和PITA软件预测miR-200家族的靶基因。结果表明,miR-200家族在奶山羊泌乳中期的乳腺组织中的表达量极显著高于干奶期(P<0.01);miR-200a与miR-141之间的表达量显著相关(P<0.05),miR-200b与miR-200c之间的表达量极显著相关(P<0.01);泌乳中期奶山羊乳腺组织中miR-200c的表达量与乳蛋白、非脂固形物(SNF)、冰点(FPD)的含量显著相关(P<0.05);经软件分析及预测发现,miR-200a/miR-141靶向作用于在乳脂合成中起关键作用的基因STAT4。miR-200家族可能对山羊乳蛋白及乳脂合成具有一定的调控作用。
- 张犁苹罗军林先滋朱江江石恒波史怀平李君
- 关键词：西农萨能奶山羊靶基因
- miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响被引量：10
- 2012年
- 旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响。以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a。采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁。TCI50法测定病毒滴度。qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平。序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a86bp和侧翼序列共297bp。酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功。Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU.mL-1。实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍。同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调。其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍。而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍。本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平。
- 林先滋罗军张犁苹朱江江石恒波苟德明
- 关键词：重组腺病毒乳腺上皮细胞
- 腺病毒介导的山羊固醇调节元件结合蛋白-1基因的超表达对乳腺脂肪酸代谢相关基因表达的影响
- ＜正＞本研究旨在通过构建西农萨能羊固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）基因的重组腺病毒超表达载体,获得有感染性的病毒颗粒,并检测该基因过表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响,为进一步研究该基因在脂肪酸代谢...
- 许会芬罗军李芳石恒波李君林先滋朱江江
- 关键词：山羊SREBP-1超表达
- 文献传递
- 山羊SREBP-1基因的超表达对脂肪酸代谢相关基因表达的影响被引量：13
- 2012年
- 本研究旨在通过构建西农萨能羊固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因的重组腺病毒超表达载体,获得有感染性的病毒颗粒,并检测该基因过表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响,为进一步研究该基因在脂肪酸代谢及泌乳调控中的功能奠定基础。根据GenBank中收录的西农萨能羊SREBP-1基因的序列设计引物,PCR扩增后进行测序。将测序正确的目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后并进行线性化,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌Escherichia coli BJ5183感受态细胞中进行同源重组,将重组成功的质粒进行PacⅠ酶线性化,转染HEK 293细胞进行重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定。病毒液感染原代乳腺上皮细胞,实时荧光定量检测SREBP-1超表达效果及对脂肪酸代谢相关基因的影响。结果表明:重组腺病毒质粒构建成功,腺病毒滴度为109U/mL。病毒液感染乳腺上皮细胞48 h后,SREBP-1基因表达量上升大约15倍,72 h后,表达量上调了30倍;对脂肪酸代谢相关基因的影响在72 h较为明显,其中,脂肪酸合酶(FASN)及酰基辅酶A羧化酶(ACC)均显著上调了大约两倍,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)上调了大约1.5倍,肝素X受体(LXRα)及甘油三酯水解酶(ATGL)表达量升高了1.2倍;其中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)表达水平无明显变化。表明在西农萨能羊乳腺上皮细胞中,SREBP-1能够促进脂肪酸合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂肪酸代谢具有调控作用。
- 许会芬罗军李芳余康石恒波李君林先滋朱江江
- 关键词：山羊SREBP-1超表达
