王慧勤
- 作品数：11 被引量：24H指数：3
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学建筑科学更多>>
- 3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响
- 研究目的:本研究选择了3种常用的结核分支杆菌致死方法,即热灭活致死法、超声裂解致死法和紫外线照射法,利用PMA-q PCR偶联技术对这3种死菌制备方法的效果进行评价,用以分析结核分支杆菌死菌悬液的不同致死方式对PMA-q...
- 王慧党温书香王慧勤曹旭东陈创夫
- 文献传递
- 3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响
- 研究目的：本研究选择了3种常用的结核分支杆菌致死方法，即热灭活致死法、超声裂解致死法和紫外线照射法，利用PMA-qPCR 偶联技术对这3 种死菌制备方法的效果进行评价，用以分析结核分支杆菌死菌悬液的不同致死方式对PMA-...
- 王慧党温书香王慧勤曹旭东陈创夫
- 结核分枝杆菌分泌蛋白Rv2031c和Rv2626c对细胞凋亡影响的初步研究
- 结核病（Mycobacterium，TB）是结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一种人兽共患慢性传染病，是由单一病原导致人类死亡的传染性疾病之一，严重危害人类身心健康。结核分...
- 王慧勤
- 关键词：结核分支杆菌细胞凋亡流式细胞仪
- 文献传递
- 结核分支杆菌Rv2031c慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-EGFP中,经酶切和测序鉴定后,获得plex-Rv2031c-EGFP重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至293T细胞中,转染48h后收集慢病毒,并侵染RAW264.7细胞;侵染48h时收集细胞,用流式细胞术检测各试验组巨噬细胞的凋亡率;提取细胞总RNA并反转录成cDNA,PCR检测Rv2031c基因在细胞中的表达情况;同时,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白,Western blot检测Rv2031c蛋白表达水平。结果表明,成功构建了Rv2031c的慢病毒表达载体plex-Rv2031c-EGFP;构建了过表达Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7细胞的凋亡率为41.8%,而对照组EGFP-lv感染的RAW264.7细胞其凋亡率为30.0%;PCR结果表明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达;Western blot结果显示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达。该研究成功构建了结核分支杆菌Rv2031c的慢病毒表达载体并验证了其对RAW264.7细胞凋亡的影响,为结核分支杆菌在机体内潜伏期感染的药物研究奠定了基础。
- 史梦婷孟露萍包海洋付强史慧君王慧勤张辉任艳乔军陈创夫
- 关键词：慢病毒RAW264.7细胞细胞凋亡
- NLRP3炎症小体在牛种布鲁氏菌2308和RB51侵染人巨噬细胞THP-1过程中作用的初步研究被引量：3
- 2014年
- 为了探索NLRP3炎症小体在布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中的作用,以牛种布鲁氏菌强毒株2308、弱毒株RB51侵染人巨噬细胞THP-1,用实时荧光定量PCR方法探索布鲁氏菌引起宿主细胞中NLRP3炎症小体及相关细胞因子的变化情况。结果表明:在布鲁氏菌侵染THP-1细胞后0-24 h,NLRP3炎症小体在转录水平上总体呈现先下降后上升的趋势,THP-1细胞形态随着侵染时间的延长变得不规则,且出现聚集现象。强毒株2308对NLRP3炎症小体相关基因转录水平和THP-1细胞形态变化的影响均强于弱毒株RB51。这表明布鲁氏菌在感染初期有短暂抑制炎症小体的能力,这可能是布鲁氏菌逃避巨噬细胞杀灭作用的一种策略。
- 陈鹏博张亚丽王远志温书香王慧勤陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌巨噬细胞实时荧光定量PCR
- 结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对RAW264.7细胞凋亡的影响被引量：3
- 2016年
- 试验旨在研究结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分枝杆菌Rv2626c基因序列设计引物,并以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv cDNA为模板,PCR扩增Rv2626c基因并克隆至慢病毒表达载体pLEX-EGFP中,包装慢病毒并感染RAW264.7细胞,使用Western blotting和流式细胞仪技术检测Rv2626c蛋白表达水平和RAW264.7细胞凋亡率变化。结果显示,成功构建慢病毒表达载体pLEX-EGFP-Rv2626c;成功包装慢病毒并感染RAW264.7细胞;Rv2626c蛋白在RAW264.7细胞中高水平表达显著促进了细胞凋亡。本试验结果表明,在RAW264.7细胞中过表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白能显著性增加其凋亡水平。
- 孟露萍史梦婷包海洋付强史慧君王慧勤乔军张辉陈创夫
- 关键词：结核分枝杆菌RAW264.7细胞凋亡
- 羊种布氏菌043强毒株BRA0434基因缺失突变株的构建与毒力的初步评价
- 2015年
- 目的检测BRA0434基因对羊种布氏菌043毒力的影响。方法利用同源重组的原理,以BRA0434基因外侧的同源臂序列构建重组质粒,将其电转化至布氏菌043感受态细胞,通过卡那抗性筛选和检测引物鉴定而获得羊种布氏菌043-ΔBRA0434缺失突变株,并以之和羊种布氏菌043以106 CFU剂量腹腔接种小鼠,又以100∶1的感染复数侵染小鼠巨噬细胞。结果与羊种布氏菌043相比,羊种布氏菌043-ΔBRA0434缺失突变株的载菌量和小鼠脾脏重量的影响都有一定程度的下降;侵染小鼠巨噬细胞试验结果显示羊种布氏菌043-ΔBRA0434缺失突变株的毒力较羊种布氏菌043有所降低。结论BRA0434基因的缺失会减轻羊种布氏菌043的毒力。
- 纪太旺李志强张辉张俊波赵庆亮王浩李亚王慧勤陈创夫
- 关键词：布氏菌毒力
- 灰色模型GM(1,1)在新疆生产建设兵团护士人力预测研究中的应用被引量：3
- 2014年
- 目的预测新疆生产建设兵团"十二五"期间护士人力数量。方法利用新疆生产建设兵团统计年鉴,建立灰色模型GM(1,1)来预测兵团护士人力数量。结果兵团护士的灰色预测模型为:^X(1)(t+1)=140219.85e0.0488t-133136.85,模型的后验差比值C为0.265,小误差概率P为1,拟合精度等级为优秀。模型预测2012-2015年兵团护士人力数量分别为8950,9398,9868,10361。结论兵团要加强护士人力资源配置,GM(1,1)模型拟合兵团护士人力的数据结果理想,可用于兵团护士人力的短期预测。
- 刘军杨川王慧勤
- 关键词：新疆生产建设兵团
- PMA-qPCR快速检测结核活菌方法的建立被引量：4
- 2014年
- 为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法,本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合(PMA-qPCR),以结核标准株16 sRNA基因为靶基因,PMA对样品基因组提取物进行处理,PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示:PMA浓度在3μg/mL,曝光时间大于15 min时,PMA既不影响活菌的的扩增,又能有效抑制死菌的扩增;当PMA浓度大于20μg/mL时,PMA影响活菌DNA的扩增;PMA-qPCR技术能够定量不同比例的结核活/死菌悬液中的活菌。结论:PMA-qPCR技术能够快速准确检测出结核杆菌中的活细胞。
- 温书香王慧勤曹旭东赵新霞李亚张亚丽陈鹏博纪太旺陈创夫袁莉
- 结核分枝杆菌ESAT6、CFP10基因DNA疫苗对小鼠免疫原性的初步研究被引量：4
- 2014年
- 目的研究ESAT6、CFP10基因DNA疫苗分别与卡介苗联合免疫小鼠,以诱导免疫效果。方法以构建的真核表达载体pEGFP-N1-ESAT6、pEGFP-N1-CFP10与卡介苗共同免疫随机分成8组的80只小鼠,分别标记为:生理盐水组(SLYS)、卡介苗组(KJM)、pEGFP-N1组(P-N1)、pEGFP-N1-ESAT6组(P-N1-E)、pEGFP-N1-CFP10组(P-N1-C)、卡介苗加pEGFP-N1组(K+P-N1)、卡介苗加pEGFP-N1-ESAT6组(K+P-N1-E)和卡介苗加pEGFP-N1-CFP10组(K+P-N1-C)。每只小鼠皮内注射100μL卡介苗,每只小鼠肌肉注射50μg质粒,每组共注射3次。以纯化的ESAT6、CFP10蛋白作为抗原,用DOT-ELISA方法检测小鼠血清中的抗体;用ELISA方法检测小鼠血清中IFN-γ的变化。结果免疫3次后的小鼠血清中检测到针对CFP10蛋白的抗体,未检测到针对ESAT6蛋白的抗体。但二者血清中IFN-γ水平都有显著上升,K+P-N1-C和K+P-N1-E免疫3次后,测得的IFN-γ平均含量为(107.591±7.3281)pg/mL和(95.7503±9.0184)pg/mL,显著高于免前、一免、二免(P<0.01)。结论结核分枝杆菌ESAT6,CFP10基因DNA疫苗和卡介苗联合应用后可诱导小鼠产生有效的细胞免疫应答,为DNA疫苗的研究奠定一定的基础。
- 王慧勤李跃峰李志强温书香陈鹏博赵庆亮纪太旺曹旭东陈创夫
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT6CFP10DNA疫苗卡介苗
