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5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析被引量：2: 2014年; 目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析。方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响。结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响。结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性。; 张文峰张琼宇邵红伟吴凤麟王腾黄树林; 关键词：腺病毒载体 T淋巴细胞细胞毒性

5型和35型腺病毒纤毛蛋白的原核表达及活性验证: 2013年; 目的:原核表达5型腺病毒纤毛蛋白(Ad5 fiber)和35型腺病毒纤毛蛋白(Ad35 fiber),并对蛋白活性进行初步分析。方法:将重组质粒pET28a-Ad5 fiber和pET28a-Ad35 fiber转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经Ni-NTA凝胶珠亲和纯化,用SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,并用蛋白竞争性实验验证纯化蛋白的活性。结果:转化溶原菌后能够表达目的蛋白,Ad35 fiber蛋白对Ad5(5型腺病毒)感染无影响,只能阻断Ad5F35(5型腺病毒纤毛被替换为35型腺病毒纤毛的嵌合腺病毒)对细胞的感染;Ad5 fiber蛋白对嵌合腺病毒Ad5F35感染无影响,只能抑制Ad5对细胞的感染。结论:成功表达具有生物活性的5型和35型腺病毒纤毛蛋白,为进一步研究嵌合腺病毒Ad5F35感染细胞的机制奠定基础。; 张文峰张琼宇薄华本邵红伟李晓程王腾黄树林; 关键词：原核表达

肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复: 2015年; 目的研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化。方法Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞（PBMC）,经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群。结果诱导培养后的CIK中,分化的CD3＋CD56＋细胞亚群比例占12.6%~41.7%。PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达。CIK细胞群中,CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞亚群克隆组成无明显差异。结论肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖。; 彭鑫王腾邵红伟黄树林; 关键词：CIK T细胞 RT-PCR

HRM法检测肿瘤细胞PTEN基因突变实验研究被引量：1: 2016年; 目的:探索高分辨率熔解曲线(HRM)法检测肿瘤细胞系PTEN基因突变中的应用。方法:采用HRM法初筛肿瘤细胞系PTEN的突变,测序验证HRM筛选结果,TA克隆测序进一步明确突变情况。结果:HRM初筛出Jurkat细胞PTEN基因存在突变,测序结果与HRM结果一致,TA克隆测序确定Jurkat细胞系PTEN基因为缺失突变。结论:HRM法可准确筛选肿瘤细胞系中PTEN基因突变,适于肿瘤细胞PTEN基因突变筛选。; 贺华王腾彭鑫苏畅邵红伟黄树林; 关键词：HRM 突变 PTEN TA克隆

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应: 2012年; 目的探讨HLA—A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用。方法生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽；流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率；肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）诱导反应性CTLs，用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况；肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育，CytoTox96@非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况，倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化。结果生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2（KMSSGCAFL），流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞，HLA-A2表达率显著提高，经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ，Sur79M2诱导的CTLs能通过HIA．A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2，对HLA—A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用。结论点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生，该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系。; 沈晗黄昭亮陈晓华林燕梅王腾邵红伟黄树林; 关键词：SURVIVIN 抗肝癌 HLA-A2限制性

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王腾