石亮
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学生命科学研究院更多>>
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- HPLC-RF测定小鼠肝微粒体中CYP2A5的酶活性
- 2013年
- 目的以香豆素为探针底物建立测定小鼠肝微粒体中CYP2A5酶活性的方法。方法用Waters Symmetry C18柱;流动相为0.1%醋酸-乙腈=70∶30;流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃,E x=340 nm,E m=458 nm。香豆素与小鼠肝微粒体在37℃孵育20 min,加入含内标的冰乙腈终止,4℃、12000 r·min-1离心15 min,取上清液,用HPLC测定其代谢产物7-羟基香豆素的含量,以GraphPad Prism 5.0作图计算酶动力学参数。结果 7-羟基香豆素与内标两者分离良好。7-羟基香豆素的检测限为2 nmol·L-1(S/N≥3),线性范围为8～800nmol·L-1。日内日间精密度RSD小于5%,回收率为91.3%～101.4%。香豆素羟化反应的K m为2.15μmol·L-1;V max为9.74 pmol·(min·mg protein)-1。结论该方法稳定可靠,灵敏度高,适于体外CYP2A5酶活性的测定。
- 王二豪郭延垒张有金石亮张远冬王应雄杨竹于超
- 关键词：高效液相色谱-荧光检测法香豆素
- HPLC-ECD法测定小鼠脑组织内去甲肾上腺素的含量
- 2012年
- 目的:建立小鼠脑内去甲肾上腺素含量的高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)测定方法。方法:小鼠脑组织采用70%高氯酸沉淀蛋白后,以HPLC-ECD法进行分析。使用汉邦lichrospher C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为醋酸钾缓冲液-甲醇(95:5,pH 4.5),流速为1.0 ml·min^(-1),温度为25℃;电化学检测器电压为0.6 V,电流为100 nA,频率为0.05 Hz。结果:去甲肾上腺素在0.1～25μmol·L^(-1)范围内线性关系良好,日内、日间RSD分别小于7.81%和3.61%,回收率为75.05%,测得小鼠脑内去甲肾上腺素含量为(8.94±0.71)μg·g^(-1)。结论:该方法快速、准确。
- 石亮郭延垒张有金王二豪李文娟于超
- 关键词：高效液相色谱-电化学法小鼠脑组织去甲肾上腺素
- 大鼠肝微粒体法评价20种中药有效成分对CYP2C9酶的作用被引量：4
- 2013年
- 目的建立体外大鼠肝微粒体中CYP2C9酶活性测定方法,并以此方法评价20种中药有效成分单体对大鼠CYP2C9酶的作用。方法以双氯芬酸(Diclofenac)为探针,在实验组大鼠肝微粒体孵育体系中加入20种中药有效成分单体,在37℃水浴温孵15 min后冰乙腈终止反应,HPLC测定各孵育体系中探针药物的代谢产物4'-羟基双氯芬酸的转化率,并与对照组比较其差异来评价各有效成分对CYP2C9酶活性的作用。结果 4'-羟基双氯芬酸、双氯芬酸及其内标香豆素三者分离良好且无其他内源性物质干扰;动力学考察表明双氯芬酸在0.25 mg/mL的大鼠肝微粒体体系中孵育15 min,测得酶动力学参数V max为0.145 6 nmol/(min·mg),K m为8.270μmol/L;抑制实验考察发现:黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇实验组中4'-羟基双氯芬酸转化率分别为(402.60±10.58)、(210.90±10.26)、(414.46±10.32)、(509.83±26.45)、(355.44±15.87)、(387.34±22.16)pmol/(min·mg),显著低于对照组[(735.80±17.27)pmol/(min·mg),P<0.05],其他中药成分实验组与对照组比较,其转化率无统计学差异。结论建立了中药有效成分对CYP2C9酶作用的体外大鼠肝微粒体研究方法,并初步评价了黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇对CYP2C9具有抑制作用,在临床联合用药中需注意其可能引起的药物-药物相互作用。
- 张远冬刘学庆郭延垒张有金石亮王二豪于超
- 关键词：大鼠肝微粒体CYP2C9中药有效成分
- 没食子酸及其氧化产物对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制效应被引量：8
- 2014年
- 目的体外研究没食子酸对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制效应。方法将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体及探针底物在37℃下孵育,用高效液相色谱-紫外法测定探针底物的代谢产物生成率,计算IC50值。在NADPH存在或不存在时,将没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0、15、30 min后继续孵育15 min,测定探针底物的代谢产物生成率,观察没食子酸对CYP3A抑制的时间依赖性。在无NADPH存在时,将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0、30 min后继续孵育15 min,测定探针底物的代谢产物生成率,计算出两实验组IC50平移值(IC50shift)。观察2.5 h内没食子酸在紫外-可见光光谱下的变化。在无NADPH存在时,将抗氧剂与没食子酸及鼠肝微粒体在37℃下共同预孵育,观察抗氧剂谷胱甘肽和维生素C的加入对没食子酸抑制强度的影响。结果没食子酸对CYP3A表现出浓度依赖性抑制(P<0.05),IC50为130.2μg/mL。预孵育无NADPH存在时,没食子酸对CYP3A表现出时间依赖性抑制(P<0.05),且抑制强度远大于NADPH存在的实验组。在无NADPH存在时,没食子酸与鼠肝微粒体在37℃下分别预孵育0 min和30 min,两实验组间的IC50平移值达11.9。紫外-可见光全波长扫描观察显示,没食子酸在孵育过程中生成了2种反应产物。抗氧剂的加入能显著降低没食子酸对CYP3A的抑制能力(P<0.05)。结论没食子酸对CYP3A的活性表现出较强的不可逆性抑制,具有诱导药物-药物相互作用的风险。
- 石亮张远冬王二豪惠俊敏郭延垒于超
- 关键词：没食子酸肝微粒体CYP3A
