程琳玲
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：上海第二医科大学基础医学院上海市免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2003年
- 目的:获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术从睾丸中获得cML66的cDNA,亚克隆至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE、Westernblot鉴定后,应用纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列 一致。用纯化的目的蛋白免疫家兔后,获得高滴度的特异性兔抗血清。结论:成功地克隆CML66基因,建立了原核表达、纯化体系。制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清。
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍葛海良
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- CD40-CD40L功能与疾病的研究进展被引量：2
- 2002年
- CD40与CD40L的相互作用不仅在细胞免疫和 体液免疫中起作用,而且在疾病的发病机制和临床治疗中起重要作用。
- 程琳玲
- 关键词：CD40-CD40L疾病
- 正常人及肿瘤病人血清中CML66抗体水平的研究
- CML66是通过重组cDNA表达文库血清分析技术(SEREX)从慢性粒细胞白血病病人中筛选出来的一种新的肿瘤抗原,在各种肿瘤组织及肿瘤细胞株中都高表达,具有广泛的免疫原性。在筛选卵巢癌文库的工作中,我们发现病人中也有较高...
- 程琳玲尤强王颖王树军张惠珍葛海良
- 正常人及肿瘤病人血清中CML66蛋白抗体水平被引量：1
- 2003年
- 程琳玲尤强王颖王树军张惠珍葛海良
- 关键词：正常人肿瘤病人血清抗体水平
- 人sCD40L基因的克隆及表达被引量：2
- 2002年
- 目的 克隆人ｓＣＤ４０Ｌ基因片段，并在原核细胞中表达。方法用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从激活的人外周血淋巴细胞总ＲＮＡ中，扩增ＣＤ４０Ｌ胞外区ｃＤＮＡ，并克隆至载体ｐＧＥＭ－Ｔ。测序验证后，转至载体ＰＱＥ３１中，并在大肠杆菌Ｍ１５中进行表达，最后通过亲和层析柱得到纯化蛋白。结果纯化所得的产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实，确为人ｓＣＤ４０Ｌ蛋白。结论 应用基因重组法构建了人ｓＣＤ４０Ｌ基因片段，并在原核细胞内成功地进行了表达，为今后进一步研究ＣＤ４０Ｌ与凋亡、疾病的发病机制及临床治疗奠定了基础。
- 程琳玲聂红王利尤强路丽明沈佰华张冬青李宁丽
- 关键词：CD40L胞外区RT-PCRWESTERNBLOT基因克隆
- 类风湿关节炎患者外周血与病变部位自身反应性T细胞的免疫学特征被引量：9
- 2004年
- 目的研究类风湿关节炎(RA)外周血与病变部位自身反应性T细胞亚群的差异性。方法分析了35例RA患者滑膜液中与外周血T细胞的免疫表型、表面活化标志、Ⅱ型胶原和热休克蛋白70(HSP70)的反应频率与V茁的限制性取用。用流式细胞术分别测定滑膜液和外周血淋巴细胞表型和活化标志;采用标准3H-TdR掺入法分析了关节滑膜液中浸润的淋巴细胞对Ⅱ型胶原(CⅡ)和HSP70的反应频率,用半定量聚合酶链反应(PCR)检测了RA患者的V茁的限制性取用。结果滑膜液中CD4+T细胞与外周血中CD4+T细胞百分比相同,分别为40.0%和41.0%,滑膜液中CD8+T细胞比例升高,CD4/CD8细胞比值显著低于外周血。同时滑膜液中表达CD3和CD25的活化T细胞占(16±6)%,比外周血高。这群CD3/CD25双阳性T细胞对CⅡ和HSP70的反应频率增高。虽然外周血和滑膜液中T细胞受体均以琢茁TCR为主(70±16)%。但是进一步用流式细胞术分型检测其BV亚家族的取用特征,发现滑膜液中T细胞受体表现出限制性取用V茁14、16和17。结论在RA滑膜液中T细胞亚群明显不同于外周血;表现为活化细胞增多,对自身抗原的反应频率增高及T细胞受体的限制性取用。
- 沈佰华王利张继英聂红余奇文陈广洁程琳玲柏峻李宁丽张冬青冯国璋戴号夏青胡冬仪许荣倪立清
- 关键词：类风湿关节炎外周血病变部位免疫学特征免疫表型
- CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
- CML66是新近发现的一种具有免疫原性的肿瘤抗原,分子量为66KD,位于人8号染色体,它广泛表达于各种肿瘤组织及细胞株,除睾丸外,在正常组织中无表达。目前对于其蛋白的生物学功能和免疫学特性还仍未知。本文着重报道该基因克隆...
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍葛海良周光炎
- 一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用被引量：5
- 2004年
- 目的 制备原核表达的OVA12纯化蛋白 ,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异。方法 克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中 ,经测序确证后 ,将该基因插入原核表达载体pET32a( +)中 ,并转化至E .coli表达菌BL2 1(DE3)中 ,诱导 6×His融合蛋白表达 ,经Ni2 + 亲和层析及胶回收技术纯化蛋白 ,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体 ;采用ELISA、Dotblot、Westernblot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异。结果 获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清 ;ELISA法测定显示 ,正常人组OD均值为 0 17± 0 0 7,肿瘤患者组OD均值为0 32± 0 15 ,两组之间有显著性差异 (P <0 0 0 0 1) ,并选择其中样本经Westernblot、Dotblot加以进一步证实。结论 成功克隆OVA12基因 ,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清 ;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异 ,为临床检测的应用奠定基础。
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍沈天伟葛海良
- 关键词：抗体制备多克隆抗体ELISA原核表达
