蔺利娟
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鹌鹑β- 防御素10基因的克隆与表达及其体内分布的检测被引量：3
- 2011年
- 为测定鹌鹑β-防御素10(AvBD10)体外抗菌活性及检测其在鹌鹑脏器组织的分布,本研究应用RT-PCR方法从鹌鹑肺脏组织中扩增到鹌鹑AvBD10,经序列同源性分析,鹌鹑AvBD10与鸡AvBD10的氨基酸序列同源性最高(83.8%)。将该基因亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中进行原核表达,SDS-PAGE电泳表明,鹌鹑AvBD10重组蛋白分子量约为31ku。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性,结果显示,鹌鹑AvBD10重组蛋白具有广谱的抗菌活性。采用定量RT-PCR法检测到AvBD10在鹌鹑脏器组织中广泛表达。
- 蔺利娟王瑞琴韩宗玺邵昱昊刘胜旺程宝晶孙黎李子瑞马得莹
- 关键词：鹌鹑重组蛋白抗菌活性
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析...
- 张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白生物学作用
- 鹅β-防御素基因克隆与生物学特性的初步分析被引量：8
- 2011年
- 本试验采用RT-PCR方法,从鹅的骨髓细胞中扩增到禽β-防御素(AvBD)基因。测序结果表明,该基因的cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸。经遗传进化分析发现,该基因推导的氨基酸序列与鸡AvBD5的同源性最高,达84.8%。因此,将其命名为鹅AvBD5。进一步将该基因定向插入到pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建pGEX-AvBD 5重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL 21,于37℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达情况。结果表明,重组鹅AvBD 5融合蛋白的分子量约为32 ku,重组蛋白以包涵体形式存在。采用菌落计数法进行抗菌活性测定,结果表明,重组鹅AvBD 5有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较强抗菌作用。此外,该蛋白对温度和pH有较高的稳定性。
- 周财源蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用被引量：4
- 2011年
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基,分别在分子内形成Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6共3对二硫键,与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97%。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 kD,具有良好的抗菌活性,对11种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外,该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。
- 张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析被引量：3
- 2011年
- 本研究旨在克隆与表达鸭β-防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171bp,编码56个氨基酸。经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高,达73.2%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD4。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃进行诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32ku,与预期大小一致。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。在高盐离子条件下,重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用。此外,该重组蛋白的溶血活性极低。运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限,仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达。
- 蔺利娟韩宗玺邵昱昊张可心刘胜旺李子瑞马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
