钟志霞
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 重组人β-防御素的表达和纯化研究
- 人防御素(Humandefensins)属于抗菌肽家族，是人体内源免疫系统的重要组成部分。人防御素具有广泛的抗菌谱，而且致病微生物不易对它产生耐药性，因此有很好的药用前景。本文建立在实验室关于人β防御素2的成果基础上，考...
- 钟志霞
- 关键词：抗菌肽分离纯化抑菌活性
- 文献传递
- 人β-防御素2在大肠杆菌中的高效表达和纯化被引量：7
- 2006年
- 目的:研究具有生物学活性的人防御素2(HBD 2)多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法:PCR扩增不含前导序列的HBD 2成熟肽的编码框全长的cDNA片段(smHBD 2-cDNA),利用B g lⅡ和B amHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD 2-cDNA的克隆载体,利用N colⅠ和H indⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET 32-nsmHBD 2-cDNA,在大肠杆菌中BL 21(DE 3)中诱导表达含HBD 2的融合蛋白,SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD 2多肽。采用液体培养法,测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果:构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD 2-cDNA表达载体,1、2和4倍smHBD 2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52%、48%和31%;而8倍HBD 2-cDNA几乎不含可溶蛋白,目标蛋白以包含体形式表达,集中在不可溶部分。重组HBD 2对E.coli K 12 D 31有较强的抑制作用,在终浓度约为0.4至0.5μg/m l时,90%细胞的生长被抑制。结论:采用融合表达、多拷贝串联表达方式,可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用,也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性;适当的多拷贝串联基因可以提高HBD 2的产量,但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量,且易形成不溶蛋白;在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD 2多肽的原核高效表达。
- 钟志霞阮红范立梅彭力方向明徐志南
- 关键词：Β-防御素抗菌肽
