陈渤江
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2016年
- 目的构建shAk2基因慢病毒表达载体,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,建立靶向沉默Akt2的非小细胞肺癌稳定细胞株,并探讨Akt2基因在非小细胞肺癌中的作用。方法根据shRNA干扰序列设计原则,设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pLKD.CMV.GFP.U6质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,抽提重组质粒及辅助包装元件载体质粒p-Helper1.0和p-Helper2.0,通过阳离子脂质体lipofectemin2000介导细胞转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞H292,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,应用Western-blot验证干扰效果。CCK-8比色法检测细胞增殖,Annexin V.FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2蛋白水平减少90.89%,提示靶向抑制Akt2的慢病毒shRNA表达载体构建成功,并获得稳定抑制Akt2基因表达的细胞克隆。CCK-8法检测细胞增殖能力,shAkt2组细胞在48h,72h,96h及120h的吸光度值明显减低(P<0.05),干扰Akt2基因表达后显著抑制细胞增殖速率。采用Annexin-V/7-AAD流式细胞分析法检测各组中凋亡细胞的比例,shAkt2组凋亡率显著高于NC及NSCLC组(P<0.05)。结论靶向干扰Akt2基因表达可抑制肺腺癌细胞株H292细胞的增殖能力,促进其凋亡。
- 蒋莉刘丹李为民陈渤江
- 关键词：非小细胞肺癌细胞增殖凋亡
- 甘露聚糖肽治疗老年慢性阻塞性肺疾病稳定期疗效评价被引量：3
- 2015年
- 目的观察甘露聚糖肽胶囊用于老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期的临床效果。方法将156例住院患者随机均分为试验组和对照组,各78例。在给予吸氧、平喘、解痉、抗感染(必要时)等常规治疗基础上,试验组给予甘露聚糖肽胶囊,对照组给予泛福舒,治疗后随访6个月。结果试验组COPD急性发作次数、发作持续天数均减少,但组间无显著性差异(P>0.05)。治疗结束后,两组患者症状积分较治疗前均有改善(P<0.05),试验组改善更显著(P<0.01);治疗结束后,两组患者第1秒用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占预计值百分比(FEV1%)均得到改善(P<0.05),且试验组FEV1显著改善(P<0.01)。试验组CD4+,CD4+/CD8+,Ig A及补体C3水平较治疗前均显著提高(P<0.05),CD8+显著降低(P<0.05);对照组Ig A明显升高(P<0.05),CD4+,CD4+/CD8+及补体C3均较治疗前有所上升(P>0.05),CD8+无明显变化(P>0.05);组间比较,治疗后试验组CD4+,CD4+/CD8+及补体C3较对照组升高(P<0.05),CD8+显著降低(P<0.05);两组Ig A含量均升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论甘露聚糖肽胶囊能全面提高COPD患者的免疫功能,改善临床症状和肺功能。
- 陈红李为民陈渤江李小惠刘扬渝
- 关键词：甘露聚糖肽泛福舒慢性阻塞性肺疾病稳定期
- AKT2及磷酸化AKT2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义被引量：10
- 2010年
- 目的研究AKT2及磷酸化AKT2(p-AKT2)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测137例非小细胞肺癌组织中AKT2和p-AKT2表达,分析AKT2及p-AKT2表达与肺癌预后的关系。结果非小细胞肺癌组织中AKT2在腺癌及鳞癌组织中的阳性表达率分别为60.5%和54.1%,差异无统计学意义(P>0.05);p-AKT2在腺癌及鳞癌组织中的阳性表达率分别为68.4%和47.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,本研究发现AKT2和p-AKT2的表达在患者的年龄、性别、肿瘤TNM分期及细胞分化程度等方面差异无统计学意义(P>0.05)。生存分析显示,AKT2表达阳性的NSCLC患者5年生存率及中位生存时间与阴性表达者比较差异无统计学意义〔36%vs.30%,(33.960±2.485)月vs.(31.338±2.868)月,P>0.05〕;而p-AKT2表达阳性的患者5年生存率及中位生存时间与阴性表达者比较差异有统计学意义〔20%vs.56%,(28.464±2.235)月vs.(39.214±3.075)月,P<0.05〕。进一步分层分析发现,Ⅰ期NSCLC患者中,AKT2表达阳性者5年中位生存时间与阴性表达者比较差异无统计学意义〔(34.778±4.469)月vs.(40.133±5.632)月,P>0.05〕;而p-AKT2表达阳性的NSCLC患者5年中位生存时间与阴性表达者比较差异有统计学意义〔(29.808±4.337)月vs.(47.875±4.852)月,P<0.05〕。结论 p-AKT2在肺腺癌中的表达高于肺鳞癌,且p-AKT2的阳性表达缩短了NSCLC患者的5年中位生存时间。
- 蒲蓉李为民刘丹莫显明唐颖刘伦旭陈渤江
- 关键词：AKT2非小细胞肺癌
- Akt2-Bad信号通路参与NSCLC凋亡被引量：2
- 2021年
- 目的探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡中的作用机制。方法构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC-A1、H460及SK-MES-1细胞为NSCLC组,阴性对照病毒转染NSCLC细胞为NC组;稳定干扰Akt2的NSCLC细胞为shAkt2组;稳定过表达Bad的NSCLC细胞为Bad组;稳定干扰Akt2表达的同时稳定过表达Bad基因的NSCLC细胞为shAkt2+Bad组。通过体外实验,观察共感染组细胞凋亡及侵袭能力的变化。应用Western-blot技术检测各组NSCLC细胞株Bad、Akt2以及凋亡相关信号蛋白BCL-2、BCL-XL、caspase-9、Cyto-c蛋白的表达水平。体内构建H1299及SPC-A1荷瘤裸鼠模型,观测瘤体重量,利用TUNEL染色比较Akt2/Bad信号通路对肺癌细胞凋亡的作用。结果与NSCLC组比较,shAkt2+Bad组细胞和移植瘤体中Akt2蛋白水平明显减少(P<0.05),Bad蛋白水平显著增加(P<0.05)。shAkt2+Bad组细胞凋亡率明显高于shAkt2组及Bad组(P<0.05),H1299/SPC-A1体内荷瘤实验表明,shAkt2+Bad组瘤体重量明显低于Bad组、NSCLC组及NC组(均P<0.05),细胞凋亡率均高于其他3组(均P<0.05)。shAkt2和shAkt2+Bad组caspase-9表达显著降低;Bad组、shAkt2组和shAkt2+Bad组cyto-C表达显著增加,而BCL-2、BCL-XL在各组细胞中表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Akt2-Bad信号通路参与NSCLC的凋亡。
- 蒋莉何芳刘丹刘丹李为民
- 关键词：AKT2BAD慢病毒载体凋亡
