高玉龙
- 作品数：305 被引量：763H指数：12
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家肉鸡产业技术体系建设专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 鸡传染性贫血病毒VP2基因的表达及其免疫活性分析被引量：4
- 2006年
- 利用特异性引物从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到VP2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28-VP2。将pET-28-VP2转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约31kDa的目的蛋白以可溶性形式表达于上清中。Western blot分析发现,表达产物与鸡传染性贫血的阳性血清发生特异性反应。纯化蛋白免疫小鼠后制得的多抗可以与全病毒发生反应,证明其具有免疫原性,为进一步研究VP2蛋白的功能及开展CIAV疫苗及诊断试剂的研制奠定了基础。
- 王晓艳王笑梅高玉龙高宏雷陆桂丽
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP2基因克隆
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP5缺失标记疫苗的生物学特性研究被引量：2
- 2014年
- 为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复制滴度明显低于亲本病毒(p<0.05)。动物实验结果表明,该缺失病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答反应,免疫后10 d,其抗体水平与亲本病毒相当;并能够抵抗同源或异源超强毒的攻击,为免疫鸡提供100%保护。此外,该缺失病毒对免疫鸡无明显的致病性;VP5缺失病毒免疫组与未免疫组禽流感血凝抑制效价相当,不存在明显差异(p>0.05),表明该病毒对免疫鸡无免疫抑制作用,不影响其它疫苗的免疫效果。而且,VP5的缺失可以作为鉴定该缺失病毒的生物学标记。以上结果表明,rHLJ0504HT△VP5是一株安全有效的IBDV标记候选疫苗株。
- 高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒标记疫苗
- 鸡传染性法氏囊病病毒的反向遗传研究被引量：3
- 2006年
- 祁小乐王笑梅高宏雷高玉龙
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒免疫抑制性传染病超强毒株VIRUS变异株接触性
- 鸡传染性法氏囊病病毒重组弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了鸡传染性法氏囊病病毒重组弱毒疫苗株及其应用。本发明克隆了流行超强毒株HLJ-0504的主要保护性抗原基因VP2，将其核苷酸进行突变修饰，然后将其替换IBDV弱毒株Gt基因组的相应区段，构建IBDV重组基因组的...
- 王笑梅祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷王永强高立
- 中国部分地区传染性法氏囊病病毒分子流病学调查被引量：15
- 2009年
- 为调查我国鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的流行情况,从我国11个省(市、自治区)采集法氏囊病料,分离鉴定鸡传染性法氏囊病病毒20株,运用RT-PCR方法对分离株的VP2基因进行扩增、测序和序列分析。研究表明,20株分离毒株中有19株具有IBDV超强毒株的分子特征,即222A、256I、294I和299S,与我国IBDV超强毒Gx株的核苷酸同源率在96.7%～99.4%,推导氨基酸同源率在98.2%～100%。遗传进化分析表明,所有分离毒株具有共同的祖先。
- 宇文延青高玉龙高宏雷祁小乐杨金雨王晓燕秦立廷林欢李俊山刘伟李铁强邓小芸王笑梅
- 关键词：分子流行病学超强毒株
- 抗鸡IBDV Gt株单克隆抗体制备及抗原表位初步分析
- 鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)属于双RNA病毒科(Birnaviridae), 禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组包括A、B两个节段...
- 程宇王笑梅高玉龙高宏雷付朝阳简子健
- 关键词：抗原表位
- 文献传递
- 血清Ⅱ型鸡马立克氏病毒的分离鉴定及SW14分离株pp24基因的序列分析被引量：2
- 2023年
- 为了解鸡马立克氏病毒(MDV)在我国鸡群中的流行情况,本研究于2021年从福建省已免疫鸡马立克氏病(MD)疫苗鸡群且发生疑似MD病例的鸡场采集21份疑似发病蛋鸡外周血,分离其淋巴细胞接种鸡胚成纤维细胞(CEF),5 d后收集病毒,盲传1~2代后获得21株能够形成典型MDV蚀斑的分离株,依次命名SW1~SW21,采用PCR分别扩增MDV血清Ⅰ型(MDV-1) Meq基因、Ⅱ型(MDV-2) ORF873基因、Ⅲ型(MDV-3) US3基因进行MDV分型鉴定,扩增鸡传染性贫血病毒(CAV) VP3基因、禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) LTR基因、禽白血病病毒A亚群(ALV-A)、B亚群(ALV-B)、J亚群(ALV-J)的env基因进行外源病毒检测,结果显示MDV-1均为阴性,MDV-2均为阳性,MDV-3阳性率为38.1%(8/21),未检测到外源病毒基因。在MDV-2分离株中选择SW14株进行pp24基因的PCR扩增,测序后与MDV-2参考株SB-1、301B/1、HPRS24的pp24基因进行基因序列比对分析,结果显示,SW14和SB-1株同源性(96.3%)最高。通过透射电镜观察SW14,可见分离株呈双环型,直径约110 nm,符合MDV病毒粒子形态特征。本研究证实该鸡场中存在MDV-2流行,可能会影响疫苗的免疫效果,但其致病性有待进一步研究。本研究从疑似发病蛋鸡中分离到新的MDV-2株,为我国MDV-2的研究提供重要参考依据,同时为我国MD疫情防控提供有价值的研究材料。
- 林雨萌胡明雪刘长军葛成菲郭榕容李凯崔红玉高立祁小乐王素艳王笑梅高玉龙张艳萍
- 表达传染性法氏囊病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，属于医学或兽医学技术领域。本发明利用重组克隆技术，将包含传染性法氏囊病毒VP2基因和CAG启动子序列的基因片段CAG-VP2插...
- 王笑梅李凯刘长军张艳萍崔红玉祁小乐高立高玉龙王永强高宏雷
- 文献传递
- 禽白血病病毒对禽流感疫苗免疫效果的影响被引量：1
- 2016年
- 为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫对照鸡同时检测血清HI抗体并采用H5N1亚型高致病性AIV攻毒。结果显示:实验鸡感染ALV后HI抗体滴度均显著低于相应的未感染ALV的免疫对照组(p<0.05)。感染ALV后,免疫Re-8灭活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为4/10和0/10,存活率分别为90%和100%;感染ALV后,免疫r LH5-8活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为10/10和0/10,存活率分别为0和100%;未感染ALV的AI免疫鸡均不发病、不死亡、不排毒;空白对照鸡攻毒后3 d内全部死亡并且排毒。本研究表明,ALV对AI灭活疫苗和活疫苗均具有显著免疫抑制作用,建议加强种鸡ALV的净化,降低对AI等疫苗免疫效果的影响。
- 李鑫曾显营高玉龙白洁石文军陈化兰田国彬
- 关键词：禽白血病禽流感疫苗免疫效果
- 新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因遗传进化分析被引量：11
- 2020年
- 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)病,是一种以肝脾不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病。为研究某养鸭企业不同年份分离的NDRV病株的生物学特性,本研究将2019年从25份樱桃谷鸭脏器组织中分离的3株病毒以及2016年和2017年分离的2株病毒同时进行了生物学特性比较研究。RT-PCR及基因测序结果表明,该5株分离病毒均为NDRV,且纯净性良好。体外复制研究表明,该5株分离病毒均能100%致死鸡胚,且在Vero细胞中增殖良好;除2017年的分离株外,其余4株分离病毒均能在CEF中产生明显的细胞病变。σC基因同源性及遗传进化分析显示,5株NDRV分离株与其它NDRV病毒株之间具有较高的同源性(90.0%~98.2%),而与番鸭呼肠孤病毒(MDRV)同源性较低(29.6%~46.1%),再次证明5株分离病毒均为NDRV,但2017年分离株NDRV-SD19/6202与其余4株病毒的遗传距离稍远。σC基因编码氨基酸序列分析结果显示,以CEF适应病毒为代表的NDRV-SD19/6201株与CEF非适应病毒NDRV-SD19/6202株之间存在13个氨基酸差异位点,但这些差异位点是否是引起两株病毒复制特性差异的关键氨基酸还需要进一步研究。综上,本研究结果表明来源于同一养殖企业不同年份分离的NDRV病毒株之间生物学特性存在一定差异,提示持续开展该病流行病学调查的必要性,同时为了解NDRV的遗传进化特征和基因变异情况提供参考。
- 罗丹高立孟照洁高玉龙李凯祁小乐刘长军崔红玉王笑梅
- 关键词：新型鸭呼肠孤病毒遗传进化
