高雪静
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究被引量：9
- 2012年
- 目的研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础。方法采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达。结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成。结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态。
- 唐莎张莹施维维尹世伟李芙蓉王莉邹丽云倪兵谢京高雪静吴玉章张静波
- 关键词：中性粒细胞NADPH氧化酶系统性小血管炎
- 分子伴侣性自噬参与LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成被引量：9
- 2015年
- 目的探讨分子伴侣性自噬在LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网(NETs)形成的作用及机制。方法采用PolymorphprepTM方法分离健康志愿者和抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)患者外周静脉血中的中性粒细胞,直接离体或LAMP-2抗体刺激健康人外周血中性粒细胞,通过自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和放线菌酮(CHX)进行干预,免疫荧光观测NETs的形成,免疫荧光法和免疫印迹法检测分子伴侣自噬相关蛋白LAMP-2A、Hsc70的表达。结果与正常中性粒细胞组相比,AAV患者中性粒细胞LAMP-2A表达增加(P=0.002 3);LAMP-2抗体可诱导中性粒细胞LAMP-2A、Hsc70蛋白表达明显上调(P<0.01),CHX能明显降低LAMP-2抗体引起的LAMP-2A、Hsc70蛋白表达(P<0.000 1);与3-MA组相比,CHX组能明显减少LAMP-2抗体诱导的NETs形成(P<0.000 1)。结论 LAMP-2抗体可诱导人中性粒细胞分子伴侣性自噬增强及NETs形成,放线菌酮可抑制此过程,提示分子伴侣性自噬可能参与了NETs的形成。
- 黄鑫高雪静王渊张莹唐莎邹丽云王莉张静波
- 关键词：自噬抗中性粒细胞胞浆抗体血管炎
- 血管紧张素II对足细胞自噬的影响及机制研究
- 高雪静
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- 血管紧张素Ⅱ对足细胞自噬的影响及机制研究
- 研究背景与目的: 足细胞(podocyte)作为一种终末高度分化细胞,是维持肾小球滤过屏障(glomerular filtration barrier,GFB)的最关键部分,对防止血浆白蛋白和大分子蛋白的滤过起重要作用...
- 高雪静
- 关键词：肾脏疾病足细胞血管紧张素II生物学效应
- 文献传递
- 琼脂糖明胶皮下埋植法富集、分离具有自发NETs倾向的小鼠中性粒细胞
- 2016年
- 目的建立小鼠中性粒细胞富集、分离的方法,为进一步探讨中性粒细胞及中性粒细胞胞外捕网（NETs）的免疫损伤效应奠定基础。方法制备2%琼脂糖0.2%明胶块,埋植于健康6-8周龄C57雌性小鼠皮下富集中性粒细胞,96 h后取出明胶块置于PBS中进行游离释放,收集细胞。荧光染色进行细胞形态学观察,采用Gr-1及CD11b进行流式细胞分析鉴定。结果不同表面积的明胶能够分离出106-107数量级细胞,具有中性粒细胞典型的分叶核形态学特征,流式细胞分析鉴定为Gr-1＋CD11b＋的中性粒细胞,纯度可达95.7%,并观察到典型NETs形成,其数量随分离时间的延长而增加。结论通过皮下埋植琼脂糖明胶成功富集、分离大量高纯度且具有自发NETs倾向小鼠中性粒细胞。
- 王卫黎蔡娟谢丽娇王渊黄鑫高雪静唐莎张莹王莉邹丽云张静波
- 关键词：中性粒细胞细胞分离天然免疫
- ANCA诱导中性粒细胞释放正五聚素蛋白3
- 2014年
- 目的:研究正五聚素蛋白3(PTX3)在中性粒细胞的表达及释放情况,为进一步探讨PTX3在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性小血管炎(AAV)中的作用及机制奠定基础。方法:采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心分离健康志愿者和AAV患者外周静脉血中性粒细胞,通过健康人血清、AAV患者血清、TNF-α和溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)抗体分别刺激健康人外周血中性粒细胞,ELISA检测培养上清PTX3水平,免疫荧光观察中性粒细胞胞外捕网(NETs)的形成,激光共聚焦显微镜检测可溶性识别受体PTX3的表达。结果:LAMP-2抗体及AAV患者血清均能促进中性粒细胞PTX3的释放。与正常中性粒细胞对照组相比,LAMP-2抗体刺激组中性粒细胞上清PTX3水平明显升高(P<0.01);AAV患者血清刺激组中性粒细胞中PTX3表达的荧光强度显著高于用健康人血清刺激的对照组(P<0.01),进一步通过激光共聚焦显微镜进行形态学观察,发现PTX3由中性粒细胞通过NETs形成释放。结论:PTX3可由ANCA诱导的NETs释放至胞外,参与血管炎的病理生理过程。
- 谢京唐莎张莹尹仕伟高雪静施维维王莉邹丽云吴玉章张静波
- 关键词：中性粒细胞抗中性粒细胞胞浆抗体血管炎
- FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的可能机制。方法采用纯化的大肠杆菌FimH1-156融合蛋白（150μg）联合Titermax金佐剂（150μl）皮下注射免疫Wistar—Kyoto（WKY）大鼠，对照组采用PBS（150μl）联合Titermax金佐剂（150μl）。监测各时间点（0、3、7、14、21、28、35、50d）大鼠24h尿蛋白量（mg）的变化，于免疫后21d、35d和50d处死大鼠，检测大鼠血清BUN、Scr、尿酸（UA）水平，观察肾、肺组织病理变化，ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-17A水平。结果（1）模型组大鼠24h尿蛋白量在免疫后第3天开始升高，第7、35、50天时显著高于对照组[（8．59±1．25）mg比（3．08±1．08）mg、（10．33±1．10）mg比（6．40±0．61）mg、（12．45±1．73）mg比（5．93±0．83）mg，均P〈0．05]。（2）免疫后50d，模型组大鼠血清BUN、Scr、UA水平均显著高于对照组[（6．76±0．20）mmol／L比（5．82±0．13）mmol／L、（58．00±1．53）μmol／L比（25．67±1．45）μmol／L、（61．67±7．27）μmol／L比（31．33±2．73）μmol／L，均P〈0．05]。（3）免疫后35d，肾脏组织显示局灶坏死，肺泡壁增厚、部分断裂及炎性细胞浸润，免疫后50d肾小球新月体形成。（4）免疫WKY大鼠35、50d后，模型组血清IL-17A水平均显著高于对照组[（46．97±5．00）ng／L比（11．27±2．67）ng／L、（41．95±5．51）ng／L比（16.31±1．64）ng／L，均P〈0．05]。（5）线性回归分析显示模型组大鼠血清IL-17A与24h尿蛋白量呈正相关（r=0．557，P=0．021）。结论细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤及肺损伤，IL-17A参与了FimH融合蛋白诱导的大鼠肺、肾损伤过程。
- 尹仕伟张莹唐莎邹丽云高雪静张晋宇吴玉章张静波
- 关键词：血管炎白细胞介素-17
- 法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞自噬的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人足细胞（AB 8/13）自噬的影响. 方法：体外培养人足细胞株,采用不同浓度的AngⅡ（10-8～10-6 mol/L）刺激人足细胞24h和固定浓度AngⅡ（10-7moVL）刺激不同时间（0h、6h、12h、24h、36h）,以及特异性自噬阻断剂3-MA（5 mmol/L）和不同浓度（10-8～1O-6mol/L）法舒地尔进行干预.免疫荧光法和Westem印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）、Beclin-1]的表达变化. 结果：AngⅡ可刺激足细胞LC3B、Beclin-1蛋白表达上调,且呈剂量、时间依赖性（P＜0.05）,在浓度10-7mol/L AngⅡ和时间24h时达高峰.3-甲基腺嘌呤（3-MA）能明显降低AngⅡ引起的LC3B蛋白表达（P＜0.01）.法舒地尔本身对足细胞自噬没有影响,但可以明显下调AngⅡ诱导的足细胞LC3B和Beclin-1蛋白表达（P＜0.05）,10-7mol/L时效果最明显. 结论：AngⅡ可诱导人足细胞自噬增强,3-MA和法舒地尔均可抑制此过程的发生,提示Rho激酶途径可能参与了AngⅡ诱导的足细胞自噬过程.
- 高雪静唐莎尹仕伟张莹谢京施维维王莉邹丽云牟芝蓉张静波
- 关键词：自噬RHO激酶足细胞ANGIOTENSIN
- 正五聚素蛋白-3在抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎患者中的意义被引量：5
- 2014年
- 目的探讨人血清正五聚素蛋白-3(PTX3)在抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎(AAV)患者血清中的水平及意义。方法收集AAV患者血清,用酶联免疫吸附试验法检测PTX3和C反应蛋白(CRP)水平,对PTX3水平与血清学指标进行相关性分析。评估PTX3与CRP、ESR水平及AAV活动指数的相关性。结果①活动期患者血清PTX3水平显著高于缓解期,也显著高于健康对照组和系统性红斑狼疮组;②患者PTX3水平与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.432 9,P<0.05);而CRP,ESR均与24 h尿蛋白定量无相关性(r=-0.099 3,0.126 2,均P>0.05);与中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值、补体C3、血肌酐及eGFR(r=-0.148 6,0.247 4,0.069 1,-0.149 5,0.179 0,均P>0.05)均不相关。PTX3与CRP水平均与伯明翰血管炎活动性评分(BVAS)呈正相关(r=0.380 7,0.371 2,均P<0.05);③受试者工作特征曲线(receiver operator chariacteristic,ROC曲线)显示血清PTX3区分活动期与缓解期AAV的准确度高于CRP及ESR。结论 PTX3在活动期AAV患者血清中显著地升高,可能成为新的AAV活动性的急性反应蛋白。
- 谢京唐莎张莹尹世伟高雪静施维维王莉邹丽云倪兵吴玉章张静波
- 关键词：C-反应蛋白红细胞沉降率ANCA相关性小血管炎生物学标志物
