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表达乙型肝炎病毒抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型的建立: 2012年; 目的构建持续稳定表达乙型肝炎病毒（HBV）抗原的肿瘤细胞，建立持续表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型。方法以含有2倍体HBV的逆转录病毒载体质粒转染黑色素瘤细胞系B16，获得稳定表达HBV表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBcAg）的B16细胞（B16／HBV），分别按每只小鼠100、1000和5000个细胞接种到具有相同遗传背景的C57BL／6J小鼠肝脏被膜下，每组5只小鼠。注射后每周采血，进行血清HBsAg、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）检测。采用小鼠腹部超声观测其成瘤情况，计算存活时间。对死亡小鼠肝脏进行病理分析，并检测肿瘤组织中HBsAg和HBcAg的表达。结果转染HBV病毒的肿瘤细胞B16／HBV传代20次以上后，细胞上清中有持续稳定的分泌型HBsAg表达，2×10^4个细胞在24h内的HBsAg表达量可达到110ng，并随时间延长而逐渐累积。未能检测到细胞上清中有HBeAg的表达。免疫组化结果显示，转染细胞中存在稳定的HBcAg表达，主要分布在细胞核中。每只小鼠注射100个B16／HBV细胞，小鼠肝脏成瘤率为80．0％；注射1000和5000个B16／HBV细胞，成瘤率为100％。注射后第4周，注射1000个B16／HBV细胞小鼠的腹部超声检测结果提示，肝脏内有异常回声，不均质回声面积为62．18min2。剖腹检查显示，在肝脏中所形成的肿瘤大体呈圆形，血运丰富，瘤组织质软，并有多个转移灶。在成瘤小鼠血清中，可检测到持续表达的HBsAg和抗HBs；所形成的肿瘤组织细胞中有均匀一致的HBsAg和HBcAg表达。结论HBV逆转录病毒载体质粒转染的B16／HBV细胞可稳定表达HBsAg和HBcAg。通过在肝脏被膜下注射B16／HBV细胞，建立了能持续分泌表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤小鼠模型。; 汪颖吴志远任书荣魏勇张昆曲春枫; 关键词：肝脏肿瘤肿瘤种植动物肝炎乙型

慢性乙肝病毒感染者进展为肝癌病程中血清循环免疫复合物的含量变化和意义被引量：2: 2011年; 目的探讨人外周血清循环免疫复合物（CIC）的含量变化与肝癌发生的关系。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测20例临床病理确诊的肝癌和13例肝血管瘤患者术前血清中CIC的含量。采用ELISA法检测45例慢性乙肝病毒（HBV）感染最终进展为肝癌者以及与之匹配的45例慢性HBV感染未进展为肝癌者入组时、随访过程中和随访结束时血清中CIC和抗肝肾微粒体抗体（抗LKM-1）的含量，采用荧光定量PCR法检测这些患者入组时、随访过程中和随访结束时血清HBV—DNA的含量。结果20例临床手术后病理确诊的肝癌患者术前血清中CIC的含量为（5738±1485）mU／L，显著高于13例肝血管瘤患者[（2410±1080）mU／L；P〈0．001]。45例经过长期随访最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量随病程进展而逐渐升高，在肝癌临床诊断时达到最高，与其人组时相比，差异有统计学意义（P〈0．001）；而对照组患者血清CIC的含量未见明显变化（P=0．118）。随访过程中，血清CIC的升高与肝癌累积发病率密切相关（HR=2．77，95％CI为1．47～5．22）。最终进展为肝癌的慢性HBV感染者在入组时、随访进程中和临床确诊为肝癌时的血清抗LKM-1和HBV-DNA含量均显著高于与之相匹配的对照组，并维持在较高水平。最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量与HBV-DNA的含量之间仅在肝癌临床诊断时存在相关性（r=0．344，P=0．026）。结论在慢性HBV感染进程中，血清CIC含量的逐渐升高可能是由慢性HBV感染进展为肝癌的重要转归指标之一。; 杜君田萍陈陶阳吴健雄王金兵魏勇王黎明刘立国季万盛曲春枫; 关键词：循环免疫复合物肝肿瘤乙型肝炎病毒

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魏勇

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