黄桂琴
- 作品数：23 被引量：48H指数：4
- 供职机构：昆明医学院基础医学院神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠CD34^+/CD45^+细胞在脊髓全横断大鼠模型中的存活及迁移被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨CD34+/CD45+细胞移植入脊髓全横断大鼠模型后的存活、迁移及分布情况。方法:体外培养绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓细胞,经CD34、CD45单克隆抗体鉴定后移植入脊髓全横断大鼠模型脊髓横断处尾侧,分别在术后24h、48h、1周、2周、4周和8周行左心腔内灌注,取出脊髓,连续切片(片厚10μm),置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞,并观察荧光细胞的分布范围;用免疫组化法检测CD34+/CD45+细胞的存活。结果:脊髓横断处头尾两侧均可见绿色荧光细胞,且多分布于灰质中,散在或聚集成片;免疫组化法可见切片中有CD34+/CD45+细胞散在。结论:CD34+/CD45+细胞可在脊髓全横断大鼠模型的脊髓中存活,并可迁移至脊髓横断处头侧,且随时间的延长迁移距离有所增加。
- 程昊钰何明生王廷华张洪钿王熙才伍治平王方方刘鲲黄桂琴胡艳丽
- 关键词：脊髓全横断绿色荧光蛋白细胞运动
- 兔颈静脉血管内皮细胞的培养被引量：5
- 2007年
- 目的建立稳定的兔颈静脉血管内皮细胞的体外培养方法,为自体的细胞移植提供种子细胞.方法取单侧兔颈静脉,保留对侧;用0.25%胰蛋白酶液进行灌注消化;M199培养基进行培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化进行血管内皮细胞鉴定.结果培养后1-3 d可见细胞贴壁,3 d后细胞变形,7-10 d细胞融合成片,14 d后可进行传代培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化阳性,证实所培养的细胞为血管内皮细胞;取材后实验兔一直存活,未出现死亡.结论本实验方法可以稳定地获取体外培养的兔颈静脉血管内皮细胞,并保证了实验兔的存活,为后续自体细胞移植的开展创造了条件.
- 徐岩泽胡竹林易伟斌王廷华罗哲文黄桂琴
- 关键词：颈静脉血管内皮内皮细胞
- ^(125)I籽粒近距离照射对神经胶质瘤干细胞的影响被引量：1
- 2007年
- 目的评价不同剂量125I籽粒近距离照射对神经胶质瘤干细胞的杀伤作用。方法术中取胶质瘤细胞,接种于含生长因子的无血清培养基中培养,使其中的脑肿瘤干细胞增殖,利用细胞免疫荧光检测脑肿瘤干细胞在细胞培养CD133的表达,将125I籽粒置入培养皿中,对脑肿瘤干细胞给予不同剂量、不同时间的近距离照射,检测CD133阳性细胞死亡率、增殖抑制的改变;通过细胞克隆形成法测定125I近距离照射对脑肿瘤干细胞的生长抑制作用。结果与空白对照组比较,照射组细胞死亡率,增殖抑制率明显升高;125I各实验组生长曲线抑制克隆形成,较空白组明显降低。结论125I近距离照射可以通过导致细胞死亡、抑制脑肿瘤干细胞增殖,在胶质瘤的治疗中发挥作用,具有进一步应用临床的前景。
- 刘兴海杨智勇王廷华王进昆黄桂琴
- 关键词：肿瘤干细胞胶质瘤CD133近距离照射
- 维甲酸诱导小鼠胚胎干细胞向神经样干细胞分化
- 2008年
- 目的探讨维甲酸(RA)诱导体外培养的小鼠胚胎干细胞(ESC)向神经样干细胞定向分化。方法在无白血病抑制因子(LIF)存在的条件下,将体外培养的ESC悬浮培养4天,形成拟胚体(EB),再经RA诱导4天后进行细胞冰冻切片,行免疫细胞化学染色计数生殖特异性基因Oct-4和神经干细胞特异性标志物Nestin的表达百分率。结果经诱导的ESC呈现Oct-4阳性细胞百分率为67.34%,而Nestin阳性细胞百分率为36.52%。结论体外培养的小鼠ESC经RA诱导后有部分细胞定向诱导分化为神经样干细胞。
- 杨慧娟黄桂琴李琴王廷华
- 关键词：维甲酸胚胎干细胞免疫细胞化学OCT-4NESTIN
- 神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达
- 2009年
- 背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:孕14～15d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养。清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T8椎板切除。用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×1010L-1,吸取细胞悬液15μL滴加到约2mm3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于细胞移植后3,7,14,21,28d取材进行指标检测。主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28dBcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3dCaspase-3的表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3dBax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21dBcl-2的表达明显增高(P<0.05),移植后3,7dCaspase-3的表达明显减少(P<0.05)。结论:神经干细胞移植后,可能通过调控大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达促进大鼠全横断脊髓损伤修复。
- 李云黄桂琴巴迎春王廷华
- 关键词：神经干细胞全横断脊髓损伤运动皮质凋亡基因
- 经静脉移植自体骨髓单个核细胞治疗猪急性心肌梗死的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨静脉内移植自体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)治疗猪急性心肌梗死的有效性和安全性。方法静脉内移植BM-MNCs后4周观察移植细胞归巢情况、小血管密度、心功能及冠脉侧支血管形成情况及可能发生的不良反应。结果静脉内MNCs移植后4周心肌细胞间可见少量发蓝色荧光的移植细胞,散在分布,心肌细胞间有较多新生毛细血管并可见新生的心肌样细胞;移植组小血管密度(68.25±9.54)条/mm^2明显高于对照组(35.14±7.06)条/mm^2(P<0.01),左心室射血分数(LVEF,62.75%±5.08%)、短轴缩短率(FS,40.28%±4.73%)也明显高于对照组LVEF(46.34%±5.94%)、FS(29.34%±3.86%)(均为P<0.05);移植组冠脉侧支循环形成较对照组明显;静脉内移植MNCs没有发现异常增生、钙化或肿瘤形成。结论经静脉移植的BM-MNCs可归巢到宿主心肌,有助于促进缺血心肌血管新生,改善左心室收缩功能的作用。
- 孙林张戈左明鲜李劲松周旭章体玲黄桂琴陆地光雪峰杨达宽
- 关键词：骨髓移植心肌梗死
- CD34^+细胞移植后脊髓全横断大鼠脊髓功能恢复的形态学及行为学观察被引量：2
- 2006年
- 目的:观察脊髓全横断SD大鼠模型骨髓CD34+细胞移植术后,脊髓功能恢复情况。方法:实验于2004-11/2005-07在昆明医学院神经科学研究所完成。①采用Percoll细胞分离液离心+贴壁分离法对绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓细胞进行粗筛后,收集骨髓悬浮细胞进行体外培养,密切观察细胞生长情况。②收集培养至第3周的悬浮细胞,采用免疫细胞化学法进行CD34单克隆抗体鉴定。③选健康雌性SD大鼠30只,采用随机数字法分为移植组和对照组,每组15只(1d,1,2,4和8周各3只)。将经CD34单克隆抗体鉴定后的CD34+细胞移植入脊髓全横断大鼠模型脊髓横断处尾侧。④术后密切观察大鼠后肢运动功能恢复情况,分别在术后1d,2,4和8周行BBB评分检测大鼠后肢运动功能的恢复。⑤同时行冰冻切片于荧光显微镜下观察绿色荧光细胞的分布情况,并用免疫组织化学法检测CD34+细胞的存活。结果:对照组大鼠第22天死亡1只,进入结果分析29只。①免疫荧光镜下见,培养至两三周的骨髓悬浮细胞中,圆形绿色荧光细胞可达90%以上。②免疫细胞化学染色结果显示,培养至两三周后的骨髓悬浮细胞多数呈CD34阳性,阳性率达(74.6±1.7)%。③两组大鼠BBB评分结果显示,移植组大鼠后肢自主运动功能的恢复明显优于对照组。④移植后2,4和8周时移植组脊髓横断处头尾两侧均可见绿色荧光细胞,且多分布于灰质中,散在或聚集成片;免疫组织化学法可见移植组脊髓横断处头尾两侧切片中均有CD34+细胞散在。结论:移植骨髓CD34+细胞可在脊髓全横断大鼠脊髓中存活并迁移,其大鼠后肢自主运动功能得到部分恢复。
- 程昊钰何明生王廷华张洪钿王方方刘鲲黄桂琴胡艳丽
- 关键词：神经行为学表现
- 嗅鞘细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子表达的影响被引量：2
- 2009年
- 背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除。造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15μL(约3×105个细胞)滴加到约2mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于移植后3,7,14,21,28d取大脑运动皮质行RT-PCR检测。主要观察指标:采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化。结果:培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长。与假手术组比较,模型组术后3d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21d降至无明显差异,至28d明显降低(P<0.05);术后各时间模型组胰岛素样生长因子1的表达无明显差异(P>0.05)。与模型组比较,移植后14d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P<0.05);移植后3d睫状神经营养因子的表达明显减少(P<0.05),但移植后7,14,21d表达逐渐回升,至28d明显高于模型组水平(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关。
- 李云刘佳黄桂琴巴迎春王廷华
- 关键词：全横断脊髓损伤运动皮质胰岛素样生长因子1
- 冠脉内移植白体骨髓单个核细胞对猪急性心肌梗死后心功能的影响
- 2009年
- 目的探讨冠脉内移植自体骨髓单个核细胞（BM—MNCs）对猪急性心肌梗死后心功能的影响。方法实验动物分为冠脉内移植BM—MNCs组（n=6）及冠脉对照组（n=5），移植细胞数2×10^8。移植后4周观察心功能变化及冠脉侧支循环形成情况。结果冠脉内BM—MNCs移植后4周移植组左室射血分数[LVEF：（65．84±4．94）％]及短轴缩短率[FS：（43．21±5．49）％]明显高于对照组[LVEF：（47．21±6．32）％，FS：（27．31±4．07）％]（P〈0．01），而左室舒张末压[LVDEP：（7．94±4．57）mmHg]明显低于对照组[（22．56±5．97）mmHg]（P〈0．01），左室舒张末期内径[LVEDd：（27．27±2．38）mm]低于对照组[（37．82±6．96）mm]（P〈0．05）；移植组冠脉侧支循环形成较对照组明显；移植后1周血清bFGF及VEGF浓度明显高于对照组及术前水平（P〈0．01）。结论经冠脉移植BM—MNCs有助于改善左室收缩功能及舒张功能，有助于减轻心室重构。
- 左明鲜孙林张戈周旭章体玲白文伟黄桂琴李劲松陆地光雪峰杨达宽
- 关键词：骨髓单个核细胞心肌梗死
- 骨髓单个核细胞的提取、分离、标记和体外培养被引量：5
- 2008年
- 目的提取分离骨髓单个核细胞(BM-MNCs)。方法无菌条件下行髂后上嵴穿刺抽取小型猪骨髓20～40ml,采用Ficoll密度梯度离心法分离BM-MNCs。结果经2%台盼蓝鉴定细胞存活率为96%～99%,DAPI染色标记率100%,标记的细胞核发蓝色荧光。BM-MNCs的体外培养可见细胞呈梭形生长,通过CD44免疫组化鉴定证实为CD44+骨髓间充质干细胞(MSCs)。结论BM-MNCs易分离,操作简便,可作为移植细胞选择。
- 孙林周旭章体玲张戈左明鲜李劲松黄桂琴陆地光雪峰杨达宽
- 关键词：骨髓单个核细胞
