- TRPM7通道过表达细胞株的建立、鉴定及其功能的初步研究
- 2011年
- 通过瞬时转染TRPM7-eGFP质粒至人胚胎肾细胞HEK293T细胞建立瞬时受体电位Melastatin的7型通道(TRPM7通道)过表达体系并利用此体系对通道特性进行研究。经荧光显微镜观察,转染率可达30%～40%,RT-PCR及Western印迹结果显示转染后的细胞在相应的基因及蛋白水平上均有明显的表达。膜片钳结果显示转染后全细胞电流可达2 800 pA,pH 7.4至pH 4.0时通道内向电流显著增加,200μmol/L二苯硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)显著抑制通道外向电流。结果表明瞬时转染HEK293T细胞的TRPM7过表达体系成功构建,细胞外酸性条件及TRPM7通道抑制剂2-APB对通道电流有不同影响,提示该通道功能可受到多种因素的影响。
- 肖楚瑶陈少锐余洋章艳刘培庆蒋建敏
- 关键词：瞬时转染膜片钳
- 心脏成纤维细胞及其参与心房颤动发生的研究进展被引量：1
- 2013年
- 心脏成纤维细胞在心脏的病理生理方面都扮演着重要角色。从疾病的角度来看,来自心脏成纤维细胞的细胞外基质的增多所导致的心房纤维化对于心房颤动的发生与发展起着重要作用。过量的细胞外基质可阻断心肌束的连续性,进而导致局部传导障碍和折返性心律失常。同时,心脏成纤维细胞上表达的多种离子通道使得成纤维细胞还可以与心肌细胞耦联并影响其电生理特性。因此,进一步了解成纤维细胞及其在心房颤动中的参与作用有助于人们深入挖掘与认识抗心律失常的治疗靶点。
- 郭金蕾贾岩岩陈少锐余洋蒋建敏
- 关键词：心脏成纤维细胞心脏纤维化电生理心房颤动
- 钙蛋白酶对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及纤维化模型的影响被引量：2
- 2013年
- 【目的】研究钙蛋白酶在血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌纤维化中的作用及作用机制。【方法】原代培养SD大鼠心肌成纤维细胞(CF),取传代2-4代细胞,,预先给予不同浓度calpain抑制剂PD150616,观察对Ang II诱导致纤维化模型的影响。实验分为空白对照组(control)、模型组(Ang II)、低浓度给药组(Ang II+PD150616_5μmol/L)、高浓度给药组(Ang II+PD150616_10μmol/L)。Edu检测CF增殖,Western blot检测纤维化因子纤连蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达,同时检测calpain激活的下游产物Cleavedα-Fodrin以及胞浆中p-IκB与细胞核内P65、NFAT4的蛋白水平变化。【结果】PD150616显著抑制由Ang II诱导的CF增殖及FN、CTGF、α-SMA等纤维化因子表达上调。Ang II显著提高Cleavedα-Fodrin的表达,PD150616可阻断Ang II的作用,提示calpain受Ang II激活,是Ang II作用的下游因子。PD150616可抑制Ang II引起的胞内IκB磷酸化和胞核中p65、NFAT4的表达上调,提示calpain的作用与NF-κB、NFAT4转位入核的信号通路相关。【结论】calpain在Ang II刺激诱导心肌纤维化过程中发挥重要作用,其机制可能与NF-κB和NFAT信号通路的激活有关。
- 马越余洋贾岩岩陈少锐叶建涛马韵子李卓明刘培庆
- 关键词：钙蛋白酶心肌纤维化
