司微
- 作品数：50 被引量：128H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定被引量：6
- 2007年
- 选取来自黑龙江省病犬的肺脏、胰脏、肝脏、脾脏、肾、膀胱、淋巴结等组织病料,研磨上清接种非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒的分离。对分离毒株进行了形态学、血清学、回归动物试验鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。分离得到的病毒在Vero细胞上可产生明显的细胞病变(CPE),病毒形态学、血清学、回归动物试验、RT-PCR鉴定均为阳性,确定所分离的病毒为犬瘟热病毒,命名为CDV-HLJ株。
- 张洪英司微高艳刘立奎崔尚金王宇
- 关键词：犬瘟热病毒RT-PCR
- 结核分枝杆菌csdA基因的原核表达及其免疫原性
- 2010年
- 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出1 690 bp的csdA(cold-shock dead-box protein A)基因,经限制性酶切后,与pET28a载体连接,转化到大肠杆菌BL21中后,重组菌经0.2 mmol/L IPTG诱导表达了csdA蛋白及Ni-His-resin纯化蛋白,经Western-blot分析,鉴定了目的蛋白的反应原性。试验结果表明,重组质粒的双酶切鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在64 ku处获得一目的条带,具有很好的免疫原性。证实,成功构建了重组表达质粒pET28a-csdA,获得了高纯度的重组蛋白,为深入研究csdA蛋白的功能奠定了基础。
- 王华南亓英芳杜艳芬刘慧芳司微于申业王加明杨盛李素兰冯拥军倪洪波王春来刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选被引量：8
- 2008年
- 利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后血清D150nm分别由原来的0．927和0．239降低为0．196和0．078。同时,将APP1基因组DNA以Bsp143I进行酶切，回收500～2000bp的片段，与pET30a／b／c载体连接，构建了APP1基因组质粒表达文库，库容量（CFU）为2．0×10^5。用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库，从3000个菌落中获得了12个阳性克隆。
- 刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赵海玲赫明雷
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 抗结核分枝杆菌单克隆抗体及其识别的抗原表位和用途
- 本发明公开了抗结核分枝杆菌单克隆抗体及其所识别的抗原表位和用途。本发明提供了一株稳定分泌抗结核分枝杆菌CsdA的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其微生物保藏号是：CGMCCNo.5077。本发明进一步提供了由该杂交瘤细胞株分泌...
- 刘思国王华南于申业朱婷于秀婷刘慧芳王秀梅司微
- 文献传递
- 非典型犬瘟热病毒部分序列的测定及比较分析
- 2009年
- 犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的急性、高度接触性和传染性极强的病毒病，不同年龄、不同性别、不同品种的犬均可感染，幼龄动物多为急性、致死性经过，成年动物可呈慢性持续性感染。近年来，我国不同区域不论犬或野生动物均有CD疫情爆发，而且临床还出现了表现非典型犬瘟热临床症状的病犬，亟需证实犬群中是否出现了CDV强毒变异株，因此笔者对门诊病料进行了分离鉴定及核酸序列的比较分析，现报道如下。
- 姚卫东司微曹晶崔尚金张洪英
- 关键词：犬瘟热病毒核酸序列幼龄动物临床症状野生动物
- 牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究
- 为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligotyping,Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(variable number tandem repeats-mycob...
- 杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲
- 关键词：牛分枝杆菌SPOLIGOTYPINGVNTR基因分型
- 文献传递
- 结核分枝杆菌pdhA基因的原核表达及其免疫原性分析被引量：6
- 2011年
- 以结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出1 100bp的pdhA(pyruvate dehydrogenase E1component alpha subunit)基因,经限制性酶切后,与pET-28a载体连接,转化到大肠杆菌BL21中,重组菌经1mmol/L IPTG诱导表达了pdhA蛋白,并用Ni-His-resin纯化了目的蛋白,经Western-blot分析鉴定了目的蛋白的免疫原性。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在44ku处获得一目的条带,且具有很好的免疫原性。本研究成功获得了高纯度的重组蛋白pdhA,为深入研究其功能奠定了基础。
- 王华南亓英芳朱婷于申业刘慧芳司微杨盛王加明冯拥军李素兰于秀婷王春来刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 增强噬菌体溶菌基因打孔效率的DNA序列及其应用
- 本发明公开了增强噬菌体溶菌基因打孔效率的DNA序列及其应用。本发明利用基因重排技术对噬菌体E基因进行重排，使其阅读框架为276个核苷酸的E突变成阅读框架为201个核苷酸的ΔE(SEQ ID NO：3)，而前74bp基因变...
- 刘思国彭伟常月红刘慧芳王春来司微
- 文献传递
- 牛分枝杆菌与鸟型分枝杆菌2型重组蛋白Ag85b的血清学交叉反应研究
- 2012年
- 牛分枝杆菌(M.bovis)是引起牛结核病的常见病原,而鸟分枝杆菌(M.avium)2型则通常交叉感染牛,但不会导致严重的病变。为鉴定M.bovis和M.avium的免疫交叉反应情况,本研究分别以M.bovis和M.avium2型的基因组为模板,扩增ag85b基因,分别构建了M.bovis和M.avium的原核和真核表达重组质粒进行表达。以原核表达纯化的两种重组蛋白Ag85b(rAg85b)分别作为包被抗原,交叉检测两种真核重组质粒免疫豚鼠制备的抗血清。结果表明,原核表达的M.bovis和M.avium rAg85b与真核重组质粒免疫豚鼠制备的两种抗血清之间存在较强的免疫交叉反应。研究结果揭示M.bovis和M.avium的Ag85b蛋白存在很强的血清学交叉反应,这将严重干扰M.bovis Ag85b作为候选疫苗的免疫监测。
- 朱婷王华南刘慧芳于申业王秀梅陈莉苹司微赵海玲刘思国
- 关键词：牛结核分枝杆菌
- 细菌菌蜕在制备病毒性疫苗佐剂中的应用
- 本发明公开了细菌菌蜕在制备病毒性疫苗佐剂中的应用，本发明还公开了一种细菌菌蜕的大规模发酵方法。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了细菌菌蜕的大规模制备方法，为菌蜕疫苗的商品化生产奠定了坚实的基础；此外，本发明系统性的...
- 刘思国于申业司微危艳武陈利苹
- 文献传递
