喻放 作品数:4 被引量:6 H指数:1 供职机构: 武汉科技大学化学工程与技术学院 更多>> 发文基金: 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 化学工程 更多>>
蚕蛹超声辅助常温脱脂工艺条件优化 被引量:4 2016年 脱脂是蚕蛹精制过程中的重要环节,脱脂过程中保持蚕蛹蛋白的活性十分必要。旨在对蚕蛹超声辅助常温脱脂工艺进行研究,采用响应面分析法对工艺条件进行优化,并建立相应的预测模型。单因素实验和响应面法优化得到蚕蛹超声辅助常温最佳脱脂工艺为:石油醚-丙酮(3∶7)为溶剂,液料比11 m L/g,超声功率125 W、超声时间27 min,温度40℃左右;在该脱脂条件下,蚕蛹脱脂率为(96.8±0.8)%。各因素对蚕蛹脱脂率的影响程度由强至弱依次为:液固比>超声时间>超声功率。溶剂类型和液固比是影响蚕蛹脱脂效率的决定性因素,超声辅助脱脂具有脱脂温度低,脱脂时间短,物质活性不易破坏,脱脂率高的优点。 左振宇 喻放 黄艳鸿 王家怡 李凌凌关键词:蚕蛹 超声波辅助 响应面法 人IL-24基因在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤特性的研究 白细胞介素24(IL-24)是近年来发现的一种肿瘤细胞抑制因子,在肿瘤的基因治疗方面具有极大的应用价值。但是到目前为止,还没有很好的体外大量表达可溶性IL-24蛋白的方法,并且IL-24抑制肿瘤细胞生长的分子机制也没有研... 喻放关键词:白细胞介素24 大肠杆菌 抗肿瘤特性 文献传递 一株高产丝氨酸羟甲基转移酶基因工程菌的构建及发酵产酶条件优化 被引量:1 2013年 以E.coli AB90054基因组中DNA为模板,采用PCR方法扩增得到glyA基因,将该基因克隆到表达载体pET28a(+)中,转化表达菌株BL21(DE3)后筛选阳性重组子,并对筛选所得高表达基因工程菌G16进行培养条件和表达条件的优化。结果表明,当培养条件为38℃、pH为7.0、转速为150r/min时,基因工程菌的生长速度和菌液浓度最佳;当表达条件的诱导温度为30℃、诱导剂浓度为0.5mmol/L、诱导时间为5h时,基因工程菌诱导目的蛋白表达效果最好。通过SDS-PAGE分析和酶活测定后发现,在优化条件下基因工程菌G16发酵产丝氨酸羟甲基转移酶能力占菌体总蛋白的60%左右,且蛋白活性正常。 喻放 左振宇 杨忠华 周卫关键词:丝氨酸羟甲基转移酶 基因工程 人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化 被引量:1 2016年 构建人白细胞介素24(IL-24)原核表达载体并利用ELP-Intein系统表达纯化可溶性的IL-24蛋白。通过PCR扩增不含信号肽的人IL-24基因,将IL-24基因插入p ET-ELP-Intein质粒构建重组表达载体p ET-ELP-Intein-IL-24。将重组质粒转化至E.coliBLR(DE3),20℃下经IPTG诱导表达。利用ELP蛋白在不同温度下发生相变的特点和Intein蛋白的自切割反应纯化可溶性IL-24蛋白,将纯化得到的IL-24蛋白进行Western blot鉴定。用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测IL-24蛋白的生物学活性。成功构建了重组表达载体p ET-ELP-Intein-IL-24,第一次通过原核表达方法表达并纯化出了可溶性的IL-24蛋白。Western blot检测显示目的蛋白能与IL-24抗体特异性结合,表明纯化出的蛋白确实为IL-24蛋白。细胞凋亡检测实验证明IL-24蛋白能显著地诱导hep G2细胞发生凋亡。 喻放 杨忠华 范汉东 左振宇关键词:白细胞介素24 质粒构建 原核表达 蛋白纯化