张旭霞
- 作品数：104 被引量：195H指数：9
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：首都卫生发展科研专项国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 结核分枝杆菌肝素结合血凝素在结核病免疫应答中的研究
- 2010年
- 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素的免疫应答作用及其在结核病诊断中的应用价值。方法选取PPD（-）的健康对照、PPD（＋）的潜伏感染者、肺结核患者，分离入选者的外周血单个核细胞，用天然HBHA刺激，培养4天后收集细胞培养上清，ELISA方法检测上清中的γ-干扰素（IFN-γ）。同时用ELISA方法检测各组血清中的HBHA特异的IgG型抗体。结果HBFIA刺激后三组产生的IFN—γ中位数分别为：49．5pg／ml、781．9pg／ml、341．8pg／ml，潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于健康对照，略高于肺结核。三组血清IgG抗体浓度吸光度的均值分别为0．212±0．066，0．224±0．076，0．285±0．078。肺结核患者的HBHA特异的IgG抗体远高于健康对照及潜伏感染者。结论HBHA有较好的免疫原性，HBHA特异的IFN—γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者。HBHA的抗体水平在结核病的诊断中有一定的辅助应用价值。
- 聂理会孙照刚张旭霞刘毅高孟秋李传友
- 关键词：肝素结合血凝素分枝杆菌结核Γ-干扰素体液免疫
- 应用微孔噬菌体扩增法检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性被引量：1
- 2004年
- 目的 应用并评价微孔噬菌体扩增法 (micro wellphagereplicationassay ,MPRA)快速检测临床结核分枝杆菌分离株对利福平的敏感性。方法 将适当浓度的利福平溶液作用于结核分枝杆菌临床分离株 ,一定时间后 ,加入噬菌体悬液。应用MPRA法检测利福平药物的敏感性。结果 应用绝对浓度法对利福平敏感的 4 2株菌株中 38株MPRA法敏感 ;绝对浓度法对利福平耐药的 131株菌株中 12 4株MPRA法耐药。MPRA法与绝对浓度法的符合率为 93 6 % (16 2 / 173) ,与绝对浓度法相比 ,MPRA法的敏感度为 94 7% (12 4 / 131) ,特异度为 90 5 % (38/ 4 2 )。
- 张旭霞黄海荣李传友李卫民刘忠权马屿
- 关键词：利福平结核分枝杆菌噬菌体敏感性特异度临床分离株
- 结核分枝杆菌粘附素HBHA在结核病诊断与治疗中的应用
- 本发明公开了一种多肽，其包含结核分枝杆菌肝素结合血凝素(heparin－binding haemagglutinin，HBHA)抗原决定簇，其中所述结核分枝杆菌粘附素HBHA抗原决定簇的序列包含：Arg－Thr－Asp－...
- 李传友张旭霞
- 文献传递
- 结核分枝杆菌黏附素HBHA抗结核作用的动物实验研究
- ＜正＞目的探讨结核分枝杆菌黏附素HBHA在免疫预防和治疗中作用方法 （1）实验动物分组将实验动物随机分为以下4组:CpG免疫治疗组, HBHA免疫治疗组,CpG+HBHA免疫治疗组和对照组。（2）给药方法攻毒后14d给C...
- 张旭霞张海青田苗李传友
- 文献传递
- CRISPR系统相关Cas蛋白研究进展被引量：1
- 2020年
- 利用在原核生物中观察到的规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与相关的Cas(CRISPR-associated proteins)蛋白构成CRISPR-Cas系统作为真核细胞中的基因编辑工具为近年研究热点。效应蛋白由多个Cas蛋白组成,包括两个大类五型系统。Cas蛋白结合特定的核酸序列,具有核酸酶的功能用于可编程基因组编辑和表观遗传调控,同时在疾病诊断方面也有很好的发展前景。其中Cas6是一种独立于金属的单转位酶,依附在crRNA裂解产物上,可识别并在crRNA转录前的重复序列中裂解单个磷酸二酯键。核糖核酸内切酶Cas9为RNA引导的DNA裂解酶,是目前应用最广泛的基因编辑工具,同时在感染性疾病检测、癌性病毒感染的消除或灭活、肿瘤免疫治疗、肿瘤基因组和表观基因组的调控等方面显示出巨大的应用前景。RNA引导的核酸内切酶Cas12a具有两种不同的核酸酶活性,且该双重催化活性已被用于多重基因编辑。Cas12a的显著特性使其应用于目标DNA与RNA快速检测,成为CRISPR-Cas基因组编辑工具包的补充。RNA引导的RNA靶向核酸内切酶Cas13a是RNA引导、RNA激活的RNA酶,已被开发为RNA检测、RNA成像和RNA调控的强大工具,同时利用Cas13a构建高灵敏度及特异度的检测方法也可为感染性疾病在诊断过程中提供重要的理论依据。由此展开对CRISPR-Cas系统相关的Cas蛋白的深入研究,同时对上述系统在不同疾病中的重要应用等进行阐述,有助于为各项研究提供新思路,新方法。
- 于佳佳张旭霞李传友唐神结刘毅
- 中国汉族人群Toll样受体2基因多态性与肺结核易感性之间关系
- 目的：检测中国汉族人群特异TLR2基因多态性，并分析与结核病易感性之间关系。方法：在小样本中测序检测TLR2基因中可能存在的基因多态性，再用连接酶特异检测技术在大样本进行SNP分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病...
- 车南颖姜世闻高铁杰李松张旭霞张慧张治国王黎霞李传友
- 关键词：肺结核TOLL样受体2基因易感性
- 实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达被引量：5
- 2006年
- 目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。
- 孙照刚张旭霞张健源柴利泉李妍田苗李卫民邱云青李传友
- 关键词：结核分枝杆菌耐药基因
- 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用被引量：5
- 2008年
- 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素（Heparin—binding haemagglutinin adhesin，HBHA）在结核病免疫诊断方面的应用价值。方法将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株（BCG）菌体超声裂解，离心后取上清并通过CL-6B层析柱，利用含0—500mmol／L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液（PBS）进行梯度洗脱后获得天然HBHA。以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段，质粒pET-32a为载体，大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白。以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原，分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平。应用SPSS11．5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验，然后进行t检验，并计算各研究组的敏感度和特异度。结果含有375mmol／L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白。利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化。ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显。肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异，肺结核组吸光度值集中分布在0．30—0．40之间，肺外结核组吸光度值分布在0．35—0．45之间，经统计学检验结果差异具有统计学意义（t：12．224，P〈0．05）。结核组（肺结核和肺外结核）与对照组（PPD阴性，PPD阳性）吸光度值分布具有显著不同，对照组全部小于0．30，结核组吸光度值则集中分布于0．30—0．45之间。经统计学检验（t=25．909，P〈0．05）血清抗体水平具有显著性差异。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度，有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断。
- 张旭霞孙照刚李妍张健源端木宏谨李传友
- PCR扩增技术联合CRISPR-Cas13a系统对MTB DNA检测方法的初步研究被引量：4
- 2020年
- 目的建立一种聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联合CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a识别靶基因核酸序列对结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(Mycobacterium tuberculosis deoxyribonucleic acid,MTB DNA)进行检测的方法。方法将MTB保守序列IS6110片段插入pMDTM19-Tsimple Vector克隆载体,构建含待检测靶序列的模拟MTB质粒。同时针对待检测靶序列MTB保守序列IS6110设计可以检测MTB DNA的3条不同的特异性规律成簇间隔短回文重复序列RNA(CRISPR RNA,crRNA)探针(IS6110-1crRNA、IS6110-2crRNA、IS6110-3crRNA),引导CRISPR-Cas13a识别转录产物。将筛选出的特异性crRNA、不同待检测标本的PCR扩增转录产物、Cas13a、crRNA和Background RNA等按比例混合构建PCR-CRISPR反应体系。利用荧光定量PCR仪对含有MTB DNA不同稀释浓度的质粒模板、标准菌株H37Rv及6种非结核分枝杆菌进行检测。通过测定的相对荧光强度值分析检测的敏感度及特异度,最终建立基于MTB CRISPR-Cas13a系统的PCR-CRISPR检测方法。结果选择相对荧光强度值最大的IS6110-1crRNA[相对荧光强度值为197680.64(98364.94,304271.25)]作为后续MTB DNA检测的crRNA探针。PCR-CRISPR检测最低拷贝数为101拷贝/μl的质粒和100拷贝/μl的H37Rv扩增产物的相对荧光强度值[分别为38655.34(31975.51,45410.32)和17691.50(17612.36,17793.29)]明显高于阴性对照[29989.48(29435.72,30263.20)和13725.83(13652.43,13804.95)](Z=-6.713、-9.448;P值均<0.001),显示敏感度较好;阴性对照[37635.57(37168.74,38199.20)]和戈登分枝杆菌[39351.83(38903.70,39769.53)]、胞内分枝杆菌[39191.30(39018.51,39434.95)]、堪萨斯分枝杆菌[25172.20(24586.95,26046.45)]、脓肿分枝杆菌[37328.03(36959.01,37546.78)]、鸟分枝杆菌[37942.29(37455.63,38401.13)]、偶发分枝杆菌[29491.19(29148.63,30058.62)]等6种非结核分枝杆菌的相对荧光强度值均明显低于106拷贝/μl的MTB DNA质粒的相对荧光强度�
- 于佳佳张旭霞张雨晴任卫聪姚丛李传友刘毅唐神结
- 关键词：DNA探针微阵列分析
- 结核病与Parkin蛋白
- 自噬-溶酶体途径和泛素-蛋白酶体系统是真核细胞内的两条主要降解途径,都是通过对底物的泛素化标记后进而被溶酶体或者蛋白酶体降解,其中泛素连接酶Parkin(泊蛋白)发挥着关键作用.Parkin蛋白是由PARK2基因编码的一...
- 薛玉刘毅张旭霞李传友
- 关键词：结核病疾病感染结核分枝杆菌
- 文献传递
