目的:研究重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性人前列腺癌PC3细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法:体外培养PC3细胞,予不同浓度(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μmol/L)的PPⅠ处理24、48、72 h,另设对照组,MTT法观察PPⅠ对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹检测PPⅠ对磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、核转录因子kappa B(NF-κB)/p65以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白表达的影响,并加入ERK1/2抑制剂(PD98059)后检测PPⅠ对NF-κB/p65表达的影响。结果:MTT结果显示,PPⅠ能抑制PC3细胞的体外增殖,与对照组相比,PC3细胞从给药浓度0.4μmol/L(0.85±0.05 vs 1.00±0.00,P<0.01)开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,PPⅠ能明显诱导PC3细胞早期凋亡,与对照组相比,PC3细胞早期凋亡率从给药浓度0.8μmol/L(13.83±2.97 vs 4.83±0.95)开始明显增加(P均<0.01),且呈剂量依赖性;Western印迹显示,PPⅠ以时间依赖性上调p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的激活与表达,与对照组相比,给药时间从2 h(1.73±0.17 vs 1.00±0.00,P<0.01)开始,p-ERK1/2明显被激活表达,PPⅠ以剂量依赖性下调NF-κB/p65、DNMT1蛋白的表达,与对照组相比,给药浓度分别从1.6μmol/L(0.67±0.11 vs 1.00,P<0.01)与1.2μmol/L(0.63±0.06 vs 1.00±0.00,P<0.01)开始,NF-κB/p65、DNMT1表达明显下调;抑制ERK1/2磷酸化能逆转重楼皂苷Ⅰ对NF-κB/p65蛋白表达的下调,与PPⅠ组相比,PD98059+PPⅠ组NF-κB/p65蛋白表达(0.86±0.18 vs 0.43±0.09,P<0.05)明显上调。结论:PPⅠ可能通过介导ERK1/2通路抑制NF-κB/p65和DNMT1蛋白表达,诱导PC3细胞早期凋亡,进而抑制细胞增殖。
