李志辉
- 作品数：11 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金国家重点基础研究发展计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 转基因生物检测技术研究进展被引量：3
- 2011年
- 转基因技术的发展,促进了转基因生物(genetically modified organisms,GMO)的数量、多样性不断增加,给GMO检测工作提出了新的挑战,同时也促进了GMO检测方法的发展。GMO检测新方法突破了传统方法中一次只能分析一个靶目标的限制,新方法一次可以检测多个靶目标,向高通量检测的方向发展。作者对最新报道的GMO检测方法作一概述,主要包括实时荧光PCR多靶分析方法,锁式探针-基因芯片方法、液相芯片方法,多重PCR-毛细管电泳方法,生物发光检测方法,以及为GMO检测提供方法决策的支持系统(DSS、GMO示踪)等。
- 李全芬李志辉王慧煜韩雪清
- 关键词：PCR高通量DSS
- 宠物与外来动物病被引量：3
- 2010年
- 宠物伴随人类文明已有数千年的历史。当今宠物日益受到大众青睐,给人们带来精神上享受,但宠物是外来动物疾病一个潜在载体,对人们身体健康和畜牧生产造成影响。本文概括了我国宠物外来动物疾病的现状及潜在的威胁,简要分析了几种外来动物疾病的特点,对防止宠物引入外来动物疾病给出了意见和建议。
- 林祥梅李志辉吴绍强梅琳
- 关键词：宠物
- 实验动物与出入境检验检疫被引量：3
- 2011年
- 实验动物科学已成为现代科学技术的重要组成部分,是生命科学的基础和重要支撑条件。实验动物被广大科学工作者称为"活的试剂"、"活的精密仪器",可以满足各种不同研究要求和生产需要,在诸多领域都有广泛的应用。随着生命科学的发展和经济全球化的深入,实验动物的应用领域更加广泛,相关产业和国际贸易与交流方兴未艾,并日臻成为出入境检验检疫工作的重要内容。本文对实验动物的应用现状、进出口情况、相关出入境检验检疫政策、面临的问题和相关建议等做一综述。
- 林祥梅李志辉
- 关键词：实验动物出入境检验检疫
- 流感病毒NS1蛋白稳定表达的A549细胞系建立被引量：1
- 2013年
- A型流感病毒的NS1(Nonstructurol 1 protein,NS1)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009(H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.
- 李志辉曾琳姣王慧煜梅琳刘永飞韩雪清
- 关键词：A型流感病毒NS1蛋白A549细胞系
- A型流感生物芯片检测技术研究进展
- 2010年
- A型流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的具有高度传染性的急性呼吸道疾病，不仅严重影响了经济、社会的发展，而且对人民的健康与生命安全构成了严重危害。因此，快速、准确的基因芯片检测技术对A型流感的防控具有重要意义。本文对基因芯片的原理及其在A型流感检测中的研究进展进行了综述，并简单介绍了A型流感病毒全亚型分型基因芯片检测技术的研制及其初步应用。
- 王慧煜梅琳李志辉林祥梅韩雪清
- 关键词：A型流感生物芯片
- A型流感病毒NS1蛋白对细胞生长调控的影响被引量：2
- 2012年
- 为了观察A型流感病毒NS1蛋白对细胞生长调控的影响,构建了2009、1918A型H1N1流感病毒NS1基因带HA、GFP融合标签的真核重组表达载体,用脂质体法转染A549细胞,应用荧光显微镜、An-nexinⅤ染色、流式细胞术、Western-blot检测NS1蛋白对细胞生长的影响。结果显示,构建的NS1基因真核表达载体在A549细胞中均成功表达了NS1蛋白;显微镜下观察到,A549细胞出现皱缩,体积变小,变圆,细胞核固缩,染色质边缘化等细胞凋亡现象。AnnexinⅤ染色法检测表明,试验组染色率均高于空白对照组和阴性对照组,且A549/NS11918的染色率显著(P<0.05)高于A549/NS12009;流式细胞仪检测表明,试验组细胞周期发生G2/M期阻滞,且A549/NS11918的G2/M期与Apoptotic期的细胞比例均大于A549/NS12009;Western-blot检测结果表明,NS1蛋白对p53、p-p53-S15(p53 15位Ser磷酸化)、p21具有上调作用,且NS11918蛋白对这些蛋白表达的上调作用大于NS12009蛋白。结果表明,NS1蛋白能够上调p53、p-p53-S15、p21蛋白表达,使细胞周期阻滞于G2/M期,同时诱导宿主细胞凋亡,NS11918蛋白的作用强于NS12009蛋白。
- 刘永飞李志辉王慧煜梅琳曾琳姣韩雪清
- 关键词：A型流感病毒NS1蛋白细胞凋亡细胞周期
- 一种检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片方法
- 本发明提供了用于检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片方法，通过对传染性喉气管炎病毒的TK基因组序列的比对和分析，找出保守区域，设计了传染性喉气管炎病毒的特异性引物和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID...
- 王慧煜韩雪清林祥梅吕继洲梅琳李志辉
- 文献传递
- 一种检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片方法
- 本发明提供了用于检测传染性喉气管炎病毒的液相芯片方法，通过对传染性喉气管炎病毒的TK基因组序列的比对和分析，找出保守区域，设计了传染性喉气管炎病毒的特异性引物和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID...
- 王慧煜韩雪清林祥梅梅琳李志辉
- 实验动物与出入境检验检疫
- 实验动物科学已成为现代科学技术的重要组成部分，是生命科学的基础和重要支撑条件。实验动物被广大科学工作者称为“活的试剂”、“活的精密仪器”，可以满足各种不同研究要求和生产需要，在诸多领域都有广泛的应用。随着生命科学的发展和...
- 林祥梅李志辉
- 关键词：出入境检验实验动物检疫工作科普宣传
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为了建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒并且能够区分普通毒株和高致病性毒株的荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的国内发表的高致病性PRRSV NSP2基因序列,针对Nsp2缺失区设计一对引物和探针,在结合PRRSV通用检测引物探针进行荧光定量PCR,对反应条件进行优化,用已知PRRSV普通株和高致病性株及其他病毒进行试验。结果表明,该方法可以特异检测并区分高致病性株和普通株。将该方法用于临床标本的检测,通过对32份样本检测,通用阳性为28份,阳性率为87.5%。高致病性株为17份,阳性率为59.38%。表明建立的方法可以用于PRRSV的快速检测,并且可以区分普通株和高致病性株。
- 张靖飞张园李志辉王慧煜曹达江梅琳
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
