杨志鹏
- 作品数：10 被引量：34H指数：4
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家级星火计划安徽省高等学校省级质量工程项目更多>>
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- 猪丹毒丝菌CbpB基因的原核表达与鉴定
- 【目的】获得猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae,E.rhusiopathiae)胆碱结合蛋白B基因(cbpB)的表达产物,并对其免疫活性进行鉴定。【方法】根据GenBank中E.rhus...
- 吴琼娟杨志鹏李郁
- 关键词：原核表达
- 2012–2015年江淮地区猪丹毒杆菌分离株血清型、spaA基因遗传进化及PFGE基因型分析被引量：14
- 2017年
- 【目的】了解2012–2015年江淮地区猪丹毒杆菌分离株血清型分布、spa A基因遗传进化关系和基因分型特征。【方法】收集临床分离鉴定的42株猪丹毒杆菌,应用琼脂扩散沉淀实验、PCR扩增和序列分析技术、脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)分别测定分离株的血清型、spa A基因遗传变异性及PFGE基因型。【结果】42株猪丹毒杆菌分离株血清型均为1a型;spa A基因与猪丹毒杆菌国内外参考株核苷酸序列相似性为98.5%–100%,分离株在第609 bp处出现T突变为G、769 bp处C突变为A,对应的氨基酸第203位Ile突变为Met、第257位Leu突变为Ile,为Met-203、Ile-257型;分离株形成8个PFGE基因型,相似度达88.8%–100%,优势基因型为ER2(54.8%),弱毒疫苗G_4T_(10)和GC_(42)株独立为同一个基因型。【结论】江淮地区致病猪丹毒杆菌流行血清型为1a型,spa A基因相似性高,分离株变异小、源于同一克隆系,Met-203、Ile-257型菌株致病力强,是江淮地区猪丹毒发生与流行的主要致病菌型。
- 魏文涛姚焱彬刘全喜杨志鹏魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪丹毒杆菌血清型
- 猪丹毒丝菌CbpB基因的原核表达与鉴定
- 【目的】获得猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae,E.rhusiopathiae)胆碱结合蛋白B基因(cbpB)的表达产物,并对其免疫活性进行鉴定。【方法】根据GenBank中E.rhus...
- 吴琼娟杨志鹏李郁
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 检测猪丹毒杆菌抗体重组SpaA ELISA的建立被引量：7
- 2017年
- 【目的】利用表达纯化的猪丹毒杆菌表面保护性蛋白SpaA,建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【方法】克隆扩增猪丹毒杆菌SpaA基因,并将SpaA基因与原核表达载体p GEX-6P-1连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌E.coli Rosetta(DE3),并利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。将SpaA重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的猪丹毒杆菌SpaA蛋白作抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1.0 mg/L,血清的最佳稀释度为1:100,建立了检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,批内及批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性及特异性。用建立的间接ELISA方法检测猪丹毒疫苗免疫后的健康猪血清样品,检测结果与美国TSZ公司猪丹毒杆菌抗体检测试剂盒和Western blot鉴定结果进行对比,两者总符合率分别为92.20%、92.59%。【结论】试验利用原核表达的SpaA重组蛋白作抗原建立的检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性强、重复性好、敏感性高,可用于猪丹毒杆菌的抗体检测及流行病学调查。
- 姚焱彬李倩文杨志鹏陆萍魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪丹毒杆菌克隆表达间接ELISA
- 猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析被引量：8
- 2017年
- 旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。
- 姚焱彬陆萍杨志鹏魏建忠孙裴李郁
- 关键词：原核表达免疫原性免疫保护力
- 安徽省某牛场常见疾病调查分析被引量：2
- 2016年
- 为了解并有效防控某牛场常见疾病,笔者对某牛场3、4月份常见疾病进行了现场调查,将获得的数据进行整理、分析、归纳、总结,结果发现该牛场常见疾病呈散发性,包括呼吸系统疾病108例(其中咳嗽67头、气喘41头)、犊牛腹泻69例、腐蹄病79例、胎衣不下33例等。其原因为消毒不彻底、饲料配比和用药不合理。此外,这几种常见病的发病情况与环境变化也有很大的关系。
- 孟春林姚焱彬杨志鹏
- 关键词：常见病
- 合肥地区山羊球虫种类及感染情况调查被引量：1
- 2012年
- 为了解合肥地区山羊球虫感染情况,给该地区山羊球虫病防治提供理论依据,采用饱和盐水漂浮和重铬酸钾培养法对3个调查点的90只山羊粪样进行了检测。结果表明:合肥地区山羊球虫感染率为88.89%(80/90),共检测到8种艾美耳属球虫,即雅氏艾美耳球虫、槌型艾美耳球虫、颗粒艾美耳球虫、小型艾美耳球虫、阿撒他艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、浮氏艾美耳球虫和苍白艾美耳球虫。
- 杨志鹏李爽李培英
- 关键词：山羊球虫感染率
- 合肥地区山羊消化系统寄生虫感染情况调查被引量：2
- 2012年
- 为了解合肥地区山羊消化系统寄生虫感染情况,给制定该地区山羊寄生虫病防治措施提供理论依据,采用饱和盐水漂浮法和自然沉淀法对3个调查点的90只山羊粪样进行了检测。结果表明:合肥地区山羊线虫感染率为100%;共检获8种线虫卵,即捻转血矛线虫卵、奥斯特线虫卵、食道口线虫卵、毛圆线虫卵、仰口线虫卵、古柏线虫卵、类圆线虫卵和马歇尔线虫卵。
- 李爽杨志鹏李培英
- 关键词：山羊线虫感染率
- 检测猪丹毒杆菌抗体重组SpaA ELISA的建立
- 引言猪丹毒(Swine erysipelas)是由猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)引起的一种人畜共患传染病,其临诊特征主要为高热、急性败血症、皮肤疹块、慢性疣状心内膜炎及皮肤坏死与多...
- 姚焱彬陆萍杨志鹏李郁
- 猪红斑丹毒丝菌制苗用菌株的筛选被引量：5
- 2018年
- 为筛选出致病力强、抗原性优良、遗传性状相对纯一稳定的猪红斑丹毒丝菌制苗用菌株,对42株临床分离的猪红斑丹毒丝菌进行筛选,通过小鼠致死性试验确定4株受试菌株,编号为AEr9、AEr21、AEr31和AEr32。采用改良寇氏法测定受试菌株的半数致死量(LD50),通过微量平板凝集和琼脂扩散试验测定反应原性,基于小鼠免疫攻毒试验测定免疫原性,并通过连续传代培养,分别对第10、20、30代受试菌株进行LD50、沉淀抗体滴度和免疫保护率检测,以确定稳定性。结果显示,AEr9、AEr21、AEr31、AEr32的LD50分别为845、50.3、35.5和10.1 cfu·m L-1,微量平板凝集试验和琼脂扩散试验进一步筛选出反应原性高的菌株AEr21和AEr31。灭活全菌体免疫小鼠,均产生免疫保护力,以AEr31免疫保护力最好。细菌传10代后,两株菌毒力均出现致病力减弱的情况,第10、20、30代菌株致病力趋向于稳定,AEr21引起的兔抗猪丹毒血清沉淀抗体滴度水平更稳定。说明菌株AEr21、AEr31具备毒力强、抗原性好、遗传稳定的特性,可作为猪红斑丹毒丝菌制灭活苗用的候选菌株。
- 吴琼娟杨志鹏姚焱彬陆萍魏建忠孙裴李郁
- 关键词：抗原性稳定性
