杨筱曦
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 供职机构：暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海外及港澳学者合作研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义(P=0.067),表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。
- 高松哲陈剑王彦平肖盼宋子宣阮余霞杨筱曦吴静唐光霞
- 关键词：羊膜间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子增殖力
- 人羊膜上皮细胞的体外培养及标记
- 2011年
- 目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞的生长周期,免疫组化对细胞角蛋白进行鉴定。并用DAPI标记,测1、2周荧光阳性率。结果培养的HAECs多角形,生长分为缓滞期、对数增长期和平台期,近80%处于细胞周期的静止期G0。细胞角蛋白keratin阳性表达。DAPI标记1周标记率为100%;2周细胞形态好,标记率不变,荧光强度减弱。结论该实验方法成功培养人羊膜上皮细胞。DAPI短期标记效果理想。
- 阮余霞周清陈剑王彦平杨筱曦李红唐光霞吴静
- 关键词：人羊膜上皮细胞细胞培养
- 正常人眼角膜上皮细胞的原子力显微镜观察被引量：11
- 2009年
- 应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM形貌图可知,细胞呈长梭形,膜表面布满颗粒状物质,由AFM附带软件IP2.1的线分析及面分析功能,得到细胞膜表面结构的几何参数,包括高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Meant Ht。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,可得出细胞膜的粘弹力、硬度和杨氏模量。AFM能对人眼角膜上皮细胞表面的超微结构清晰地成像并提供更多更确切的表面信息,从另一层面增加对眼角膜上皮细胞的认识。
- 蔡小芳杨筱曦蔡继业邓华
- 关键词：原子力显微镜形貌杨氏模量
- 原子力显微镜对人羊膜上皮细胞的观察被引量：3
- 2010年
- 目的:在单细胞水平上分析人羊膜上皮细胞的超微结构及其机械性能(粘弹力、杨氏模量、硬度等),为进一步认识细胞结构与功能的关系奠定基础。方法:应用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,对人的羊膜上皮细胞进行观察。结果:人羊膜上皮细胞呈椭圆形,由原子力显微镜力位移曲线测量系统,可得粘弹力:1034.375±294.21pN,硬度:1.1815±0.326mN/m,杨氏模量:16.44±4.67Kpa。结论:AFM能对人羊膜上皮细胞表面超微结构清晰地成像及提供更多更确切的表面信息及机械性能,从而增加对羊膜上皮细胞的认识。
- 陈茜杨筱曦蔡小芳蔡继业
- 关键词：人羊膜上皮细胞形貌杨氏模量
- 不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较被引量：10
- 2010年
- 目的:比较不同消化分离方法提取人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)的分离效果,以供选择一种更有效的分离方法。方法:将新鲜羊膜组织分成4片6cm×6cm大小的组织块,采用4种不同方法进行消化分离:第1组:先刮除+胶原酶Ⅱ组;第2组:先刮除+胶原酶Ⅳ组;第3组:先剪碎+胶原酶Ⅱ组;第4组:先剪碎+胶原酶Ⅳ组。对这4组原代培养HAMSCs进行存活数、形态学观察比较,第3代HAMSCs抗原检测及成脂成骨诱导分化实验。结果:第1组和第2组的HAMSCs存活数高于第3组和第4组(P<0.05)。第1组和第2组的HAMSCs成份较第3组和第4组纯净,后2组夹杂着一些团状的人羊膜上皮细胞(HAECs)。抗原结果显示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性,CD31、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性,Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telom-erase结果阳性。成脂成骨诱导分化实验成功。结论:通过先将人羊膜用胰蛋白酶+EDTA消化液消化后,再将HAECs刮除干净,然后剪碎再用胶原酶消化的改进方法对HAMSCs保护较好,较易提取,获取细胞量和纯度均较传统方法高。胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ2种消化酶对HAMSCs的提取影响不大。
- 肖盼陈剑王彦平吴静郭娴吟杨筱曦刘小勇
- 关键词：羊膜间充质干细胞细胞分离
- 体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究
- 2012年
- 目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。
- 姚敏陈剑王文娟张晓玲杨筱曦周清徐锦堂
- 关键词：人羊膜上皮细胞丝裂霉素微环境
- 核心蛋白聚糖对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响被引量：9
- 2012年
- 目的:观察核心蛋白聚糖(DCN)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,并对照观察丝裂霉素C(MMC)对HPF的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:(1)取患者的翼状胬肉体部组织,采用组织块贴壁培养法原代培养HPF。(2)用0.01、0.1、1、5、10 mg/L DCN及MMC分别作用于体外培养的HPF,24 h、48 h、72 h后观察2种药物对HPF形态的改变,2种药物不同浓度分别作用12 h、24 h、48 h后MTT法比较2种药物的作用效果,不同浓度的DCN作用48 h后免疫组织化学染色增殖细胞核抗原(PCNA)法检测细胞生长活性,流式细胞术测定细胞周期时相变化。结果:10 mg/L DCN或1 mg/L MMC在12 h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。1～10 mg/L DCN作用48 h使G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),5～10 mg/L DCN作用48 h使G2/M期和S期百分比(G2/M%+S%)显著下降(P<0.05),实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。1～10 mg/L DCN能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:核心蛋白聚糖能抑制HPF的增殖,阻滞细胞在DNA合成前期。
- 周清郭娴吟杨筱曦陈剑
- 关键词：翼状胬肉成纤维细胞核心蛋白聚糖丝裂霉素
- 共聚焦显微镜下观察糖尿病兔角膜细胞改变被引量：1
- 2012年
- 目的:通过对糖尿病兔角膜连续活体观察,研究糖尿病角膜病理变化。方法:四氧嘧啶静脉注射12只新西兰大白兔,复制糖尿病疾病模型;另外3只为空白对照。用共聚焦显微镜在四氧嘧啶给药前和糖尿病模型建成后4、8、12周对角膜进行观察。结果:随疾病模型建立时间的延长,糖尿病兔角膜出现上皮细胞脱落增多,前、后基质细胞数目减少,内皮多形性细胞增加,内皮数目减少。结论:糖尿病兔角膜病变,上皮细胞、基质细胞、内皮细胞随病程时间延长而减少。
- 何艳花陈剑王彦平周清张婷杨筱曦张静辉
- 关键词：糖尿病角膜共聚焦显微镜
- 人羊膜上皮细胞的诱导分化被引量：6
- 2012年
- 目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进行形态学观察和鉴定;HAECs与兔角膜基质细胞共培养2周,采用CK3+12免疫荧光细胞化学染色鉴定诱导后的细胞;应用AFM分别对共培养前后的人羊膜上皮细胞的表面超微结构进行观察,并与人角膜上皮细胞(HCECs)对比,分析细胞形貌的变化。结果:HAECs体外培养呈铺路石样外观,核/质比率小,连接成片。细胞形态为多角形,角蛋白keratin表达阳性,不表达CK3+12;免疫荧光显示共培养2周的HAECs表达CK3+12;AFM观察,共培养2周后HAECs细胞核中央由山谷样外观转变成类似HCECs的山峰样外观。结论:HAECs可成功进行原代和传代培养,在兔角膜基质细胞诱导培养条件下可向角膜上皮细胞转分化。
- 周清杨筱曦阮余霞蔡小芳陈剑
- 关键词：原子力显微镜人羊膜上皮细胞转分化角膜上皮细胞
